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1.
为研究NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照,用cDNA微列阵进行筛选,用RNA印迹和RT-PCR进行鉴定,cDNA克隆测序后与GenBank进行BLAST分析比较.结果表明NGAL基因在SHEEC中出现显著差异过表达,其cDNA序列与小鼠24p3、大鼠NRL(neu-related lipocalin)、人中性粒细胞NGAL和卵巢癌NGAL具有较高的相似性.这提示NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中可能发挥着重要作用,可能是一种新的癌基因或促癌基因.  相似文献
2.
Shi YH  Liu J  Xia JH  Gui JF 《Cell research》2002,12(2):133-142
A systemic study was initiated to identify stage-specific expression genes in fish embryogenesis by using suppression subtractive hybridization (SSH) technique. In this study, we presented a preliminary result on screen for stage-specific expression genes between tail bud stage (TBS) and heartbeat beginning stage (HBS) in gynogenetic silver crucian carp (Carassius auratus gibelio). Two SSH plasmid libraries specific for TBS embryos and HBS embryos were constructed, and stage-specific expression genes were screened between the two stages. 1963 TBS positive clones and 2466 HBS positive clones were sampled to PCR amplification, and 1373 TBS and 1809 HBS PCR positive clones were selected to carry out dot blots. 169 TBS dot blot positive clones and 272 HBS dot blot positive clones were sequenced. Searching GenBank by using these nucleotide sequences indicated that most of the TBS dot blot positive clones could not be found homologous sequences in the database, while known genes were mainly detected from HBS d  相似文献
3.
4.
梅山猪与长白猪肌肉组织间正反向消减cDNA文库的构建   总被引:11,自引:2,他引:9  
以梅山猪和长白猪的背最长肌为材料,利用抑制性消减杂交技术成功构建了梅山猪与长白猪肌肉组织间正反向消减cDNA文库。以管家基因G3PDH作为消减指标,检测梅山猪和长白猪两个消减文库的消减效率分别高达2^10和2^5倍,表明某些特异于两种肌肉组织的差异表达基因的富集效率也分别接近2^10和2^5倍。从两个消减文库中分别筛选到了。709和673个有效阳性克隆,PCR鉴定插入片段长度主要分布于150~750bp之间。不同猪种肌肉组织间消减cDNA文库的构建为进一步分离和鉴定与猪肌肉生长和肉质相关基因奠定了基础,对探讨肌肉生长机理和肉质决定因素以及猪的分子育种具有重要意义。  相似文献
5.
分离差异表达基因的方法   总被引:10,自引:0,他引:10       下载免费PDF全文
了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况,可以为研究生命活动过程提供重要信息。以差别筛选,扣除杂交等基本方法为出发点,研究基因表达差异的方法不断完善,先后出现了DDRT-PCR,RDA,SSH,cDNA微阵列(基因芯片)等技术。这里着重对这些方法的优缺点及改进进行了论述和评介,并对技术的发展趋势进行了分析。  相似文献
6.
转化的大鼠胚胎成纤维细胞系差异表达基因的筛选研究   总被引:9,自引:5,他引:4  
来源于转化的大鼠胚胎成纤维细胞系的两株细胞,A1-5细胞与B4细胞相比表现出非常强的抗辐射性并伴随不同寻常强的G2延迟效应;用PCR选择性抑制消减杂交方法对这两株细胞进行差减,希望找到对A1-5细胞表现出的不同寻常的表型起关键作用的某一个或某一些基因。结果得到了160个差减转化子,逐个进行序列测定,并进行Dot blot杂交,共得到35个差异表达基因片段(EST)。通过对美国国家生物技术信息中心(NCBI)的非冗余序列库(NT)、鼠EST库及人EST库的BLAST进行同源检索,发现其中21个代表了尚未登录的新基因,另外14个分别与已知基因高度同源。  相似文献
7.
