Immunocytochemical localization of callose in the germinated pollen ofCamellia japonica

Summary A polyclonal antibody against -1,3-glucan, callose, extracted from the pollen tube wall ofCamellia japonica was raised in mice and, using it as a probe, the localization of callose in the germinated pollen was studied. By confocal laser scanning microscopy, callose was found in the tip region of the pollen tube and the tube wall; the immuno-fluorescence in the tube wall was less toward the base of the tube. In contrast, the tip region did not fluoresce although the whole of the tube wall did strongly with aniline blue, the specific dye for callose. Immuno-electron microscopy showed that callose was also found in Golgi vesicles which concentrated in the tip region of the pollen tube, the inner layer of the tube wall, callose plugs, and Golgi vesicles in the pollen grain. Immuno-gold labeling was often detected on the fibrous structures in Golgi vesicles and callose plugs. Based on these results, the participation of Golgi vesicles in the formation of the tube wall and callose plugs was discussed.Abbreviation TBS Tris-buffered saline - Tris Tris(hydroxy-methyl)-aminomethane - PBS phosphate-buffered saline - BSA bovine serum albumin - ELISA enzyme-linked immunosorbent assay - CLSM confocal laser scanning microscopy - DP degree of polymerization     

油茶CoSAD基因载体的构建、鉴定及功能分析

为揭示油茶( Camellia oleifera Abel)硬脂酰-ACP脱饱和酶( SAD)基因(即CoSAD基因)的功能,构建了该基因的原核表达载体pET28b-CoSAD、植物表达载体pBI121-CoSAD和RNA干扰载体pBI121-CoSAD RNAi,并采用PCR扩增及双酶切方法对3类载体进行鉴定;在此基础上,对原核表达载体中的CoSAD基因进行诱导表达分析,并对pBI121-CoSAD转化的拟南芥〔Arabidopsis thaliana ( Linn.) Heynh.〕sad突变体植株和pBI121-CoSAD RNAi转化的拟南芥野生型植株进行转基因鉴定和主要脂肪酸成分含量分析。 PCR扩增和双酶切结果显示：从 pET28b-CoSAD、pBI121-CoSAD和pBI121-CoSAD RNAi 载体的阳性克隆中均可获得目的条带,表明这3类载体均构建成功;用1 mmol·L-1 IPTG分别诱导0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 h,CoSAD基因均能够在pET28b-CoSAD转化的大肠杆菌BL21感受态细胞中正常表达,能够获得与预测结果相符的相对分子质量约47000的特异目的蛋白条带,且蛋白活性随诱导时间的延长而升高。从pBI121-CoSAD转化的拟南芥突变体植株和pBI121-CoSAD RNAi转化的拟南芥野生型植株中也均可扩增出目的条带。 GC-MS分析结果显示：与拟南芥野生型植株相比,其突变体植株的硬脂酸和棕榈酸含量较高、油酸和棕榈油酸含量较低;但突变体植株经pBI121-CoSAD转化后,硬脂酸和棕榈酸含量降低而油酸和棕榈油酸含量提高;野生型植株经过pBI121-CoSAD RNAi转化后,硬脂酸和棕榈酸含量提高、油酸和棕榈油酸含量降低,表明pBI121-CoSAD转化能够促进拟南芥sad突变体植株体内饱和脂肪酸向不饱和脂肪酸转化,而pBI121-CoSAD RNAi转化对拟南芥SAD基因的表达有明显的抑制作用,这2种重组质粒均可影响拟南芥植株的脂肪酸含量。研究结果表明：油茶CoSAD基因具有调控饱和脂肪酸(硬脂酸和棕榈酸)向不饱和脂肪酸(油酸和棕榈油酸)转化的功能,对茶油的脂肪酸组成具有关键的调控作用。     

