镉对泥蚶抗氧化酶系统的影响

研究了不同浓度的重金属Cd2+对泥蚶抗氧化酶活性的影响.设置了四组镉的梯度(0、0.025、0.05 和0.1 mg·L-1),分别在第12、24、48、96和144 h对各组织取样,用泥蚶内脏团与鳃制成酶样,对非特异性免疫抗氧化酶SOD、CAT、GST、GPX进行指标测定.结果表明,在开始的12～24 h,中低浓度组...     

Use of randomly amplified polymorphic DNA analysis to differentiate isolates of Vibrio parahaemolyticus from cockles (Anadara granosa)

A total of 35 Kanagawa-negative strains of Vibrio parahaemolyticus isolated from cockles (Anadara granosa) were investigated by randomly amplified polymorphic DNA fingerprinting with three primers and their plasmid profiles. Eighteen strains carried small plasmid(s) of 2.4 to 7.3kb that enabled the V. parahaemolyticus to be grouped into eight plasmid patterns. The three primers generated polymorphisms in all 35 strains of V. parahaemolyticus tested, producing bands ranging from 0.25 to 3.9kb. The RAPD profiles revealed a high level of DNA sequence diversity within the Vibrio parahaemolyticus strains tested, and that cockles in the study area are populated by genetically polymorphic strains of V. parahaemolyticus.     

基于线粒体COI基因序列探讨泥蚶的遗传分化

采用PCR技术对我国沿海地区7个泥蚶群体的线粒体COI基因部分序列进行了测定和遗传分析。在来自7个群体的38个泥蚶样本均得到660 bp的COI基因片段序列,共103个多态位点,组成17种单倍型;数据分析表明：7个群体形成了二大类群：福建以北(包括福建)的5个群体（江苏盐城、浙江奉化、浙江乐清养殖和自然群体、福建福鼎）形成一个类群,类群内的遗传距离为0.0016;福建以南的类群（广东湛江、海南海口）形成一个类群,遗传距离为0.0006;二个类群之间的遗传距离为0.1529,表现为高度的分化。因此我国沿海泥蚶已分化形成福建以南和以北二大类群,二大类群之间的遗传分化已达到亚种水平。     

泥蚶(Tegillarca granosa Linnaeus)血淋巴液凝集素的分离纯化及其性质研究

泥蚶是一种重要的海产经济贝类,其血淋巴液经硫酸铵二步分级沉淀后,再经Sephadex G- 100凝胶过滤和Sepharose 4B亲和层析纯化制得泥蚶血淋巴液凝集素。经测定,该凝集素分子量约为123Kda,为两个亚基的蛋白质,其相对分子量分别为15 KDa和16 KDa,分子中含5．02％的糖。在氨基酸组成中,天门冬氨酸(Asp)含量最高,其次是谷氨酸(Glu)和组氨酸(His),不含蛋氨酸(Met)。泥蚶血淋巴液凝集素对多种天然或经酶修饰的人或动物红细胞具有不同的凝集作用,其中对兔红细胞的凝集活性最大。半乳糖和乳糖对其凝集活性具有抑制作用。凝集活性依赖于Ca2 ,在pH7．0较稳定,热稳定性不高,在30℃-70℃时凝集效价由原来的25下降为21,当温度超过80℃以后,凝血活性完全丧失。     

泥蚶谷胱甘肽过氧化物酶基因的全长克隆与表达分析

为了探讨谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GPx）基因在泥蚶应激反应中的作用,研究采用RACE技术克隆了泥蚶GPx基因（TgGPx）cDNA全长,其cDNA全长1195 bp,包含45 bp 5’-UTR,639 bp开放阅读框（ORF）和511 bp 3’-UTR。ORF编码212个氨基酸残基,预测蛋白分子量为24.3 kD,理论等电点为8.33,其中,第53个氨基酸U是由密码子202UGA204编码的硒代半胱氨酸（Se-Cys）。在3’-UTR上存在一段序列,形成一种独特的茎环结构,即SECIS元件。SECIS元件在密码子UGA翻译为Se-Cys的过程中起决定性作用。通过序列比对与系统进化分析,发现软体动物中也存在不同种类的GPx基因,TgGPx与GPx1和GPx2的亲缘关系较近。利用qRT-PCR技术对TgGPx在泥蚶的不同组织以及重金属刺激后的表达量进行分析,结果表明,TgGPx在泥蚶的5个组织中都有表达,但存在组织特异性,在外套膜中的表达量最高,在血细胞中的表达量最低。用重金属铅、铜、镉刺激后,TgGPx在肝胰脏中的表达量显著升高,表明TgGPx在维护机体正常功能方面及泥蚶抵御外界刺激的应激反应中发挥作用。     

福建南北泥蚶种内分化的RAPD分析

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对泥蚶在福建以南(广东汕头和湛江)和福建以北(浙江温岭和韩国)种群(分别合称南方类群和北方类群)做了遗传分化研究。由筛选出的20个随机引物共获得103个清晰可辨的RAPD标记,扩增片段长度在250—2500bp。汕头种群与湛江种群,韩国种群与温岭种群之间的最小遗传距离分别为0．0612和0．0692,而南、北类群间的遗传距离却在0．3261-0．4511。类群间近交系数也大于类群内。NJ和UPGMA法构建的系统树均显示汕头种群、湛江种群首先聚在一起,再与温岭种群和韩国种群聚合,说明两个类群发生了较明显的遗传分化,估计与地理隔离有关。     

