~(131)I-Herceptin对HER2过表达乳腺癌细胞Bcl-xL表达的影响

目的:探讨131I-Herceptin对HER2过表达乳腺癌细胞Bcl-x L表达的影响。方法:采用Iodogen法制备131I-Herceptin,超滤法纯化后测定其标记率、放射化学纯度和免疫结合率。通过免疫荧光法检测乳腺癌细胞表面HER2表达水平。131I(4.625 MBq/m L)、Herceptin(125μg/m L)及131I-Herceptin(4.625 MBq/m L)干预乳腺癌BT474细胞后,Western blot检测细胞中Bcl-x L的表达。结果:131I-Herceptin的标记率、放射化学纯度和免疫结合率分别为(89.71±2.93)%、(91.80±1.43)%和(58.84±3.35)%。BT474细胞膜表面HER2表达水平明显高于MDA-MB-231细胞。Herceptin、131I-Herceptin组BT474细胞内Bcl-x L表达水平明显低于对照组及131I组(均P0.01),而Herceptin与131I-Herceptin组之间细胞内Bcl-x L含量差异无统计学意义(P0.05)。结论:131I-Herceptin保留Herceptin对HER2过表达乳腺癌细胞Bcl-x L表达的抑制作用并促进细胞凋亡,进而与131I产生协同作用,较Herceptin更有效地杀伤HER2过表达乳腺癌细胞。     

介绍一种新的表皮细胞传代方法

我们设计了一种新的传代方法,在传代之前,先用 DispaseⅡ酶,将培养的表皮细胞片整个消化下来,再用0.25—0.3%胰酶冷消化将表皮细胞驱散,进行1:2传代获得成功,传代59次成功率为71.2%。若在培养后7—16天传代,成功率可达80%。本文讨论了此种传代方法比单纯用胰蛋白酶或用胰蛋白酶和EDTA 混合传代方法优越。     

担载血管生长因子的乳液法纤维用于血管再生的研究

目的:制备担载血管生长因子(VEGF)的乳液法静电纺丝纤维膜,对其开展一系列表征,从而研究其血管再生的潜能。方法:通过W/O乳液法制备担载VEGF的静电纺丝纤维膜,并对其形态、力学性质进行表征。用VEGF ELISA分析方法对其体外释放动力学进行研究。运用CCK-8法检测乳液法静电纺丝纤维膜中VEGF的活性变化。结果:乳液法静电纺丝纤维膜呈现连通的三维网状结构,平均直径为1μm,模拟了细胞外基质(ECM),最大拉伸应力为3.03±0.66 M Pa,具有良好的抗拉伸能力,能够支持细胞的生长。乳液法纤维膜中VEGF在体外累积释放了14天,总释放量超过20000 pg,达到血管再生的有效浓度。CCK-8结果显示,乳液法纤维膜中的VEGF仍然保持较高的蛋白活性。结论:担载VEGF的乳液法静电纺丝纤维膜能够缓释出活性的蛋白,具有血管再生的潜能。     

表皮生长因子受体基因突变检测方法改进及初步临床验证

目的:改进现有的检测表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的荧光PCR法并开发出新的试剂盒,将其与直接测序法和ARMS法进行对比,验证该试剂盒用于临床诊断的敏感性、特异性和准确性。方法:收集2013年6月至2015年8月手术确诊的141例非小细胞肺癌(NSCLC)的石蜡包埋组织标本。采用盲法分别使用直接测序法、ARMS法和新试剂盒检测EGFR突变,比较新试剂盒与其他两种检测方法的差异,结果不一致时采用三种方法分别重复检验一次。结果:三种方法检测成功率均为100%,新试剂盒与直接测序法测得结果完全一致的比率达75.9%(107/141),在直接测序法测得的96例突变阳性中,92例在新试剂盒检测中得到验证(95.8%)。而直接测序法显示突变阴性的45例中,新试剂盒检测发现了23例突变阳性,两种检测方法的结果存在统计学差异(x2=40.745,P0.05)。与直接测序法进行比较,新试剂盒检测EGFR突变的敏感性、特异性分别为95.8%、48.9%,阳性预测值、阴性预测值分别为80.0%、84.6%,检测准确度为80.9%。以ARMS检测法为金标准,新试剂盒测得结果完全一致的比率达84.4%(119/141),两者的一致性比较好(K=0.749,P0.05),敏感性、特异性分别为94.1%、86.4%。结论:改进后EGFR基因突变检测的试剂盒在技术上较好地控制了检测结果的假阳性和假阴性,该检测方法较直接测序法具有更好的敏感性和准确性,与现有的ARMS法一致性较高。     

依赖于微环境的TGFβ信号

转化生长因子β（transforming growth factor β，TGFβ）家族成员是一类分泌的细胞因子，在胚胎发育、免疫调节、伤口修复、细胞增殖和抑制等过程中发挥重要作用。其中,TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3在进化上最晚出现，并以潜伏态分泌。有别于家族中的大多数成员，TGFβ1-3的信号具有时空区域性，并依赖于其所处的微环境。阐明依赖于微环境的TGFβ信号的多层次调控机制对于理解TGFβ信号在免疫、癌症等生理、病理条件下的功能，以及开发临床治疗策略具有重要意义。本文从TGFβ前体复合物的结构入手，并从TGFβ的激活，配体-受体识别，跨膜信号传导及转录调控等方面，论述依赖于微环境的TGFβ信号的调控机制，同时讨论肿瘤微环境中多效的TGFβ信号，进而对今后的研究方向进行展望。     

3T3细胞饲养层培养人表皮细胞最适密度研究

本文分别以五种不同浓度的表皮细胞和四种密度的3T3细胞饲养层做了混合培养观察。接种前3T3细胞先行~(60)Co,60Gy放射。培养的表皮膜片均做了大体染色,组织切片和电镜观察。不同培养时间的表皮细胞还分别进行了DNA合成。~3H-TdR掺入标记测定。结果证实表皮细胞与3T3细胞最佳混合接种比例为1:1。最适细胞接种量为5×10~4/cm~2。在此条件下表皮细胞生长最快,15天形成膜片。而且饲养层培养表皮细胞接种量少,表皮面积扩大倍数大。为此我们认为饲养层培养是表皮细胞培养的最好方法之一。     

JNCI：研究发现抗肿瘤转移新型抑制剂

最近出版的国际肿瘤学权威期刊《美国国立癌症研究所期刊》发表了题为《转化生长因子β受体I抑制剂高效安全抑制乳腺癌转移》的研究论文。该研究由国家”千人计划”入选者、华东师大生命医学研究所、上海市调控生物学重点实验室刘明耀教授领衔的课题组研发。发现了新型抗肿瘤体内生长和转移抑制剂。     

干细胞培养中的新发现

在培养人胚胎干细胞时需使用小鼠血清成分作为滋养元素,如果撤除小鼠血清成分,干细胞就会从干细胞状态变为分化状态。这些小鼠血清成分有可能对分化的组织器官造成污染,从而引起免疫排斥。生物学家数年来一直寻找不使用小鼠成分的培养条件保持人胚胎干细胞非分化状态。今年,美国威斯康辛的科学家,徐和James Thomson等(James Thomson是第一个成功分离人胚胎干细胞的科学家)发现用人工合成的成纤维生长因子2就可以保持人胚胎干细胞处于不分化状态。成纤维生长因子2是通过抑制骨髓多形遗传蛋白(这是一种促干细胞分化的分子)起作用的。