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旨在阐明MAPK的激活在斑马鱼(Danio rerio)卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用。用17α,20β双羟孕酮(17α,20β-DHP)单独作用及17α,20β-DHP与U0126(MAPK上游信号MEK阻断剂)共同作用两种方法,分别培养斑马鱼卵母细胞。采集不同培养时间的卵母细胞,经裂解变性后利用SDS-PAGE电泳和Western Blot蛋白质免疫印迹技术,检测MAPK磷酸化变化,并且观察生发泡破裂(GVBD)发生情况。结果表明,斑马鱼卵母细胞在17α,20β-DHP诱发下6h基本发生GVBD,MAPK活性在2h明显升高,一直到6h都保持在较高水平。而加入U0126后,斑马鱼卵母细胞MAPK活性受到明显抑制,同一时间GVBD发生率均低于对照组斑马鱼卵母细胞。以上结果表明,MAPK参与调节斑马鱼卵母细胞第一次减数分裂的恢复,是斑马鱼卵母细胞GVBD正常发生所必需的。 相似文献
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对培养斑马鱼卵母细胞体外成熟中的两种分离方法进行了比较。结果表明,在卵母细胞的分离过程中,机械分离法获得的完整卵细胞的比例(87.0%)显著多于EDTA-胰酶消化法(33.2%)(P<0.01)。但机械分离法较费时,其平均分离每个卵细胞所用的时间(0.69min)显著多于EDTA-胰酶消化法(0.17min)(P<0.01)。此外,经过18h 27℃培养,机械分离法获得的卵细胞的存活率(88.2%)显著高于EDTA-胰酶消化法所获卵细胞的存活率(60.1%),而采用机械分离法和消化分离法对所获卵细胞的成熟度-GVBD%分别为83.9%、77.5%,无显著差异(P>0.05)。基于数据所示,机械分离法可以获得存活率高、完整性好的卵细胞,但所需操作时间较长;EDTA-胰酶消化法操作便捷,但其分离出的卵细胞的活力较差;两种方法对卵细胞体外培养成熟率的影响无明显差异。 相似文献
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