DNA标记技术在螨类系统学研究中的应用

长期以来,螨类主要依靠其形态特征进行系统学研究。DNA标记是指能反映生物个体或物种间基因组中某种差异特征的DNA片段。近年来,DNA标记技术在螨类系统学研究中得到越来越广泛的应用。本文综述了随机扩增多态性RAPD、限制性内切酶片段长度多态性RFLP、微卫星SSR、核酸序列扩增、扩增片段长度多态性AFLP和直接扩增片段长度多态性DALP等6种DNA标记技术在螨类系统学研究中的应用现状及前景。     

三向测交分析的一点注记

木文导出了三向测交设计L,;, L21和L（或合尸；）方差分析中互作项方差分量In*统遗传学。 望。这一期望的导出使得加性遗传分量D和显性遗传分量H的估值可由同一方差分析得出，并且所有 的三向测交家系均得以利用，克服了现有三向测交分析中Lai或L‘在估计HIP‘在估计D和H时未被 利用及完全三向测交设计时D和H由两个基于不同家系资料的方差分析估出的缺陷。本文还给出了确 定显性方向的统计量F的一些其他估计方法。     

牦牛乳酸脱氢酶B基因突变体的克隆鉴定研究

通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析证实牦牛（Bos grunniens）乳酸脱氢酶存在两种类型，根据LDH同工酶谱的特点推测牦牛LDH多态是由B基因变异所致，并由此将凝胶电泳中迁移率快的LDH同工酶谱带称为LDH－Bf类型，迁移率慢的称为LDH－Bs类型．为阐明牦牛LDH变异体的分子机制，实验从牦牛心脏组织中提取总RNA，采用RT-PCR方法分别克隆了LDH－Bf和LDH-Bs两种类型的B基因cDNA全长序列；序列比对分析发现LDH-Bf和LDH-Bs基因存在4个碱基差异；依据cDNA序列推导的氨基酸序列的比对分析，发现两者之间存在两个氨基酸差异；利用Deepview分子建模软件进行的牦牛H亚基及LDH1突变体的高级结构预测，发现突变的两个氨基酸都能产生新的H键，影响整个蛋白分子的H键网络，并进一步导致蛋白分子空间结构的变化．     

多枝赖草基因组可转化人工染色体（TAC）文库的构建和鉴定

为了克隆和转化多枝赖草（Leymus multicaulis）耐黄矮病、耐蚜虫、耐干旱、耐盐碱等抗逆性基因，利用脉冲电泳分离纯化2Mb以上核DNA，酶切后回收10～200kbDNA片段按大小分5组与TAC载体连接后电转化导入细菌DH10B，在卡那霉素和蔗糖选择压下均有阳性克隆．用两种TAC载体pYLTAC17和pYLTAC747H／sacB分别构建了文库I和II，约16．5和23．6万个克隆，估计覆盖3～5倍多枝赖草基因组大小．文库以混合克隆形式保存在12×2块深孔96孔板中，每孔1．2mL菌液中含300～600个克隆，40多万个克隆转存到3块384孔板，留24个孔存叶绿体和线粒体DNA探针菌液，可用于后续文库鉴定．此外，从文库I和II分别挑取2501和2890个单克隆存于14块384孔板中．17块384孔板都用GeneTAC^TMG3复制了2份，点高密度杂交膜6张，以多枝赖草谷胱甘肽还原酶基因5＇RACE，GR和3＇RACE＋GR为探针初步筛选到19个阳性克隆，两文库为多枝赖草抗性基因的克隆、物理图谱的构建、功能验证等基因组有关研究奠定了基础。     

