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1.
枯草芽孢杆菌抗菌蛋白X98Ⅲ的纯化与性质   总被引:43,自引:3,他引:40       下载免费PDF全文
枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BS-98是一株能强烈抑制苹果轮纹病菌(Physalosporapiricola)等植物病原真菌的拮抗菌株。BS-98菌株培养液经硫酸铵分级盐析、SephadexG-100柱层析和DEAE-纤维素(DE32)柱层析后分离纯化出一种抗菌蛋白,命名为X98Ⅲ。蛋白电泳分析结果表明,此蛋白分子量为59000,等电点为4.50.醋酸纤维膜电泳后经特异染色证明X98Ⅲ含糖及胀。用DNS法测其含糖量为6%。此蛋白对热稳定,对蛋白酶部分敏感。氨基酸组分分析表明,该蛋白含11种不同氨基酸,尤富含谷氨酸和半胱氨酸等,而缺少天冬氨酸等。纯化后的X98Ⅲ对苹果轮纹病菌、芦笋茎枯病菌等有很强的抑制作用。X98Ⅲ的抑菌机理主要是溶解细胞壁,造成菌丝畸形、孢子不发芽或发芽异常。  相似文献
2.
3.
蛋白的色谱复性及同时纯化   总被引:26,自引:2,他引:24       下载免费PDF全文
对近年来新发展的用液相色谱(LC)进行蛋白质复性及同时纯化的方法做了评述,详细介绍了蛋白质在4种液相色谱上的复性及同时纯化的方法、设备和影响因素,并对各自的优缺点进行了比较,为色谱法作为研究蛋白质折叠及用于基因工程生产治疗蛋白质的复性及同时纯化技术的进一步应用提供依据。  相似文献
4.
五龄家蚕若干组织器官蛋白质数据库构建   总被引:19,自引:0,他引:19  
钟伯雄 《遗传学报》2001,28(3):217-224,T002
为构建家蚕蛋白质数据库,达到从蛋白质水平研究基因的表达及表达产物的加工修饰的目的,采用五龄家蚕休体壁、中肠和脂肪为材料获取蛋白质样品,用蛋白质双向电泳技术分离、纯化蛋白质,对其中的40个蛋白质斑点进行了氨基酸序列分析及同源性检索,发现其中58.5%的蛋白质与果蝇的有关蛋白质具有较高同源性,36.5%与其他生物的蛋白质具有较高同源性,只有5%与家蚕已知蛋白拷贝产高同源性,研究发现有27个蛋白质的N-末端氨基酸序列在家蚕中是第一次被检测到,并通过互联网向SWISS-PROT数据库进行了登录。研究证明利用蛋白质数据库的结果,可以得到基因表达及其产物修饰的信息。  相似文献
5.
用硫酸铵分级沉淀、离子交换(DEAE-Sepharose)和分子筛(S-200)的方法,从食用菌杨树菇的子实体中分离提纯了一种具有抑制烟草花叶病毒(TMV)侵染活性的蛋白质,称作为AAVP。用SDS-PAGE、IEF等方法分析AAVP。结果均呈现为单一条带。经SDS-PAGE测定其亚基的相对分子质量为15.98kD,IEF-PAGE计算其等电点为3.75。氨基酸组成的分析结果表明,AAVP中不含Cys,含有少量的His和Met,而富含酸性氨基酸。AAVP是一种N端焦谷氨酰环化封闭的蛋白质,经N端去封闭后测得N端氨棋酸序列为QGVNIYNIVAGA。当AAVP的浓度为200mg/L时,对TMV的抑制率为84.32%。而它对供试的3种植物病原真菌:绿色木霉、香蕉炭疽菌和甘薯割病菌的菌丝生长没有任何抑制作用。  相似文献
6.
银杏种仁中抗菌蛋白的纯化及性质   总被引:18,自引:2,他引:16  
银杏果仁提取上清液经硫酸铵沉淀、CM—52离子交换柱层析和Sephadex G-50凝胶过滤层析后分离纯化出一种抗菌蛋白。SDS—PAGE分析结果表明,此蛋白分子量为13000,对热稳定;氨基酸组分分析表明,该蛋白含18种不同氨基酸,尤富含丙氨酸(Ala)和精氨酸(His)等,缺乏半胱氨酸(Cys);纯化的蛋白对黄瓜镰刀孢菌(Fusarium oxysporum)、瓜类炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)、小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis)等真菌有很强的抑制作用,而且对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia Coli)等细菌也有一定的抑制作用。  相似文献
7.
