苏云金杆菌以色列亚种cryIVB基因在E.coli中的高表达

韭菜迟眼蕈蚊（Ｂｒａｄｙｓｉａｏｄｏｒｉｐｈａｇａ）幼虫以取食根部危害韭菜的生长．为了研究有效的生防制剂,采用ＤＮＡ聚合酶链式反应方法,从苏云金杆菌以色列亚种（Ｂｔｉ）得到３．５ｋｂ的开放阅读框架（ＯＲＦ）,其包括Ｂｔｉ杀虫蛋白基因ｃｒｙＩＶＢ的结构基因和部分上游启动区．将结构基因亚克隆到高表达载体ｐＱＥ５２中,构建了高表达质粒ｐＱＥ５２Ｂ．在Ｅ．ｃｏｌｉＳＧ１３００９（ｐＲＥＰ４）中,经ＩＰＴＧ诱导,１３０ｋＤ的蛋白表达量约占细胞总蛋白的７．９％,其对韭菜迟眼蕈蚊三龄幼虫具有较强的毒杀作用．为进一步利用ｃｒｙＩＶＢ基因,构建生防工程菌株打下了基础     

外源蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中高效表达的策略

高效表达外源蛋白,在生物制药中有重要意义.中国仓鼠卵巢细胞（Chinese hamster ovary cell）是表达外源蛋白的最佳真核表达系统之一.影响外源蛋白在CHO细胞表达的因素甚多,主要包括载体、宿主细胞和外源基因几方面.深入了解和灵活运用它们之间的关系,有助于获得外源基因在CHO细胞中的高效表达.     

韭菜根际荧光假单胞菌株的分离和初步研究

从韭菜（Alliumtuberosum）根内分离出荧光假单胞菌PseudomondsfluorescentDEI。用筛选出的具有利福平抗性的自发突变株P．F．NKDE2通过拌种和拌培养土回接韭菜,结果表明：P．F．NKDE2能定殖于韭菜根表、根内和根固土中．播种前用P．F．NKDE2拌种,对韭菜生长有明显的促生效果;与对照相比,幼苗的单株根重、主根长、单株叶重及子叶长度四项指标均有显著差异。     

Tn10介导的BticryIVA基因在荧光假单胞菌染色体中的整合及表达

苏云金杆菌以色列亚种的杀虫晶体蛋白基因ｃｒｙＩＶＡ被亚克隆到自杀型转座子质粒载体ＰＬＯＦ／Ｋｍ的Ｔｎ１０中,构建了转座子质ｐＬＦ９７Ａ。     

Tn10介导的Bit cryIVA基因在荧光假单胞菌染色体中的整合及表达

苏云金杆菌以色列亚种的杀虫晶体蛋白基因cryIVA被亚克隆到自杀型转座子质粒载体pLOF／Km的TN10中,构建了转座子质粒PLF97A。通过电转化／转座作用,cryIVA随Tn10转座并整合到荧光假单胞菌FP．DE2染色体中,构建了工程菌株FP．DE202。Southernblotting验证了cryIVA在FP．DE202中整合在不同的位点。Westernblotting证明了cryIVA在F．P．DE202中得到了表达,其产物对双翅目害虫韭菜迟眼蕈蚊的3龄幼虫有较强的毒杀效果。