筛选差异表达基因和蛋白质的方法进展   总被引:9,自引:1,他引:8       下载免费PDF全文
分离和鉴定差异表达基因和蛋白质不仅有助于发现基因和蛋白质的功能,更有助于揭示某些疾病的发生机理.目前筛选差异表达基因的方法主要有差异显示PCR方法(differential display RT-PCR,DDRT-PCR)、消减杂交法(subtractive hybridization,SH)、基因芯片技术(DNA chip technique)和基因表达的系统分析(serial analysis of gene expression,SAGE)等,其中消减杂交法中又先后建立了代表性差异分析技术(representational difference analysis,RDA)、抑制消减杂交法(suppression subtractive hybridization,SSH)和获得全长基因的消减杂交法(full-length-gene-obtainable subtractive hybridization).筛选差异表达蛋白质的方法主要有双向电泳技术(two-dimentional gel electrophoresis)和噬菌体全套抗体库技术(phage display antibody repertoire library technique).这些方法各有特点,各有利弊,研究者可根据自己的需要选择适合于自己的方法.  相似文献
8.
 采用cDNA代表性差异分析 (RDA)技术 ,对盐藻在盐胁迫时差异表达的基因进行了分离鉴定 .在分离到的 10个基因中 ,有 5个与已知基因同源 (包括叶绿素a b结合蛋白基因、蛋白磷酸酶I催化亚基基因和 3个核糖体蛋白基因 ) ,还有 5个未知功能基因则是首次在盐藻中被分离 .值得注意的是 ,所有这 5个已知基因的功能都与细胞分裂或盐胁迫有关 .结果表明 :取样时盐藻细胞仍处于恢复阶段 ,所分离到的基因对于盐藻耐盐可能具有重要意义 ;蛋白磷酸酶I的下调表达可能是盐藻调节离子平衡的一个重要过程和细胞分裂受阻的原因所在 ;盐藻减缓细胞分裂速度可能是为了减少能量消耗 ,以留出足够的能量来应对盐胁迫 ;其它 5个未知基因可能也与盐藻适应盐胁迫机制有关 .  相似文献
9.
In gene expression profiling, nasopharyngeal carcinoma (NPC) 5-8F cells differ from 6-10B cells in terms of their high tumorigenicity and metastatic ability. Differentially expressed genes from the two cell types were analyzed by combining with MILANO (the automatic custom annotation of microarray results which is based on all the available published work in PubMed). The results showed that five genes, including CTSD, P63, CSEIL, BPAG1 and EGR1, have been studied or mentioned in published work on NPC.Subsequently, we revaluated the roles of these genes in the pathogenesis of NPC by combining the data of gene chips from NPCs versus NPs and pooled cells from 5-8F, 6-10B and CNE2 versus NPs. The results suggested that the roles of BPAG1 and EGR1 are possibly different from those reported in previous NPC studies. These five genes are likely to be involved in the proliferation, apoptosis, invasion and metastasis of NPC. A reexploration of the genes will further define their roles in the pathogenesis of NPC.  相似文献
10.
人胚胎干细胞和分化细胞差别基因的筛选   总被引:6,自引:0,他引:6  
杜娟  林戈  卢光琇 《遗传学报》2004,31(9):956-962
人类胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)在增殖过程中如何保持未分化状态是干细胞生物学的核心问题之一,已有的LIF通路、Oct-4因子及Nanog基因的作用还不能对这一问题做出全面的解释。为进一步了解维持hESC未分化状态的机制,采用自行建立培养的hESC及分化的hESC细胞克隆(differentiated hESC,dhESC),应用抑制消减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)结合反向cDNA斑点杂交技术,筛选出在hESC高表达、在dhESC中低表达或不表达的表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)共105个。通过与GenBank比较,显示其中76个EST代表61个已知基因,18个EST代表15个假想基因,另有11个属于未知EST。选取其中8个克隆进行半定量RT-PCR分析,证实其中7个克隆在hESC中高表达,在dhESC中低表达或不表达。结果表明,hESC分化前后涉及多个基因的差异表达,对这些在hESC中高表达、在dhESC中低表达或不表达基因的进一步功能研究为阐明维持hESC未分化状态的机制提供了基础。  相似文献
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