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针对马铃薯卷叶病毒外壳蛋白基因第356~358位点“GUC”.设计、合成了一种“锤头状”核酶。将核酶基因克隆在体外转录载体PSPT19的SP6启动子下游;同时将PLRVCPcDNA亚克隆在体外转录载体pSPT18的SP6启动子下游。利用SP6RNA聚合酶分别体外转录,获得核酶分子和靶RNA序列。在41℃保温进行核酶切割反应,检测到预期大小且被切开的两个RNA短片段。 相似文献
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马铃薯卷叶病毒56kD蛋白基因及3‘端非编码区克隆和序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列,设计合成一对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株的RNA为模板,反转录合成了cDNA第一条链,经PCR扩增后克隆于pUC19质粒中,进一步用PCR鉴定,限制酶切分析用序列分析。结果表明,PLRV-Ch56kD蛋白基因由1527个核苷酸组成,编码508个氨基酸,3‘端非编码区由141个核苷酸组成,与国外报道的苏格兰PLRV-S,荷兰PLRV-N,加拿大PLRV 相似文献
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特异切割马铃薯卷叶病毒复制酶基因负链的核酶研究 总被引:6,自引:0,他引:6
根据锤头状核酶的作用模式,设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯地病毒中国分离株(PLRV-Ch)复制酶基因负链RNA的核酶序列,以体外转录的PLRV-Ch复制酶基因负链RNA作为底物,与转录的核酶RNA共同保温,以检测核酶对底和的体外切割作用。实验结果表明,核酸疼 RNA对PLRV-Ch复制酶基因负锭RNA具有特异切割作用。 相似文献
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河套蜜瓜ACC合成cDNA酶片段的克隆和序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)合成酶是高等植物中乙烯生物合成的关键酶。以成熟河套蜜瓜果实的RNA为模板,经反转录和PCR扩增得到预期大小的DNA片段,插入到PUC19的SmaI位眯后转化E.coliJM109,筛选出重组子PHMAS1。离列分析表明获得了627bp的ACC合成酶cDNA片段。与已报道的ACC合成酶基因相应离理比较有很高的同源性。 相似文献
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