鳜鱼(Sinipera chuatsi)鱼苗肠道微生态调节的研究

对鳜鱼鱼苗肠道菌进行好氧菌和兼性厌氧菌的分析鉴定 ,发现鳜苗肠道中存在哈夫尼亚菌属和气单胞菌属 ,其中哈夫尼亚菌属量为 4 .8× 10 6cfu/ g ,气单胞菌属量为 2 .4 3× 10 5cfu/ g。哈夫尼亚菌属和气单胞菌属的拮抗实验表明哈夫尼亚菌对气单胞菌的生长有一定的抑制作用。分别用哈夫尼亚菌、气单胞菌作饵料添加剂 ,前者将鱼苗成活率由 18%提高至 33%～ 4 0 % ,后者将鱼苗成活率由 18%降至 2 %～ 4 %。     

鳜鱼CRP cDNA和斜带石斑鱼AAT cDNA的克隆与序列分析

采用RT-PCR及RACE法分别克隆得到鳜鱼(Siniperca chuatsi)C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)cDNA全序列和斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,AAT)cDNA全序列.鳜鱼CRP基因cDNA全长为914 bp,其中5'非翻译区(5'-UTR)为49 bp,3'非翻译区(3'-UTR)为199 bp,开放阅读框(ORF)为666 bp,编码222个氨基酸.序列同源性分析发现,推测的鳜鱼CRP氨基酸序列与小鼠(Mus musculus)、人类(Homo sapiens)、大鼠(Rattus,norvegicus)、非洲蟾蜍(Xenopus tropicalis)和中国鲎(Tachypleus tridentatus)的CRP氨基酸同源性分别为33.2%、32.4%、31.5%、24.9%和22.4%.斜带石斑鱼肝脏ATT基因cDNA全序列长1 785 bp,其中,5'-UTR为13 bp,3'-UTR为530 bp,ORF为1 242 bp,编码414个氨基酸.序列同源性分析发现,推测的斜带石斑鱼AAT氨基酸序列与斑马鱼(Danio rerio)、非洲爪蟾(X.laevis)、楔齿蜥(Sphenodon punctatus)、大鼠、人类、狒狒(Papio papio)和小鼠的AAT氨基酸序列同源性分别为59.2%、40%、38.6%、38.5%、37.7%、37%和36%.鳜鱼CRP基因和斜带石斑鱼AAT基因cDNA全序列的获得为其疾病相关分子机理研究奠定了基础,对今后进一步进行种苗育苗的研发,并以此为依据提高其人工育苗仔鱼成活率有重要意义.     

饲料亮氨酸水平对鳜生长、抗氧化能力、肝脏健康及非特异性免疫的影响

实验以鳜(Siniperca chuatsi)为研究对象, 选择初始体重为(37.26±0.22) g的健康鳜216尾, 随机分为6个处理组, 分别饲喂亮氨酸(Leu)水平为1.88%、2.49%、3.13%、3.73%、4.29%和4.90%的实验饲料(记作L1.88、L2.49、L3.13、L3.73、L4.29、L4.90) 8周, 探究不同Leu水平饲料对鳜幼鱼生长、抗氧化能力、肝脏健康及非特异性免疫功能的影响。实验结果表明, 鳜肝体比及脏体比与Leu水平呈线性正相关, 鳜的增重率、特定生长率均在L3.13组达到最大值, 其中Leu缺乏组(L1.88)和过量组(L4.90)的增重率及特定生长率均显著低于其余各组(P<0.05)。此外, L3.13组饲料系数显著低于L1.88、L2.49、L4.29和L4.90组(P<0.05)。随着Leu水平的升高, 全鱼粗蛋白和粗脂肪整体呈先升高后降低的趋势, 其中L3.13、L3.73和L4.29组全鱼粗脂肪显著高于其余各组(P<0.05), L3.19和L4.90组肝脏粗蛋白显著低于L3.13组。Leu水平的升高引起肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性先升高后降低, 且均在L1.88组最低。L3.13组和L3.73组SOD、GSH-Px活性都显著高于其余各组(P<0.05)。L3.13和L3.73组血清溶菌酶(LYZ)和补体成分3 (C3)含量均显著高于其余各组(P<0.05); 随着Leu水平的升高, 血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性, 展现出先下降后上升趋势, L3.13组ALT活性最低, L3.73组AST活性最低; L1.88组AST活性显著高于其余各组(P<0.05)。L3.13组与L3.73组nf-κb-p65、tnf-α表达显著低于其余各组(P<0.05)。L3.13、L3.73和L4.29组il-1β、pai的基因表达量显著低于其他组(P<0.05)。L3.13和L3.73组肝脏细胞的空泡化程度明显低于其余各组, 与血清中ALT和AST水平变化趋势和免疫基因表达的结果是一致的。以上结果表明, 适宜水平的饲料Leu能够提高饲料效率和蛋白沉积以增进鳜的生长, 改善肝脏健康并且显著增强鳜的非特异免疫能力; 而过高或者过低的Leu水平均不利于鳜的生长和免疫。此外, 基于增重率的二次回归分析显示, 鳜幼鱼饲料最佳Leu水平为3.28%, 占蛋白水平的6.92%。     