利用动物乳腺生物反应器生产药用蛋白   总被引:18,自引:0,他引:18       下载免费PDF全文
动物乳腺生物反应器是利用动物乳腺特异性启动子调控元件指导外源基因在乳腺中特异性表达,并从转基因动物奶液中获取重组蛋白。应用动物乳腺生物反应器生产药用蛋白具有生产方式简单,产量大,蛋白能进行翻译后修饰等优点,是具有广阔前景的生物医药产业。本文仅就动物乳腺生物反应器的建立、检测、目的蛋白的分离纯化以及存在的问题等作一综述。  相似文献
8.
一种新杨树菇(Agrocybe aegerita)凝集素的纯化及生化特性   总被引:14,自引:0,他引:14       下载免费PDF全文
 用硫酸铵分级沉淀、离子交换和分子筛等方法 ,从食用菌杨树菇子实体中分离纯化了一种凝集素 ,称作为AAVP(Agrocybeaegeritaantiviralprotein) .经SDS PAGE测定其亚基的相对分子质量为15 8kD ,凝胶过滤分析分子量为 32kD .IEF PAGE计算其等电点为 3 8.AAVP不含糖 ,是一种N端焦谷氨酰环化封闭的蛋白质 ,经N端去封闭后测得N端氨基酸序列为QGVNIYNIVAGA ,用胰蛋白酶消化后得到一大片段 ,测定的氨基酸序列为PDGPWLVEK .AAVP可以凝集供试的 12种动物血和3种血型人血的血红细胞 ,但对各种血红细胞凝集滴度不同 .糖抑制实验表明 ,在供试的 18种单糖和 3种糖蛋白中 ,只有猪胃粘蛋白强烈抑制AAVP的凝血活性 .AAVP具有较好的热稳定性 ,能够忍受极端的酸碱条件 .AAVP的凝血活性不受Ca2 + 、Mg2 + 、Zn2 + 等二价阳离子的影响 .抗肿瘤活性检测表明 ,AAVP对胃癌细胞株SGC 790 1,MGC 80 3,BGC82 3及人急性白血病细胞株HL 6 0有明显的抑制作用 .AAVP对小鼠腹腔注射的半致死剂量为 15 85mg kg .  相似文献
9.
We have produced in transgenic maize seed the glycoprotein, avidin, which is native to avian, reptilian, and amphibian egg white. A transformant showing high-level expression of avidin was selected. Southern blot data revealed that four copies of the gene are present in this transformant. The foreign protein represents >2% of aqueous soluble extracted protein from populations of dry seed, a level higher than any heterologous protein previously reported for maize. In seed, greater than 55% of the extractable transgenic protein is present in the embryo, an organ representing only 12% of the dry weight of the seed. This indicates that the ubiquitin promoter which is generally considered to be constitutive, in this case may be showing a strong tissue preference in the seed. The mature protein is primarily localized to the intercellular spaces.An interesting trait of the transgenic plants expressing avidin is that the presence of the gene correlates with partial or total male sterility. Seed populations from transgenic plants were maintained by outcrossing and segregate 1:1 for the trait. In generations T2–T4, avidin expression remained high at 2.3% (230 mg/kg seed) of extractable protein from seed, though it varied from 1.5 to 3.0%. However, levels of expression did not appear to depend on pollen parent or growing location. Cracked and flaked kernels stored at –29°C or 10 °C for up to three months showed no significant loss of avidin activity. Commercial processing of harvested seed also generated no apparent loss of activity. The protein was purified to greater than 90% purity by affinity chromatography after extraction from ground mature maize seed. Physical characterization of purified maize-derived avidin demonstrated that the N-terminal amino acid sequence and biotin binding characteristics are identical to the native protein with near identical molecular weight and glycosylation. This study shows that producing avidin from maize is not only possible but has practical advantages over current methods.  相似文献
10.
嗜水气单胞菌S蛋白的提纯及特性分析   总被引:12,自引:0,他引:12       下载免费PDF全文
电镜观察表明,嗜水气单胞菌J-1株具有S层结构,在菌体外层呈晶格样规则排列。菌体经酸性甘氨酸缓冲液处理,S层从菌体上脱落,离心上清液即为粗提S蛋白。进一步经Sephadex G200凝胶层析和DEAE-纤维素离子交换层析纯化,获得的S蛋白呈单一多肽,分子量为51500。氨基酸组分分析结果表明,S蛋白含有天门冬氨酸等15种氨基酸,其中丙氨酸等疏水性氨基酸占36.8%。生物学活性显示,S蛋白对Vero细胞有轻微的细胞毒性,但没有溶血性,对鲫鱼和小鼠也无致死作用。用自制的嗜水气单胞菌J-1株S蛋白抗血清PM及PR和国外提供的嗜水气单胞菌TF7株S蛋白抗血清PF1分别作免疫转印和间接ELISA,检测来源于不同地区和不同动物种类的20株嗜水气单胞菌的S蛋白。结果表明,S蛋白的抗原性存在着菌株间的差异。另外,某些菌株不具有S层。  相似文献
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