野生油茶根系内生真菌群落组成与分布

以8省13个样地的野生油茶为研究对象,采用传统分离培养技术与形态学和分子生物学方法相结合,研究不同地区野生油茶根系内生真菌多样性组成和分布。结果显示：从2 600个野生油茶根系组织样品中分离得到1 430株内生真菌,除26株分类地位未明确外,共51属117个分类单元;从分离率和定殖率来看,不同地区野生油茶根系内生真菌定殖率和分离率分别介于3%~74%和3%~89%,均存在明显差异;多样性指数结果表明,连云港和吊罗山两地的野生油茶根系内生真菌多样性较丰富;相似性系数分析显示,婺源与丹江口之间野生油茶根系内生真菌相似性最高（CS=0.60）;通过多重对应分析发现不同经纬度和海拔对野生油茶内生真菌菌群组成影响较大。研究结果有助于认识野生油茶内生真菌多样性组成和分布规律,为进一步探索开发利用野生油茶内生真菌资源提供理论依据。     

油茶叶片营养元素、叶脉密度及生理指标随树龄变化规律及其与产量的相关性

该研究关注了不同树龄油茶叶片的营养元素含量、叶脉密度及生理指标,旨在了解它们随树龄的变化规律及其对产量的影响。结果表明：(1)不同树龄间金属或稀土元素含量差异显著;大部分元素随树龄的增加表现为先增后减的变化趋势,但不同元素达到最大含量的树龄不尽相同;(2)叶脉呈网络状分布,根据叶脉直径大小分为粗、中、细三个等级;粗、中叶脉密度随树龄的变化不明显,细叶脉密度随树龄呈先增后减变化趋势。(3)叶绿素、MDA、可溶性糖、可溶性蛋白质含量以及POD活性等生理指标均随树龄的变化,表现出各自变化规律。(4)叶绿素含量、POD活性、稀土元素总量以及细叶脉密度与产量表现出明显正相关关系(P<0.05, P<0.01)。该研究结果丰富了油茶的基础资料,可为油茶的栽培与管理提供些许参考,并提示人们可以利用叶片的部分营养、生理、结构指标来跟踪监测植株状态和预测产量。     

九种二变种山茶属植物的核型报道

本文报道了９种２变山茶属植物的核型．结果如下：Ｃａｍｅｌｉａｈｅｎｒｙａｎａ：２ｎ＝２ｘ＝３０＝２１ｍ＋８ｓｍ＋１ｓｔ;Ｃ．ｆｕｒｆｕｒａｃｅａ：２ｎ＝２ｘ＝３０＝２０ｍ＋１０ｓｍ;Ｃ．ｗａｒｄｉ：２ｎ＝２ｘ＝３０＝１８ｍ＋１１ｍ＋１ｓｔ;Ｃ．ａｎｌｕｎｇｅｎｓｉｓ：２ｎ＝２ｘ＝３０＝１９ｍ＋９ｓｍ＋２ｓｔ;Ｃ．ａｎｌｕｎｇｅｎｓｉｓｖａｒ．ａｃｕｔｉｐｅｒｕｌａｔａ：２ｎ＝２ｘ＝３０＝１９ｍ＋９ｓｍ＋２ｓｔ;Ｃ．ｐｙｘｉｄｉａｃｅａ：２ｎ＝２ｘ＝３０＝２０ｍ＋８ｓｍ＋２ｓｔ;Ｃ．ｐｙｘｉｄｉａｃｅａｖａｒ．ｒｕｂｉｔｕｂｅｒｃｕｌａｔａ：２ｎ＝２ｘ＝３０＝２１ｍ＋８ｓｍ＋１ｓｔ;Ｃ．ｂｒｅｖｉｓｔｙｌａ：２ｎ＝２ｘ＝３０＝１８ｍ＋１０ｓｍ＋２ｓｔ;Ｃ．ｌｅｐｔｏｐｈｙｌａ：２ｎ＝２ｘ＝３０＝２４ｍ（１ｓａｔ）＋４ｓｍ（１ｓａｔ）＋２ｓｔ;Ｃ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ：２ｎ＝２ｘ＝３０＝１８ｍ＋１０ｓｍ＋２ｓｔ;Ｃ．ｐｉｔａｒｄｉ：２ｎ＝２ｘ＝３０＝１８ｍ＋１２ｓｍ．其中,前７种２变种的核型为首次报道,比较前人的有关研究可以看出上述核型在种间较相似,以组为单位进行比较比种间比较具有更大的意义。     