5个泥蚶群体遗传多样性的RAPD分析

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术 ,对 5个泥蚶群体的遗传多样性进行了研究。在选择的 2 0个随机引物中共检测到 15 4个扩增片段 ,长度在 30 0bp～ 2 30 0bp之间 ,每个个体扩增条带在 1～ 11条不等。利用Popgen3.2和PHILIP统计软件 ,获得实验数据 ,确立了 5个群体间的亲缘关系。结果表明 :( 1)泥蚶的 5个地理群体分化不明显 ,没有形成不同的地理种群 ;( 2 )聚类分析显示 ,韩国群体与浙江群体亲缘关系最近 ,然后依次为山东群体和福建群体 ;( 3) 5个群体无论是在多态位点比例还是在平均遗传杂合度上都处于较高水平 ,说明泥蚶当前种质资源状况良好 ,遗传多样性水平较高 ,泥蚶养殖有很好的发展前景 ;( 4)与韩国野生群体相比 ,其他 4个泥蚶群体在多态位点比例和遗传平均杂合度上都有不同程度的降低 ,表明人为等因素已经开始影响到泥蚶的种质资源状况。因此 ,为持续发展泥蚶养殖业 ,必须加强保护泥蚶现有的种质资源并制定相应的渔业管理措施。     

重金属Cd2+和Cu2+胁迫下泥蚶消化酶活性的变化

为了探讨重金属Cd²⁺和Cu²⁺胁迫对泥蚶消化酶活性的影响,运用酶学分析的方法,按《渔业水质标准》（GB 11607）规定的Cd²⁺、Cu²⁺最高限量值的1、2、5、10倍设置重金属离子Cd²⁺、Cu²⁺浓度及其组合,研究了在重金属Cd²⁺、Cu²⁺胁迫下,30d内泥蚶3种消化酶活性的变化规律。结果表明：与空白对照组相比,在重金属Cd²⁺、Cu²⁺或其组合的胁迫下,较低浓度组泥蚶的淀粉酶活性实验前期增强（即被诱导）,实验后期减弱（即被抑制）,较高浓度组泥蚶的淀粉酶活性从实验一开始就减弱,并保持在较低水平,毒性比较,同一重金属高浓度 > 低浓度,不同重金属及其组合Cu²⁺ > （Cd²⁺+Cu²⁺）组合 > Cd²⁺;泥蚶脂肪酶的活性实验前期增强,实验后期转为微减弱或减弱,毒性比较,同一重金属高浓度 > 低浓度,不同重金属及其组合（Cd²⁺+Cu²⁺）组合 > Cu²⁺ > Cd²⁺;泥蚶胃蛋白酶的活性实验前期增强,且活性呈现升高-降低-再升高-再降低的变化,实验后期分别表现微增强、微减弱和减弱,毒性比较,同一重金属高浓度 > 低浓度,不同重金属及其组合（Cd²⁺+Cu²⁺）组合 > Cu²⁺ > Cd²⁺。可见：环境中的Cd²⁺和Cu²⁺对泥蚶的消化酶活性起着明显的影响作用。     

年龄和环境条件对泥蚶富集重金属镉和铜的影响

采用实验生态学的方法研究了不同年龄、暴露时间、水温和盐度对泥蚶（Tegillarca granosa）富集重金属Cd、Cu的影响。在海水中重金属Cd和Cu的浓度分别为0.5mg/L和1mg/L条件下,实验96小时后,泥蚶对重金属Cd、Cu的吸收和富集能力呈现以下规律：（1）与年龄的大小成反比,1龄组和3龄组泥蚶软体部中重金属Cd、Cu的含量分别为60.434μg/g、38.598μg/g和30.914μg/g、21.617μg/g;（2）随暴露时间的延长而增强,暴露7天后泥蚶软体部重金属Cd和Cu的含量分别达118.293μg/g和315.328μg/g;（3）与水温的高低成正比,水温15℃组与30℃组的泥蚶软体部中重金属Cd、Cu的含量分别为44.524μg/g、33.805μg/g和125.859μg/g、576.504μg/g;（4）与海水的盐度成反比,盐度10组和盐度30组的泥蚶软体部中重金属Cd、Cu的含量分别为69.958μg/g、32.226μg/g和10.191μg/g、12.564μg/g。（5）泥蚶对重金属Cd、Cu的吸收和富集量以外套膜为最高,分别达131.433μg/g、289.432μg/g;鳃次之,分别为100.817μg/g、261.571μg/g;闭壳肌最低,分别为34.812μg/g、47.759μg/g。重金属Cd和Cu在不同组织器官中含量分别为：外套膜>内脏>鳃>足>闭壳肌和外套膜>鳃>内脏>足>闭壳肌。     

Microanatomy and ultrastructure of the foot of the infaunal bivalve Tegillarca granosa (Bivalvia: Arcidae)

In this study, the morphology and ultrastructure of the foot of Tegillarca granosa was compared with the bivalves from different habitats. The sediment of habitat of T. granosa is mostly a mixture of sand (68.93%) and mud (24.12%). The foot is wedge-shaped with multiple projections on the surface and covered with ciliary tufts. The epithelial layer is simple and composed of ciliated columnar epithelia and mucous cells. Although the mucous cells are distributed mostly in the epithelial layer, they are developed even in the connective tissues and muscle layers, and the mucous cells mostly contain acidic carboxylated mucosubstances. From the TEM observation, secretory cells are classified into three types. Type A secretory cell has a goblet form and is most widely distributed among the three types. Type B secretory cell has an oval form and the secretory granule has fibrous substance. Type C secretory cell has an elongated elliptic form and membrane-bounded secretory granules. The muscle fiber bundles are composed mainly of smooth muscle fibers. The smooth muscle fibers can be divided into two types. Type A muscle fibers have evenly distributed thick microfilaments between the thin microfilaments of cytoplasm. Type B muscle fiber has cluster of condensed microfilaments in the medulla cytoplasm while the cortical cytoplasm has loose distribution of thin microfilaments.