谷氧还蛋白的生物学活性及其与人类疾病的关系

谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx),又称巯基转移酶(thioltransferase,TTase),是巯基-二硫键氧化还原酶家族的重要组分。Grx最早由Holmgren发现,在生物界普遍存在,是一种依赖谷胱甘肽(GSH)催化氧化状态的蛋白质二硫键还原为巯基,修复蛋白质活性的小分子酶蛋白。它具有多种生物学活性,在调节机体的氧化还原反应和细胞生长、抑制凋亡方面起重要作用,与人类某些疾病,如心脑血管疾病、白内障、糖尿病、AIDS、自身免疫性疾病、肿瘤和感染等的发生、发展,以及干预治疗有关。     

蛋白质聚集引起的UPS损伤及其对神经变性疾病的作用

泛蛋白－蛋白酶体系统（UPS）在细胞的质量控制上起关键作用,细胞内的蛋白质聚集能抑制UPS的机能,这或许是许多神经变性疾病神经元死亡的原因。     

高糖环境下Trx1过表达对HBZY-1细胞中MMP9表达的影响

硫氧还蛋白1（thioredoxin1,Trx1）是细胞内一种重要的巯基 二硫键氧化还原酶,在细胞内氧化还原状态的调控及抵抗氧化应激损伤过程中发挥重要的作用.为了探讨高糖环境下Trx1过表达对 肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells）HBZY-1中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)表达水平的影响,本实验采用脂质体介导的瞬时转染实现Trx1蛋白过表达;采用RT-PCR和明胶酶谱法检测HBZY-1中MMP9 mRNA及酶活性的变化;通过流式细胞仪检测细胞内活性氧的含量.实验结果显示,高糖状态下,细胞中MMP9的mRNA和酶活性分别在12 h、24 h、48 h时表达增加（P＜0.05）;HBZY-1细胞中转染正义Trx1组,MMP9 mRNA水平及MMP9酶活性,高糖组与正常糖组无明显差异（P＞0.05）,转染反义Trx1组和未转染组中,高糖组均比正常糖组表达增加,差异有统计学意义（P＜0.01）;细胞中活性氧含量,高糖作用12 h、24 h、48 h均较正常糖组明显增多（P＜0.01）,高糖环境下转染正义Trx1质粒较转染反义Trx1质粒,细胞中活性氧含量明显减少,差异有统计学意义（P＜0.05）.实验提示,高糖环境下,Trx1过表达对MMP9的抑制作用是通过减少细胞内活性氧含量来实现的.本实验为Trx1的抗氧化作用提供新的证据,也为继续探讨 Trx1在糖尿病肾病的预防和治疗提供新的思路.     

人细胞色素c基因在大肠杆菌中的克隆和表达及活性测定

通过PCR方法 ,从人胎儿心肌基因组DNA中得到precytc基因 (有 1个内含子 ) ,剔除内含子后 ,得到细胞色素c基因的编码序列 .测序结果表明 ,该基因与GenBank中报道的人细胞色素c基因核苷酸顺序完全一致 .将其插入原核表达载体pET3a的NdeⅠ和HindⅢ位点之间构建pET3a cytc重组质粒 ,并成功转化入E .coliBL2 1(DE3)中 .经IPTG诱导表达后 ,15 %SDS PAGE分析 ,可观察到1条与细胞色素c蛋白分子量相符的电泳条带 .Western印迹结果显示 ,该条带与小鼠抗人cytc单克隆抗体IgG2b发生特异反应 ,证实为人细胞色素c的前体蛋白 .体外使血红素与该前体蛋白结合生成完整的人细胞色素c蛋白 ,其耗氧量在不同浓度具有与反应时间的线性关系 ,为研究人细胞色素c结构和功能关系奠定了基础     

过表达Grx1抑制HEK293T细胞中H2O2诱导的p38MAPK信号通路

谷氧还蛋白1（glutaredoxin1,Grx1）是细胞内一种重要的巯基 二硫键氧化还原酶,在细胞内氧化还原状态的调控及抵抗氧化应激损伤过程中发挥重要作用.为进一步探讨Grx1的抗氧化机制,本实验将重组质粒pcDNA3.1(+)-hGrx1瞬时转染HEK293T细胞,经RT-PCR和Western印迹验证,细胞转染后实现了Grx1的过表达;以不同浓度H₂O₂为损伤因素,建立细胞氧化应激模型,检测过表达Grx1后细胞存活率,丙二醛（MDA）含量,超氧化物歧化酶（SOD）活力和乳酸脱氢酶（LDH）漏出率的变化,观察过表达Grx1后细胞的抗氧化能力;用终浓度100 μmol/LH₂O₂作用于细胞,利用Western 印迹检测120 min内HEK293T细胞中p38MAPK磷酸化水平.实验结果表明,HEK293T细胞过表达Grx1后,缓解了细胞的氧化应激损伤;转染空载体组细胞p38MAPK磷酸化水平在H₂O₂刺激后5 min开始升高,15 min达到最高值,并可维持至120 min左右;而过表达Grx1组细胞p38MAPK磷酸化水平在H₂O₂刺激后各时间段没有明显改变,提示Grx1通过抑制H₂O₂诱导的p38MAPK信号通路激活发挥其抗氧化作用.     

