bcl-2癌基因蛋白在鼻咽癌以及单克隆癌细胞裸鼠体内连续传代中的表达

用免疫组织化学Ｓ－Ｐ方法,检测了４０例低分化鼻咽癌、３０例鼻咽癌克隆细胞裸鼠移植瘤、１０例慢性鼻咽炎及８例人胚鼻咽上皮组织石蜡包埋切片中抗凋亡基因ｂｃｌ－２癌蛋白的表达;并进一步检测了鼻咽癌克隆株在裸鼠体内演进中ｂｃｌ－２癌蛋白的表达以及与淋巴结转移之间的关系。结果表明：鼻咽癌及其裸鼠移植瘤组织中ｂｃｌ－２癌蛋白的表达率分别为６２．５％和７０％,慢性鼻咽炎中ｂｃｌ－２癌蛋白的表达率为１０％,人胚鼻咽上皮组织中不表达ｂｃｌ－２癌蛋白,鼻咽癌及其裸鼠移植瘤组织中ｂｃｌ－２癌蛋白的表达率明显高于慢性鼻咽炎组织中（Ｐ＜０．０１）;鼻咽癌克隆株演进中癌细胞ｂｃｌ－２癌蛋白的表达不断升高,其淋巴结转移率亦不断升高。提示：抗凋亡基因ｂｃｌ－２癌蛋白的表达可能和鼻咽癌的发生、演进及转移能力密切相关     

鼻咽癌中VEGF-C的表达及其与颈淋巴结转移的关系

目的探讨血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)在鼻咽癌组织及其淋巴结转移灶中的表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测45例鼻咽癌组织及其28例相应的淋巴结转移灶中VEGF-C的表达。结果VEGF-C在鼻咽癌组织及其淋巴结转移灶中的阳性率分别为42.22%和78.57%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF-C在有淋巴结转移的鼻咽癌组织中的表达(57.14%)明显高于无淋巴结转移组(11.76%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论VEGF-C的表达可能与鼻咽癌的淋巴结转移密切相关。     

EBV融合基因Z2A腺病毒的制备及其在诱导EBV阳性细胞凋亡的应用

目的:构建EB病毒基因LMP2A及BZLF1的融合基因(Z2A)重组腺病毒表达载体,探讨Z2A融合蛋白对EBV+细胞凋亡的作用。方法:利用AdEasy系统构建重组腺病毒载体pAd-Z2A,而后将之转染293细胞(人胚肾细胞)产生重组腺病毒rAd-Z2A。后者用于感染EBV阳性及阴性细胞,RT-PCR、Western-blotting检测Z2A的mRNA和蛋白表达,以及流式细胞术检测其对EBV阳性细胞凋亡的调控。结果:序列测定和酶切实验均证实,Z2A融合基因正确插入穿梭质粒,并成功获得重组腺病毒表达载体pAd-Z2A及重组腺病毒rAd-Z2A。感染rAd-Z2A的NEC靶细胞检测到Z2A的表达。流式细胞术检测发现,与EBV-细胞组及EBV+空白质粒转染组相比,接种rAd-Z2A的EBV+细胞组48h(P0.05)凋亡细胞显著增多,72h时细胞近乎全部凋亡(P0.01)。结论:重组腺病毒rAd-Z2A可有效感染EBV+及EBV-细胞,从而显著促进EBV+细胞凋亡而不影响EBV-细胞,为进一步特异性靶向EBV+肿瘤的基因治疗奠定基础。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂在大肠癌细胞中的表达及其意义

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)在各种大肠癌细胞的表达及其意义。方法:采用Real time PCR检测大肠癌细胞HT29,HCT116,SW1116,SW480等细胞系中uPA的mRNA表达,Western blot检测uPA的蛋白表达水平并进行比较分析。结果:在转录水平,SW480细胞中uPA mRNA表达最高,其次是HT29细胞,另外两种细胞表达相对低。uPA的蛋白表达的情况表明,SW480细胞中uPA的表达较其他组明显高(p0.05),而SW1116细胞中几乎未见uPA的蛋白表达。结论:SW480细胞中uPA的表达较其他细胞系高,这可能与肿瘤细胞转移能力强弱有关。     

真核翻译起始因子5A2(eIF5A2)表达载体的构建与鉴定

目的:构建真核翻译起始因子5A2(eIF5A2)真核表达载体。方法:PCR扩增eIF5A2片段,通过酶切连接将目的片段定向克隆至真核表达载体pIRES2-eGFP的多克隆位点,菌落PCR、质粒PCR及DNA测序对质粒进行鉴定。结果:菌落PCR、质粒PCR及DNA测序鉴定结果均表明载体构建正确。结论:成功构建了真核表达载体,并且命名为pIRES2-5A2,为下一步eIF5A2基因在人类肿瘤中作用的研究奠定了基础。