酵母细胞的电击高频转化

用Ｂｉｏ－Ｒａｄ生产的基因脉冲仪进行酿酒酵母电击转化实验,得到的最适条件为：５ｋｖ／ｃｍ２５μＦ和２００Ω。电击后涂布前的培养时间为２小时。电击后细胞存活率为４６％时,每微克质粒ＤＮＡ得到１０６以上的转化子。用相同的质粒和受体菌进行原生质体法和醋酸锂法比较实验,转化率分别为２×１０４和３．５×１０２个转化子／μｇＤＮＡ。电击转化是最方便易行和高效率的方法。     

酵母完整染色体DNA分子的制备和脉冲电泳分离

分离完整的酵母染色体DNA分子难度较大。本文采用防止断裂措施制备样品获得满意的效果。样品在垂直交替脉冲电场中电泳,可以分离出清晰集中的12条带,达到能将各条带分別从凝胶回收的水平。同时,对各条带的泳动距离进行了测量。用传统的方法则定的酵母染色体长度作参考绘制的曲线表明,在900kb以下的DNA大分子在交替脉冲电场中泳动距离和分子置成直线反比。这种分离技术在遗传工程和分子生物学的研究方面是很有用的。