MMP-9基因多态性与缺血性脑卒中发病及预后的相关性研究

目的:研究基质金属蛋白酶9(MMP-9)基因多态性与缺血性脑卒中(IS)发病及预后的相关性,为IS的防治提供新的理论依据。方法:选取治疗的IS患者100例,根据TOAST分型标准分为大动脉粥样硬化型(LAA)组41例,小动脉阻塞型(SAO)组59例,并选取健康体检者40例作为对照组,采用PCR-RFLP法检测各组MMP-9基因C1562T、R279Q多态性,并对IS患者进行3个月的随访,采用Logistic回归分析C1562T、R279Q多态性与IS患者预后的相关性。结果:LAA组、SAO组MMP-9基因C1562T位点T等位基因、C/T+T/T基因型频数均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),LAA组、SAO组C1562T位点C等位基因、C/C基因型频数及R279Q位点等位基因和基因型频数与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);Logistic回归分析显示,MMP-9各型别基因与预后无明显相关性(P0.05)。结论:MMP-9基因C1562T的T等位基因是IS发病的穿易感基因之一,但MMP-9基因多态性与IS患者的预后并无明显相关性。     

植物基因转移方法

基因工程的诞生和发展是与基因转移方法的出现和发展分不开的。为了实现不同的目标，就需要各种各样的基因转移方法。一般来说，向植物中转移基因，存在的困难要比微生物和动物多些；但由于植物基因工程对作物改良的重要性，近年来获得了迅速发展，各种基因转移方法层出不穷。本文系统地介绍了现有的植物基因转移方法。     

小麦丛矮病毒基因组5‘端尾随区的克隆及序列分析

根据已知的弹状病毒聚合酶Ｌ蛋白分子中一段高保守的８个氨基酸顺序ＥＧＬＲＱＫＧＷ，合成简并的２４核苷酸引物，用锚定ＰＣＲ方法从小麦丛矮病毒（ＷＲＳＶ）基因组中扩增出包含全长５‘尾随区和部分Ｌ蛋白基因的ＤＮＡ片段，并克隆到ｐＵＣ１９Ｔ载体上，经测序，获得全长的ＷＲＳＶ基因组５’尾随区顺序。     

利用磁珠构建稻瘟菌cDNA文库

本文以稻瘟菌菌丝体为材料提取RNA,[目的]改进张学敏等人的方法,通过磁珠构建稻瘟菌cDNA文库,并用于下一步研究稻瘟菌与水稻之间的互作关系.[方法]通过共价键连接的寡聚oligo(dT)磁珠纯化mRNA,并以磁珠上的oligo(dT)为引物引导第一链cDNA的合成,再利用末端转移酶加尾法合成第二链cDNA.构建过程中避免使用限制酶和连接接头.[结果]用此方法构建的文库容量为8.9×107cfu,滴度为8.9×106 cfu/mL,随机挑取的25个克隆插入片断平均大小达到1380bp.[结论]实验结果表明用改进的方法可构建高质量的cDNA文库,并且方便快捷,所用材料少,构建时间短,利于大规模的功能基因分析.     

应用DNA芯片鉴定HPV18 E6-siRNA诱导HeLa 细胞凋亡的分子机制

高危型人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）的E6基因在宫颈癌的发生中起关键作用，特异siRNA能有效抑制宫颈癌HeLa 细胞内HPV18 E6基因的表达，诱导肿瘤细胞凋亡.为进一步探讨HPV18 E6-siRNA诱导HeLa 细胞凋亡的分子机制，针对HPV18-E6基因设计siRNA序列，利用人源U6启动子为模板，经PCR表达框架法体外扩增，转染宫颈癌HeLa细胞抑制HPV18 -E6基因表达，从而诱导肿瘤细胞凋亡.对转染前后HeLa细胞总RNA样品进行荧光标记后，与Agilent Human 1A寡核苷酸芯片杂交、扫描、数据分析及标准化处理，确定表达差异的基因并经荧光定量PCR对部分基因进行验证，结合PANTHER数据分析系统，将这些基因按照生物学功能进行归类，查阅GenBank数据库及相关文献，对其结果进行深入分析及讨论.在检测的18 716个基因和EST中，共筛出差异表达基因359个，其中307个基因表达上调，52个基因表达下调，主要包括细胞周期相关基因CCNG1、p21；凋亡相关基因CASP4、CASP6、IGFBP3、DFFA；泛素蛋白酶解途径相关基因E6-AP、UBE2C；角化细胞分化相关基因KRT4、KRT6E、KRT18；抑癌基因RECK、VHL等.研究结果表明，HPV18 -E6基因抑制引起的细胞凋亡效应主要是通过P53信号途径和泛素蛋白酶解信号途径调节细胞周期相关基因和凋亡相关基因的表达，从而抑制HeLa细胞增殖、促进细胞凋亡.同时，抑癌基因的激活，角化细胞分化和免疫相关基因的表达上调，都说明了E6抑制后肿瘤细胞恶性转化程度的下降.     

