猴免疫缺陷病毒SIV核心蛋白基因在大肠杆菌中表达的研究

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）,直接从ＳＩＶ感染的猴艾滋病（ＳＡＩＤＳ）模型猴的外周血淋巴细胞总ＤＮＡ中扩增出７６７ｂｐ的ＳＩＶ核心蛋白Ｐ２７基因片段。扩增产物经ＥｃｏＲＩ及ＳａｌＩ双酶切后,克隆入相同酶切的表达质粒ｐＢＶ２２０中,获得含ＳＩＶ核心蛋白基因片段的重组质粒ｐＢＶＳＧ,并进行ＤＮＡ序列分析。用该重组质粒转化大肠杆菌ＤＨ５ａ经筛选、增殖及４２℃温度诱导,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明外源基因表达蛋白含量占菌体总蛋白１４．５％,Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ证实表达产物能被ＳＩＶＰ２７单克隆抗体及ＳＡＩＤＳ模型猴血清中特异性抗体识别。     

SIV模型猴石蜡包埋淋巴结组织DNA的提取及病毒基因检查

从取材于３只ＳＩＶ感染治疗猴和４只ＳＩＶ艾滋病模型猴治疗前后的１１份石蜡包埋淋巴结活检组织中提成基因组ＤＮＡ,分别用ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ方法检测ＳＩＶ病毒基因,ＰＣＲ共检出１０份阳性,巢式ＰＣＲ检测１１价样品均阳性,而同期采样的猴外周血标本病毒分离仅３份阳性,ＰＣＲ扩增产物的特异性用限制性内切酶酶切反应得到证实。实验说明,从淋巴结组织中检测ＳＩＶ的病毒基因较外周血病毒分离更能真实地反映病毒感染状况,本研究将对全面和正确评价艾滋病药吻和疫苗治疗效果提供帮助。     

猴免疫缺陷病毒（SIV）猴模型的建立

应用ＳＩＶｍａｃ毒株感染中国恒河猴１３只,感染剂量为病毒液的１０－１～２×１０－５;感染食蟹猴４只,感染剂量为１０－２。感染后２周出现各种症状和体征如皮疹,浅表淋巴结肿大,脾肿大,血象白细胞总数下降,出现异常淋巴细胞和中性白细胞。感染后期Ｔ４下降,Ｔ４、Ｔ８比例倒置等。从外周血淋巴细胞和血浆分离病毒阳性,血清抗体上升。淋巴结组织切片呈规律性改变,即淋巴滤泡增生－滤泡耗竭－淋巴组织耗竭或逐渐恢复。感染后２．５个月有急性死亡病例,以后呈散在死亡例,尸检还发现机遇性感染如肺寄生虫,肺、肝巨细胞病毒感染等。     

两株SIV_(mac)的滴定和特性

SIVmac251的MID100为32TCID,而SIVmac239的MID100高于320TCID。体内滴定感染成功的5只猴（SIVmac2513只,SIVmac2392只）和用ZMID100SIVmac251感染的7只猴感染后有全身淋巴结肿大,并出现规律性的血浆病毒血症和抗体反应。SIVmac251感染的7只恒河猴和2只食蟹猴的淋巴结和脾脏的病理组织学检查,显现规律的SIVmac感染后的组织学变化。上述结果表明两株SIVmac均能诱发SIVmac感染猴的系列表现和变化,可应用于抗艾滋病药物猴体疗效的评价。     

猴艾滋病的发病和治疗机制初步研究

AIDS是人类严重免疫缺损和自身免疫病的病毒性传染病为害严重。我们通过200多只SIV感染猕猴,进行了发病机制的病理学和免疫学的探讨,获得如下资料。1.猴SIV急性感染:SIV进入CD4+T淋巴细胞进行了复制释放。血浆病毒血症上升。一些带SIVT淋巴细胞进到淋巴组织潜伏。同时SIV抗体上升。CD4+T淋巴细胞减少,淋巴结滤泡生发中心B细胞高度增生。SIV感染2-3个月后,病毒血症略下降,CD4+T淋巴细胞数回升,SIV抗体上升,淋巴结生发中心细胞增生,这一时期淋巴结病理为淋巴结增生病变。2.无症状期:临床上潜伏期,病毒血症维持在较低水平。但C…     

恒河猴Fas基因的克隆

目的研究猴艾滋病发病机制中细胞凋亡的作用,克隆凋亡相关基因Ｆａｓ的ｃＤＮＡ序列。方法从恒河猴腹股沟淋巴结中提取总ＲＮＡ,根据人的Ｆａｓ ｃＤＮＡ序列设计上、下游引物,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出目的ｃＤＮＡ片段,将这一片段克隆到ｐＧＦＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体中,筛选阳性克隆并进行序列测定。结果首次克隆了恒河猴Ｆａｓ基因,编码序列为１００５ ｂｐ,将其序列提交ＧｅｎＢａｎｋ,收录号为ＡＹ００７５７２。结论克隆的新序列与ＧｅｎＢａｎｋ已收录的人和食蟹猴的Ｆａｓ基因在编码序列的长度上稍有区别,人的编码序列为１００８ｂｐ,食蟹猴的为９９６ ｂｐ。     

三种猕猴属动物Fas基因的克隆

从腹股沟淋巴结或血液中提取总RNA,根据人的Fas基因的cDNA序列设计上、下游引物,通过RT-PCR扩增出三种猕猴属动物Fas基因的cDNA片段,将片段克隆到pGEM-TEasy载体中,筛选阳性克隆并进行序列测定。恒河猴Fas基因编码序列为1005bp,GenBank收录号为AY007572;熊猴的编码序列为996bp,GenBank收录号为AF326208;短尾猴的编码序列为933bp,GenBank收录号为AF332357。对五种已知的灵长类动物的Fas基因进行序列比较,结果表明Fas基因的保守区域具有高度保守性,而处于编码序列中间的一段低复杂度序列在不同的物种间具有很高的变异性。 Abstract：Total RNA were extracted from inguinal lymph nodes o r blood.The Fas cDNA fragments of three macaca species were obtained by RT-P CR using the upper and low primers according to the Fas gene of human,and th en cloned into pGEM-T Easy vector.The positive clones were sequenced.For the fir st time we cloned the Fas genes of Macaca mulatta,Macaca assamensis and Macaca arctoides,the encoding sequences are 1005bp, 996bp and 933bp, respect ively.Finally we compared the sequences of Fas genes among five primate spec ies that have already been submitted to GenBank.The results confirmed the conser vation of regions in two ends of Fas genes,and the high variability of a low complexity region in middle of every Fas gene.