鳜碱性肌球蛋白轻链基因cDNA的克隆及其发育表达分析

肌球蛋白轻链是构成鱼类肌纤维主要组成部分,在鱼类肌肉生长和收缩过程中具有重要作用。鳜鱼具有生长快、肉质细嫩、味道鲜美、营养成分高等优良的性状。研究通过构建鳜肌肉组织cDNA文库分离到两个碱性肌球蛋白轻链基因,即MLC1和MLC3基因。序列分析显示MLC1和MLC3基因cDNA序列全长分别为1237bp和1070bp,分别编码192和150个氨基酸,除去MLC1N端多出的42个氨基酸残基,MLC1与MLC3氨基酸序列同源性为80.3%。通过PROSITEtools软件预测显示两种轻链都具有两个保守的EF-手相结构,其中第二个EF-hand结构除前三个氨基酸外同源性达100%。鱼类MLC3轻链N端没有高等脊椎动物MLC3特有标志序列。采用实时荧光定量PCR方法对鳜鱼MLC1和MLC3发育性表达分析表明,在原肠期开始有低量表达,与原肠期、尾芽期和肌肉效应期相比,心搏期和仔鱼期MLC1和MLC3表达量显著升高。研究结果首次提供了鳜肌肉组织肌球蛋白主要结构基因的分子生物学信息以及它们在鳜肌肉组织发生和功能的相关性。       

翘嘴鳜per1 mRNA表达量分析中采用的内参基因稳定性比较

为筛选生物钟核心基因per1表达定量中的相对稳定性最好的内参基因,本研究取翘嘴鳜成鱼心脏、肝脏、肾脏、脑、红肌、白肌、肠、眼和脾等九个组织为研究对象,选取GAPDH、18S rRNA、β-actin、rps29、RPL13a、B2M和EF1a为内参基因,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对per1基因mRNA表达水平进行检测分析。研究结果表明18S rRNA和GAPDH的平均稳定值M最低,相对表达量最稳定。以18S rRNA和GAPDH为内参基因时分析发现per1基因表达量在肝脏中最高。本研究为在鱼类per1 mRNA表达检测过程中选用稳定的内参基因提供了实验和理论参考。     

鳜鱼Mx蛋白全长cDNA的克隆和序列分析

Mx蛋白是一类由I型干扰素诱导表达的抗病毒蛋白.本研究以感染了鳜传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)的鳜鱼为材料,提取肝脏总RNA,通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出Mx蛋白基因的核心片段序列,再应用3'和5'快速扩增cDNA末端(RACE)方法PCR扩增Mx蛋白cDNA末端,最终获得鳜鱼Mx蛋白cDNA序列(GenBank登陆号AY392097).序列分析表明鳜鱼Mx蛋白cDNA含有2391bp,其中编码区长1881bp,编码627个氨基酸残基,推测蛋白质分子量大小为7.15kDa.鳜鱼Mx蛋白具有脊椎动物Mx蛋白共有的结构特征一个三联体GTP结合区域(GXXXSGKS/T、DXXG、T/NKXD);一个发动蛋白家族的典型结构特征序列(LPRGS/KGIVTR);以及C端高度保守的Leu拉链结构域.鳜鱼Mx蛋白全基因的获得为下一步研究鱼类Mx蛋白的抗病毒活性、作用机制,以及干扰素的检测奠定了基础.     

鳜早期发育阶段骨骼肌纤维的增生与肥大生长

骨骼肌是鱼体的主要组成部分,也是衡量鱼体生长发育的重要指标.为了解鳜(Siniperca chuatsi)早期发育阶段骨骼肌纤维的生长发育特征,通过制作孵化后1 ～41日龄个体骨骼肌背右侧第一肌节石蜡切片,利用图像分析软件统计该肌节中肌纤维的数目和面积,分析了鳜骨骼肌纤维的增生和肥大生长特征.结果表明,鳜早期发育阶段骨...     

闽江和漓江暗鳜mtDNA控制区序列差异分析

为解决暗鳜(Siniperca obscura)在分类上的争议,利用PCR和直接测序法分析了闽江和漓江13尾暗鳜mtDNA控制区的序列差异。在长度813bp的同源序列中,共发现71个变异位点,占分析位点总数的8.73%;定义了11个单倍型,其中闽江群体7个,漓江群体4个,两群体之间没有共享单倍型,且有37个鉴别位点。两群体间的核苷酸歧义度(Dxy)为5.421%±1.129%。分子方差分析(AMOVA)得出两群体间的固定指数(Fst)为0.852(P<0.001)。构建的NJ亲缘关系树中,闽江暗鳜和漓江暗鳜各自组群,明显分为两支。这些表明闽江和漓江暗鳜群体之间出现了显著的遗传分化,其分化可能与南岭山脉的隆起形成有关。     

高GC含量的鳜鱼rRNA基因家族的克隆

动物rRNA基因是一种GC含量较高、结构复杂的重复序列。该研究结合亲缘生物法生物信息学技术,经反复摸索后选用LA PCR法即LA PCR Taq酶结合GC缓冲液来扩增鳜鱼复杂的rRNA基因重复序列,经测序鉴定最终克隆了鳜鱼的3个rRNA基因及其2个间隔序列。分析了鳜鱼与相关动物的rRNA基因序列的同源性和进化关系。探索了克隆复杂DNA序列时引物设计的特别规则、反应体系的改进、DNA聚合酶的选用、循环参数的调整等措施。