过表达Grx1抑制HEK293T细胞中H2O2诱导的p38MAPK信号通路

谷氧还蛋白1(glutaredoxin1, Grx1)是细胞内一种重要的巯基-二硫键氧化还原酶,在细胞内氧化还原状态的调控及抵抗氧化应激损伤过程中发挥重要作用.为进一步探讨Grx1的抗氧化机制,本实验将重组质粒pcDNA3.1(+)-hGrx1瞬时转染HEK293T细胞,经RT-PCR和Western印迹验证,细胞转染后实现了Grx1的过表达;以不同浓度H2O2为损伤因素,建立细胞氧化应激模型,检测过表达Grx1后细胞存活率,丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活力和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率的变化,观察过表达Grx1后细胞的抗氧化能力;用终浓度100μmol/L H2O2作用于细胞,利用Western印迹检测120min内HEK293T细胞中p38MAPK磷酸化水平.实验结果表明,HEK293T细胞过表达Grx1后,缓解了细胞的氧化应激损伤;转染空载体组细胞p38MAPK磷酸化水平在H2O2刺激后5min开始升高,15min达到最高值,并可维持至120min左右;而过表达Grx1组细胞p38MAPK磷酸化水平在H2O2刺激后各时间段没有明显改变,提示Grx1通过抑制H2O2诱导的p38MAPK信号通路激活发挥其抗氧化作用.     

肌肽,一种神奇的小肽

阐述了国内外关于对肌肽生物学作用研究的最新进展和医学应用前景,详述了肌肽的抗自由基,抗氧化及抗衰老作用的实验依据及可能的作用机制。     

谷胱甘肽化修饰与氧化还原信号转导

蛋白质谷胱甘肽化（S-glutathionylation）是一种重要的翻译后修饰方式,氧化还原信号转导途径的很多相关分子都可受到谷胱甘肽化的调节,尤其是一些重要的蛋白激酶和转录因子。因此蛋白质的谷胱甘肽化修饰日益引起人们的重视。人们推测,谷胱甘肽化可能是细胞内氧化还原信号转导的一种重要机制。     

肾小球系膜细胞中硫氧还蛋白1过表达对基质金属蛋白酶9表达的影响

为进一步探讨硫氧还蛋白1（thioredoxin1,Trx1）过表达对高糖环境下肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶9（Matrix metalloproteinase9．MMP0）表达的影响．采用RT-PCR和明胶酶谱法检测细胞中MMP-9mRNA和酶活性的变化．用脂质体介导瞬时转染法转染正义Trx1及反义Trx1,观察高糖环境Trx1过表达对MMP9表达的影响．结果表明．HBZY-1高糖组与正常糖组比较,MMP9mRNA在12h,24h,48h时表达增加（P〈0．05）,同时酶活性于12h、24h、48h也明显增高（P〈0．01）．转染正义Trx1组细胞,MMP．9mRNA水平及MMP9酶活性,在高糖组与正常糖组差异无统计学意义（P〉0．05）;但转染反义Trx1组和未转染组细胞的MMP9 mRNA水平及酶活性．高糖组均比正常糖组表达增加,差异有统计学意义（P〈0．01）．提示Trx1过表达可抑制高糖环境诱导的肾小球系膜细胞MMP9高表达．     

麻栗坡长叶兰,中国云南兰科一新杂种

报道了产自云南麻栗坡的兰科兰属一新杂种——麻栗坡长叶兰(Cymbidium×malipoense L.J.Chen,H.B.Zhou&Z.J.Liu),对该种的形态特征进行了描述。该种可能是长叶兰(Cymbidium erythraeum Lindl.)与龙州兰(C.eburneum var.longzhouense Z.J.Liu et S.C.Chen)的天然杂交种。本种与长叶兰的区别是:本种的花葶自叶腋发出;萼片和花瓣浅黄绿色,具浅紫红色的纵条纹和斑点;唇盘具黄色褶片;蕊柱浅紫红色;中裂片卵状肾形。长叶兰的萼片和花瓣绿色,有红褐色脉纹和不规则斑点;中裂片心形到剑形;唇盘密被毛。本种与龙州兰的区别是:本种萼片和花瓣浅黄绿色,具浅紫红色的纵条纹和斑点;侧裂片有紫红色条纹;蕊柱浅紫红色。龙州兰萼片和花瓣白色,外表面略带粉红色;唇瓣白色,侧裂片和中裂片具有紫红色斑点。