油茶良种‘华硕’的组织培养及高效生根

以油茶‘华硕’带芽茎段为外植体,研究植物生长调节剂、珍珠岩对其快速繁殖及试管苗生根的影响。结果表明：茎段腋芽萌发的最佳培养基为：MS＋2.0 mg·L^-1 6-BA＋0.1 mg·L^-1 IAA,萌发率达88.68%;最佳继代增殖培养基为：WPM＋3.0 mg·L^-1 6-BA＋0.01 mg·L^-1 IBA＋6.0 mg·L^-1 GA3,增殖系数可达11.27;最佳壮苗伸长培养基为：WPM＋0.05 mg·L^-1 IAA＋6.0 mg·L-1GA3;最佳生根培养基为：1/2MS＋1.0 mg·L^-1 IBA＋50 g·L^-1珍珠岩,生根率95.83%。炼苗后移栽到泥炭土、珍珠岩、黄土（1：1：1,V/V/V）混合基质中,成活率达85%以上。     

茶树CsBAP1基因的克隆与非生物胁迫和激素响应分析

该研究基于茶树转录组数据,从茶树‘龙井43’cDNA中克隆获得茶树CsBAP1基因,对其蛋白质序列特征和基因表达模式以及CsBAP1在茶树不同组织、不同激素处理及不同逆境胁迫下的表达水平进行荧光定量检测。结果显示：（1）克隆得到的茶树CsBAP1基因开放阅读框长度为543 bp,编码180个氨基酸;CsBAP1蛋白为亲水性蛋白,理论相对分子质量为19 398 Da,理论等电点为9.30,含有保守的Ca²⁺依赖性的C2结构域;茶树CsBAP1蛋白二级结构由8.89％的α 螺旋、7.78％的β 转角、35.56％的β 折叠和47.78％的随机卷曲组成;三级结构分析结果显示,CsBAP1包括螺旋和折叠结构,与二级结构吻合。（2）荧光定量分析结果显示, CsBAP1基因在茶树的花、花蕾、幼叶、老叶和成熟叶中均有表达,且在老叶中的表达量最高;外源施用ABA、IAA、MeJA、GA³以及SA均能够抑制茶树CsBAP1基因的表达;在高温（38 ℃）、低温（4 ℃）、干旱（200 g·L^-1 PEG）、高盐（200 mmol·L^-1 NaCl）胁迫下,CsBAP1的表达量均有所上调,且不同时间段的表达存在显著差异。该研究为进一步研究茶树CsBAP1基因的功能奠定了基础。     

茶树新梢中纤维素酶活性及相关基因表达差异分析

为了解茶树新梢中纤维素酶的生理特征,对3个茶树(Camellia sinensis)品种新梢中纤维素酶活性的变化和相关基因的表达进行了研究。结果表明,3个茶树品种新梢中的纤维素酶活性差异显著,‘平阳特早’和‘凫早2号’随着叶片成熟度增加,内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶活性升高,‘舒茶早’则相反。β-葡萄糖苷酶活性在3个茶树品种都是在一芽三叶时期最低,且幼嫩部位的酶活性高于成熟部位,但其酶活性高于外切葡聚糖酶活性。半定量RT-PCR结果表明,5个纤维素酶相关基因在3个茶树品种新梢中均有表达,有2个β-葡萄糖苷酶同源基因的表达量差异显著。因此,纤维素酶可能在茶叶的品质形成中起作用。