抑制mTOR信号通路可增强5-aza-dC对胃癌细胞生长的抑制作用

本实验主要研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路与DNA甲基化在人胃癌细胞生存活力、细胞周期、相关基因及蛋白表达方面的相互作用．分别单独或联合DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza-dC）、mTOR抑制剂雷帕霉素（rapamycin，RAPA）和P13K抑制剂LY294002干预人胃癌MKN45和SGC7901细胞，以MTT检测细胞生存活力，流式细胞术检测细胞周期，real-timePCR检测PTEN，p27^Kip1基因表达情况，亚硫酸氢盐修饰后测序检测DNA甲基化改变，蛋白免疫印迹检测相关蛋白表达情况．结果发现单独应用5-aza-dC对胃癌细胞的抑制作用不明显，当其联合mTOR信号通路抑制剂时则显著抑制胃癌细胞生长（P〈0．01）；抑制mTOR信号通路可增强5-aza-dC使细胞阻滞在G2期的作用；联合用药还能提高抑癌基因PTEN,p27^Kip1的表达，但不影响DNA甲基化状态；LY294002及RAPA使Akt，p70S6K及4E-BPl磷酸化表达显著下降（P〈0．01），但5-aza-dE并不增强这一效应．以上研究提示mTOR信号通路抑制剂可间接促进DNA甲基化酶抑制剂对胃癌细胞的抑制作用，为肿瘤的治疗提供新思路．     

利用回交导入系剖析水稻苗期和分蘖期耐盐性的遗传重叠

以籼稻品种IR64为受体，来自伊朗的粳稻农家品种Binam为供体培育的99个BC2F8回交导入系为材料，定位了水稻在2叶1心期和分蘖期控制耐盐相关性状的数量性状基因座（QTL）．共检测到影响苗期叶片盐害级别、幼苗存活天数和地上部钾、钠离子浓度的QTL 13个，影响分蘖期株高、分蘖数和地上部鲜重的QTL 22个．多数分蘖期QTL对盐胁迫表现出明显的表达差异，根据表达情况将这些QTL分成3组，第1组为在对照条件下表达的11个QTL；第2组为在对照和盐胁迫条件下共同表达的5个QTL，其中有3个（QPh5，QPh8，QTn9）在两种环境下的基因效应大小和方向一致，其表达受盐胁迫影响较小；第3组为受盐胁迫诱导表达的6个QTL．检测到13个影响胁迫与对照差值即性状稳定性的QTL，除QPh4，QTn2和QFw2a外，其余10个基因座增加性状稳定性或提高耐盐性的等位基因均来自Binam．上述受盐胁迫影响较小的3个QTL和影响性状稳定性的13个QTL对耐盐性有贡献，属耐盐QTL．比较苗期和分蘖期耐盐QTL的分布，发现多数（69％）影响苗期和分蘖期的耐盐QTL在遗传上相互独立，仅在第1，2，8和11染色体的4个相同或相邻区域定位到影响两个时期的耐盐QTL，表明苗期和分蘖期的耐盐性存在部分的遗传重叠．通过标记辅助选择将苗期和分蘖期的重要耐盐QTL进行累加，或针对苗期和分蘖期的重叠耐盐QTL进行选择，有可能培育出苗期和分蘖期均耐盐的水稻品种．     

微卫星DNA检测方法的研究

在检测牙鲆的微卫星变异时,对聚丙烯酰胺凝胶的种类、浓度及其银染方法进行了优化.实验总结了一套适用于微卫星检测的方法.该方法具有灵敏度高、凝胶透明度高、对环境污染小、条带清晰和染色时间短等特点,能显著提高检测分辨率,具有广泛的推广价值.     

COI序列:影响动物分类学与生态学的DNA barcode

DNA barcode是一段特殊的、可用于物种鉴定的DNA序列.目前在动物中最常用的DNA barcode是细胞色素C氧化酶1号基因(COI)的部分序列.随着标准数据库的建立,基于COI基因的DNA barcode在动物分类学和生态学中得到了广泛应用.但是,采用COI基因作为DNA barcode所隐含的涉及线粒体的进化历史、遗传特性和物种成种时间的默认前提,并非完全成立,由此引发了许多问题.本文阐述了基于COI基因的DNA barcode对分类学和生态学的影响,目前存在的问题,以及可能的研究方向.