全文获取类型
收费全文 | 17106篇 |
免费 | 1359篇 |
国内免费 | 7406篇 |
出版年
2024年 | 68篇 |
2023年 | 459篇 |
2022年 | 561篇 |
2021年 | 650篇 |
2020年 | 684篇 |
2019年 | 648篇 |
2018年 | 475篇 |
2017年 | 534篇 |
2016年 | 556篇 |
2015年 | 600篇 |
2014年 | 1033篇 |
2013年 | 806篇 |
2012年 | 1042篇 |
2011年 | 1195篇 |
2010年 | 1220篇 |
2009年 | 1269篇 |
2008年 | 1523篇 |
2007年 | 1124篇 |
2006年 | 1135篇 |
2005年 | 1148篇 |
2004年 | 1217篇 |
2003年 | 1092篇 |
2002年 | 1031篇 |
2001年 | 931篇 |
2000年 | 764篇 |
1999年 | 625篇 |
1998年 | 519篇 |
1997年 | 451篇 |
1996年 | 416篇 |
1995年 | 389篇 |
1994年 | 327篇 |
1993年 | 249篇 |
1992年 | 227篇 |
1991年 | 213篇 |
1990年 | 170篇 |
1989年 | 174篇 |
1988年 | 52篇 |
1987年 | 33篇 |
1986年 | 44篇 |
1985年 | 50篇 |
1984年 | 41篇 |
1983年 | 45篇 |
1982年 | 30篇 |
1981年 | 37篇 |
1963年 | 5篇 |
1950年 | 9篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 15 毫秒
1.
目的:探讨癌基因Src在体外培养骨肉瘤细胞侵袭伪足形成中的作用。方法:构建Src sh RNA慢病毒表达载体,在HEK293T细胞中包装慢病毒,感染HT-1080骨肉瘤细胞,经嘌呤霉素加压筛选,获得稳定沉默Src基因的骨肉瘤细胞系HT-1080-sh Src;实时定量PCR和Western Blot法检测基因沉默效率;采用原位明胶酶谱法检测侵袭伪足形成;采用侵袭小室实验检测下调Src基因表达对HT-1080细胞侵袭力的影响。结果:成功构建稳定沉默Src基因的骨肉瘤细胞系HT-1080-sh Src及对照细胞系HT-1080-shluc,经实时定量PCR和Western Blot检测,与对照细胞系相比,HT-1080-sh Src细胞中Src基因表达下调3倍以上;下调HT-1080细胞中Src基因表达能显著抑制HT-1080细胞侵袭伪足形成及其对细胞外基质的降解能力;下调Src基因表达能显著抑制骨肉瘤细胞侵袭力。结论:癌基因Src参与调节骨肉瘤细胞HT-1080侵袭伪足形成,促进肿瘤侵袭、转移。 相似文献
2.
3.
4.
5.
6.
吴国俊 《国外医学:分子生物学分册》1997,19(6):276-279
蛋白质截短检测(protein truncation test,PTT)是从蛋白质水平对基因突变进行检测的方法。由于PTT具有与以往广泛使用的方法不同的独特优点,自1993年发明以来,先后在APC、DMD、BRCA1、错配修复基因(mismatch repair gene)突变检测中得以应用。 相似文献
7.
乙型肝炎表面抗原S—蛋白糖化位点序列的人工变异及其哺乳动物细胞表… 总被引:1,自引:0,他引:1
利用末端重叠PCR法和定点突变技术,获得了去除N-连接多糖结构的乙肝表面抗原S突变基因,将乙肝表面抗原S-蛋白中结合N-连多糖结构序列Asn-X-Thr中的第148苏氨酸的密码子ACT,改变为编码甘氨酸的密码子GGT。构建了该突变基因的表达载体并在CHO细胞中表达,筛选到两株表达水平较高的细胞系。对其中的一株细胞系C41的表达产物做了初步纯化和鉴定,纯化样品经SDS-PAGE电泳分析,只含有23k 相似文献
8.
相邻的反向重复DNA片段有形成单链内二级结构的倾向,属于一种测序困难的DNA模板。解决RNAi载体插入的反向重复片段的测序问题,为该类载体正确性的测序验证奠定基础。采用常规分子克隆方法构建表达小麦TaATG2串联反向重复片段的RNAi载体,设计2种策略对经菌落PCR初步鉴定的载体进行测序验证:一种是以完整的载体质粒为模板进行测序;另一种是先对载体进行酶切处理,切除反向重复片段中的一个后对保留另一个片段的线性载体进行测序。结果表明,第一种测序策略受到串联反向重复片段形成的单链内部二级结构的影响,测序信号在反向重复片段处出现衰减或乱峰,无法读取序列。第二种测序策略排除了2个反向重复片段之间的干扰,保留在载体上的片段测序信号清晰,序列准确。采用酶切切除一个片段后进行测序的方法,经过2次酶切和2次测序可以有效地对载体上的2个反向重复片段分别进行序列测定,进而确认构建载体的正确性。 相似文献
9.
10.
A new system for selection of transformed Aspergillus foetidus was reported. In this system, TK- A. foetidus which were constructed by homologous recombination of mutated TK gene of vaccinia virus with TK gene of A. foetidus were screened by adding BUdR in agar plates. Conditions for screen of TK+ A. foetidus strain, transformation of A. foetidus and selection of transformed TK- A. foetidus have been studied. By using this system, several transformed A. foetidus which contained HBsAg gene derived bf a promoter H8 cloned from genomic DNA of A. foetidus were isolated. It was demonstrated that HBsAg gene was integrated into the chromosome DNA of A. foetidus by Southern blot after many passages of spores. ELISA showed that HBsAg was positive in the growth medium (p/n = 20). The 22 nm particles which were very similar to the HBsAg particles in human serum were found in the growth medium by immunoelectromicroscope. Western blot also gave the specific bands. All these data showed that HBsAg gene was expressed in A. foetidus and the products were secreted into the growth medium. The selection system using TK gene as marker could generally be used to study the expression of foreign gene in A. foetidus. 相似文献