河蚌C-反应蛋白的分离纯化及其性质研究

用合成的CDPC-Sepharose-6B亲和层析吸附剂一步提纯河蚌C-反应蛋白(CRP)。纯化的CRP在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦电泳鉴定时均显示为一条区带。其等电点(pI)为5.2,分子量约为310,000道尔顿,由六个亚基组成,亚基分子量约为51,000道尔顿。在280nm处的消光系数E_(1cm)~(1mg)/ml=1.2。河蚌CRP与C_多糖(CPS)发生的沉淀反应是钙依赖性的。本文对河蚌CRP的氨基酸组成及其它性质也作了研究。     

河蚌C反应蛋白一级结构分析

经亲和层析纯化的河蚌 C反应蛋白 ( CRP)具有 SDS- PAGE纯度 ,用经改进的双偶联 Ed-man方法测得其 N端残基为谷氨酸 ,而不是高等动物 (人与家兔 ) C反应蛋白 N端的焦谷氨酸 .河蚌 C反应蛋白 N端的一级结构由固相 Edman方法测得 ,依次为 H2 N- E- T- A- Y- S- C- I- T- A- V- ;C端的一级结构由羧肽酶 A降解法测得 ,依次为 - L/V- S- S- T- Y- COOH,也不同于人和家兔的 C反应蛋白 .在河蚌 CRP的胰蛋白酶酶解肽段中 ,其 N端及 C端的结构也得到了证实 .河蚌 C反应蛋白经 V8蛋白内切酶酶解 ,溴化氰裂解 ,肽段经 HPLC反相柱分离 ,共得到 35个肽段 ,所有肽段的氨基酸序列均由气相氨基酸自动分析仪测得 .结合河蚌 C反应蛋白的胰蛋白酶酶解肽段的分析结果 ,其一级结构已初步拼接完成 .在其一级结构中发现有类似于其它 CRP的 Ca2 + 结合部位和磷酸胆碱结合部位 .河蚌 C反应蛋白的分子结构中存在微观不均一性 .从已知河蚌 C反应蛋白的分子特点 ,包括分子量 ,糖基化比例 ,一级结构不均一等特点 ,可以推测它与高等动物的免疫蛋白有许多相关之处 .对于河蚌 C反应蛋白分子结构的分析 ,将有助于免疫系统蛋白的发生 ,进化等方面的研究     

河蚌C-反应蛋白的性质研究

采用亲和层析方法从河蚌体液中可以一步获得纯化的C-反应蛋白(CRP)。本文对河蚌CRP一些性质做了进一步的研究。该蛋白是一个糖蛋白;但对鸡血红细胞并无凝集作用。通过免疫电泳法测得在正常河蚌体液中CRP的含量约为8.3mg/l。经荧光光谱研究发现,该蛋白结合Ca~(2+)和磷酸胆碱(PC)后有构象变化。