小立碗藓冷驯化相关基因Pp-LIM only A的克隆与表达

植物经历冷驯化后抗冻能力会有所提高.利用cDNA-AFLP方法从经过0℃冷驯化处理的小立碗藓中筛选到差异表达的Pp-LIM only A基因片段.cDNA和基因序列比较分析表明此基因含有7个内含子和8个外显子,编码由345个氨基酸残基组成的蛋白质,其中只含有一个LIM结构域,与动物蛋白质PDZ/LIM家族有很高的同源性,推测是一种新的植物LIM蛋白.实时定量PCR分析显示其在冷驯化6 h后表达量即开始明显增加,并随着冷驯化时间的延长表达量大幅度提高.Pp-LIM only A蛋白可能通过LIM结构域对细胞骨架的作用而影响了细胞膜的稳定性,本研究对其在抗冻中的作用作了进一步讨论.     

亚抑菌浓度头孢西丁对耐药质粒接合转移的影响

目的探讨亚抑菌浓度头孢西丁对耐药质粒接合转移的影响,研究病原菌耐药性播散的产生机制。方法采用聚合酶链反应（PCR）分析临床分离的63株产ESBLs肺炎克雷伯菌株SHV型β-内酰胺酶编码基因。质粒接合转移试验采用肉汤接合法。研究不同亚抑菌浓度头孢西丁（0、1、0.5、0.25、0.125μg/ml）和不同作用时间（2、4、6、8、10、12 h）下临床产ESBLs肺炎克雷伯菌株供体菌与受体菌E.coliC600接合转移频率的变化。结果63株临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌株有41株扩增出SHV型基因,阳性率为65.08%。随着亚抑菌浓度头孢西丁作用时间的增加,接合转移频率有随之增加的趋势。在相同作用时间下,头孢西丁浓度0.125μg/ml作用下的接合转移频率高于其他亚抑菌浓度的作用。结论应合理使用抗菌药物,减少抗菌药物的选择性压力,防止耐药细菌传播。     

雄性Fmr1基因敲除小鼠血液生理生化指标及性激素水平的比较研究

目的比较雄性Fmr1基因敲除小鼠和FVB小鼠血液生理生化值和血清性激素水平，探讨Fmr1基因对动物生长发育和生殖生理等方面的影响。方法分别测定血液生理指标、血清生化指标、血清电解质和血清E2、LH、FSH、T和PRL的含量，并进行统计学处理和分析。结果雄性Fmr1基因敲除小鼠与FVB小鼠比较，血液生理指标中MCV和PCT有显著差异（P〈0．05），而RBC、HCT、HGB、MCH和WBC等无显著差异（P〉0．05）；血清生化指标中除TBIL、[IP^3＋]、[Mg^2＋]（P〈0．05）和AIP、BUN（P〈0．01）外，TPROT、GLB、A／G、BUN、CREAT、[K^＋]、[Na^＋]等项均无显著差异（P〉0．05）。性激素水平E2、LH值差异无显著性（P〉0．05），FSH、T、PRL差异极显著（P〈0．01）。结论Fmr1基因可影响动物的某些生理生化及激素水平。     

小麦eIF3c基因片段的克隆及序列分析

根据真核翻译起始因子eIF3c的保守序列,搜索小麦EST,由拼接的序列设计引物,从普通小麦‘川麦107'幼苗总RNA中克隆出1102bp的小麦eIF3c1基因片段命名为WeIF3c1.序列分析表明,该片段推断的氨基酸序列与两个拟南芥、水稻、甜樱桃、人类、线虫、老鼠等物种的真核翻译起始因子eIF3c相比较同源性分别为69、61%、85%、72%、38%、36%和38%.     

番茄的耐盐性与耐盐转基因番茄

由于土壤盐渍化的日益加剧导致作物大量减产,通过基因工程的方法将耐盐基因转入作物,培育耐盐作物新品种是开发利用盐碱地的一种经济、有效的手段.番茄是一种栽培广泛,具有重要经济价值的蔬菜,又是基因工程的模式生物之一,开展番茄耐盐性研究具有重要意义.分析了番茄的耐盐性和转耐盐基因番茄的研究现状.