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1.
Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris   总被引:154,自引:0,他引:154  
During the past 15 years, the methylotrophic yeast Pichia pastoris has developed into a highly successful system for the production of a variety of heterologous proteins. The increasing popularity of this particular expression system can be attributed to several factors, most importantly: (1) the simplicity of techniques needed for the molecular genetic manipulation of P. pastoris and their similarity to those of Saccharomyces cerevisiae, one of the most well-characterized experimental systems in modern biology; (2) the ability of P. pastoris to produce foreign proteins at high levels, either intracellularly or extracellularly; (3) the capability of performing many eukaryotic post-translational modifications, such as glycosylation, disulfide bond formation and proteolytic processing; and (4) the availability of the expression system as a commercially available kit. In this paper, we review the P. pastoris expression system: how it was developed, how it works, and what proteins have been produced. We also describe new promoters and auxotrophic marker/host strain combinations which extend the usefulness of the system.  相似文献
2.
A set of plasmids has been constructed utilizing the promoter, 5 untranslated exon, and first intron of the maize ubiquitin (Ubi-1) gene to drive expression of protein coding sequences of choice. Plasmids containing chimaeric genes for ubiquitin-luciferase (Ubi-Luc), ubiquitin--glucuronidase (Ubi-GUS), and ubiquitin-phosphinothricin acetyl transferase (Ubi-bar) have been generated, as well as a construct containing chimaeric genes for bothUbi-GUS andUbi-bar in a single plasmid. Another construct was generated to allow cloning of protein coding sequences of choice onBam HI andBam HI-compatible restriction fragments downstream of theUbi-1 gene fragment. Because theUbi-1 promotor has been shown to be highly active in monocots, these constructs may be useful for generating high-level gene expression of selectable markers to facilitate efficient transformation of monocots, to drive expression of reference reporter genes in studies of gene expression, and to provide expression of biotechnologically important protein products in transgenic plants.  相似文献
3.
Members of the Chenopodiaceae, such as sugar beet and spinach, accumulate glycine betaine in response to salinity or drought stress. The last enzyme in the glycine betaine biosynthetic pathway is betaine aldehyde dehydrogenase (BADH). In sugar beet the activity of BADH was found to increase two- to four-fold in both leaves and roots as the NaCl level in the irrigation solution was raised from 0 to 500 mM. This increase in BADH activity was paralleled by an increase in level of translatable BADH mRNA. Several cDNAs encoding BADH were cloned from a gt10 libary representing poly(A)+ RNA from salinized leaves of sugar beet plants, by hybridization with a spinach BADH cDNA. Three nearly full-length cDNA clones were confirmed to encode BADH by their nucleotide and deduced amino acid sequence identity to spinach BADH; these clones showed minor nucleotide sequence differences consistent with their being of two different BADH alleles. The clones averaged 1.7 kb and contained an open reading frame predicting a polypeptide of 500 amino acids with 83% identity to spinach BADH. RNA gel blot analysis of total RNA showed that salinization to 500 mM NaCl increased BADH mRNA levels four-fold in leaves and three-fold in the taproot. DNA gel blot analyses indicated the presence of at least two copies of BADH in the haploid sugar beet genome.  相似文献
4.
巴斯德毕赤酵母的基因表达系统研究进展   总被引:52,自引:1,他引:51       下载免费PDF全文
巴斯德毕赤酵母是一种近年来广泛使用的基因表达系统,它具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等许多优点.综述了该系统在载体类型、载体元件(包括启动子、选择标记和信号肽序列)、受体类型、以及提高整合拷贝数等方面的进展.  相似文献
5.
植物多酚氧化酶的研究进展   总被引:49,自引:1,他引:48  
多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)是一类普遍存在于植物、真菌和昆虫质体中,由核基因编码,能与铜相结合的金属蛋白酶.它能分别催化单酚羟基和二羟基酚氧化为O-二酚和O-醌.植物多酚氧化酶是许多果蔬等农产品酶促褐变的主要原因,同时它在植物的光合作用、抗病虫害、生长发育以及花色的形成中起一定作用.本文综述了植物多酚氧化酶在细胞学、分子遗传学及其生产应用等方面的研究进展.  相似文献
6.
7.
水稻杂种一代与亲本幼苗基因表达差异的分析   总被引:47,自引:0,他引:47  
杂种优势是一种普遍存在的生物学现象,其形成的原因十分复杂。本世纪初,Bruce和Shull相继提出的杂种优势形成的显性互补假设和超亲优势假设至今仍作为一种理论模型而缺乏实验证实。水稻杂种优势的利用自70年代三系配套技术建立得到了广泛的应用,但水稻杂种优势形成的遗传学基础目前还知之甚少。在水稻杂种优势形成机理研究中,分别从生理生化代谢、同工酶分析、DNA限制性片段多态性和DNA含量差异进行了分析,但杂种优势形成的分子机理仍未得到阐明。杂种优势的形成是与异质化相关的过程,它涉及到两个遗传背景不同的体系的相互作用。因此,在相互作用过程中,亲本基因的表达与调控就决定了杂种一代的基因表达类型和特性。因此,我们从分析基因表达与调控入手,运用mRNA差异展示技术分析了玉米杂种一代与亲本基因表达的差异,揭示了不少有意义的现象。本研究以水稻籼型杂交组合(汕优63:珍汕97A×明恢63)为材料,探讨水稻杂种一代与亲本基因表达的差异,揭示了杂种优势形成过程中的一些重要现象。  相似文献
8.
建立低能离子束介导小麦转基因方法并获得转GUS基因植株   总被引:41,自引:0,他引:41  
研究了注入离子种类、能量、剂量等参数对于低能离子束介导的遗传转化的影响,建立了适于小麦成熟胚转化的组培条件和筛选程序。以携带GUS基因的质粒为供体,进行了报告基因转化研究。分子生物学证据表明GUS基因已整合到小麦基因组中。3个小麦品种的抗性愈伤转化率分别为9.5%、10.8%、11.2%,再生植株转化率分别为1.4%、3.4%、1.7%,首次证明了离子束介导小麦遗传转化是可行的,为离子束介导小麦遗  相似文献
9.
影响大肠杆菌中外源基因表达的因素   总被引:40,自引:1,他引:39       下载免费PDF全文
大肠杆菌已经被广泛地应用于表达各种外源基因,但是,不同的外源基因在表达效率上却有很大的差异,文章综述了影响大肠杆菌中外源基因表达的因素,这将有助于认识大肠杆菌中外源基因表达的规律,以便采取有效的方法提高外源基因在大肠杆菌中的表达效率.  相似文献
10.
Gibberellins: perception,transduction and responses   总被引:37,自引:0,他引:37  
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