白眉蝮蛇去整合素Adinbitor的基因克隆、表达及其部分生物学活性

为了寻找去整合素家族的新成员 ,研究其在抗血栓与抗肿瘤等方面的作用 ,从中国白眉蝮蛇毒腺中提取总RNA进行RT PCR扩增 ,获得了 2 19bp的白眉蝮蛇去整合素基因 .测序结果显示 ,其与韩国的同为蝮蛇去整合素的saxatilin的DNA序列同源性为 95 8% ,蛋白质序列同源性为 91 8% ,且蛋白质中含有去整合素的特征模体 RGD .将去整合素基因进行克隆、转化与诱导后 ,得到了该蛋白的可溶性高效表达 .经组氨酸亲和层析纯化 ,获得了分子量为 9kD的均质蛋白 ,并将其命名为adinbitor .活性测定结果显示 ,adinbitor能明显抑制由碱性成纤维细胞生长因子诱导的人脐静脉血管内皮细胞ECV30 4的增殖 ,诱导ECV30 4细胞发生凋亡 ,并且呈剂量依赖性方式抑制ADP诱导的人血小板聚集     

N端缺失突变对核糖核酸酶抑制因子活性的影响

人胎盘核糖核酸酶抑制因子(HRI)是一种存在于细胞浆中的50 kD的酸性蛋白质,富含亮氨酸和半肤氨酸.作为胞浆蛋白可保护细胞不受外来胰RN白s。侵袭.HRI主要结构是由7个富含亮氨酸的重复序列组成,7个亮氨酸重复单位有规律环状排列使N端、c端在空间上较为接近.用PcR方法在HRI cl〕NAS,端去除30个核普酸,并将此缺失突变的HRI的cl〕NA片段构建于质粒pPIcgK,电击转化入毕赤酵母(Pi峨i。 Pasto汀S)Gslls中,进行分泌型表达.对表达产物进行亲和层析纯化.实验结果表明,N端缺失突变的HRI与RN白s。A的亲合力较野生型HRI降低1倍,但依然具有竞争性抑制RNas。A的活性,表明HRIN端10个氨基酸残基缺失后并未丧失其抑制活性.     

双点突变核糖核酸酶抑制因子在毕赤酵母中的表达及对抗氧化能力的影响

人胎盘核糖核酸酶抑制因子(HRI)是一种存在于细胞浆中的50 kDa的酸性蛋白质,富含亮氨酸和半胱氨酸。作为胞浆蛋白可保护细胞不受外来的胰RNase的侵袭。HRI有32个半胱氨酸残基,且多数半胱氨酸残基是成对的并在序列上相连。文章用丙氨酸同时取代cys328/cys329,并将此双突变的HRI的cDNA片段构建于质粒pPIC9K,电击转化入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,进行分泌型表达。对表达产物进行亲和层析纯化及抗氧化活性检测。实验结果表明,双点突变后的HRI对RNase A的亲和力几乎没有影响,但其抗氧化能力却增加7～9倍。此种抗氧化能力的提高可能是因为在cys328-cys329之间不能形成二硫键而稳定了HRI的三维结构所致。