莱氏绿僵菌FJMR2对草地贪夜蛾不同虫态的致病性研究

【目的】为明确莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi FJMR2对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的生物防治潜力。【方法】在室内条件下,采用浸渍法测定了莱氏绿僵菌FJMR2对草地贪夜蛾卵、幼虫和蛹的致病性。【结果】当孢子浓度为2×10⁸孢子/m L时,草地贪夜蛾1-5龄幼虫和蛹的校正死亡率分别为100%、95.78%、87.15%、64.67%、38.00%和93.93%;草地贪夜蛾1-5龄幼虫和蛹的LC_(50)分别为3.12×108孢子/m L时,草地贪夜蛾1-5龄幼虫和蛹的校正死亡率分别为100%、95.78%、87.15%、64.67%、38.00%和93.93%;草地贪夜蛾1-5龄幼虫和蛹的LC_(50)分别为3.12×10⁴、7.94×104、7.94×10⁴、2.24×104、2.24×10⁶、2.13×106、2.13×10⁷、7.46×107、7.46×10⁸和1.25×108和1.25×10⁵孢子/m L。LT_(50)随孢子浓度的增大而缩短、随幼虫虫龄的增长而延长,当孢子浓度为2×105孢子/m L。LT_(50)随孢子浓度的增大而缩短、随幼虫虫龄的增长而延长,当孢子浓度为2×10⁸孢子/m L时,草地贪夜蛾1-5龄幼虫和蛹的LT_(50)分别为3.93、4.32、5.62、7.18、9.40和4.45 d。卵期为0 h和24 h的草地贪夜蛾卵经莱氏绿僵菌FJMR2浸渍处理后,孵化率分别为84.53%和89.77%,初孵化3 d的幼虫存活率分别为1.81%和3.02%,均显著低于对照组。【结论】莱氏绿僵菌FJMR2对草地贪夜蛾1-4龄幼虫和蛹具有较强侵染致病能力,同时显著降低卵的孵化率和初孵幼虫存活率。     

斜纹夜蛾幼虫感染莱氏野村菌后的抗氧化酶活性变化

【目的】研究斜纹夜蛾Spodoptera litura幼虫感染莱氏野村菌Nomuraea rileyi后的抗氧化防御机制。【方法】通过测定斜纹夜蛾各龄幼虫超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)等的活性,探讨染菌后不同侵染阶段,幼虫抗氧化酶活性的变化趋势和不同接种方法对抗氧化酶活性的影响。【结果】在斜纹夜蛾染菌幼虫和未接种幼虫(对照)中均未测出POD活性;各龄幼虫在接种莱氏野村菌后SOD和CAT活性显著高于对照,但随着侵染过程的进行,2-3龄幼虫的SOD和CAT活性在16 h左右达峰值后迅速降低,而4-5龄幼虫SOD和CAT活性自染菌初期增强后,变化较平缓,至60-72 h后才低于对照。喷雾法与浸蘸法接种后,各龄幼虫SOD和CAT活性显著高于对照,且对于2-3龄幼虫,浸蘸法对抗氧化酶活性的影响显著高于喷雾法,而对于4-5龄幼虫而言两处理方式之间活性差异不显著。【结论】斜纹夜蛾感染莱氏野村菌后,其体内抗氧化酶活性变化很大,SOD和CAT活性先升后降,且其变化趋势与幼虫所处的发育阶段密切相关。在体壁接种量相当的情况下,浸蘸法对2-3龄幼虫SOD和CAT活性的影响大于4-5龄幼虫。     

绿僵菌 (Metarhizium aniso pliae)和莱氏蛾霉 (Nomuraea rileyi) (Farlow) )对小菜蛾的室内致病力研究(英文)

用小菜蛾对绿僵菌 (Metarhiziumanisopliae)的五个菌株和莱氏蛾霉 (Nomuraearileyi)的一个菌株作了室内测定。结果表明 ,三个绿僵菌菌株对小菜娥表现出致病力 ,其中以FI12 4 8菌株的致病力最强。根据 9天的死亡率数据 ,其LC50 为 2 0 3× 10 4 个孢子 /ml,在 10 7个孢子 /ml的浓度下 ,LT50 为 4 97天。菌株FI16 3(莱氏蛾霉 )对小菜蛾表现出致病力 ,但罹病虫体没有长出分生孢子。     

不同磷脂和糖脂对莱氏衣原体膜上Mg~（2＋）－ATPase活性的影响

莱氏衣原体膜上Ｍｇ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ用ＤＯＣ溶解后,经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－６Ｂ和ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２离子交换柱,得到了部分纯化的Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ,并将此ＡＴＰａｓｅ与不同极性头部的磷脂和膜糖脂重组,研究了不同的极性头部的磷脂和膜糖脂对ＡＴＰａｓｅ活性的影响。此酶的活性不依赖酸性磷脂,ＰＧ、ＤＰＧ、大豆磷脂等明显抑制酶活性,中性磷脂ＤＭＰＣ、ＰＥ、ＰＣ则能增加酶活性,其中尤以非双层脂ＰＥ的作用最为明显。从莱氏衣原体膜上提取的糖脂（ＭＧＤＧ,ＤＧＤＧ）单独和ＡＴＰａｓｅ重组时,酶活性增加并不明显,当ＭＧＤＧ和ＤＧＤＧ以等比例混合时,能大大地增加酶活性。这表明Ｍｇ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ的活性很大程度上与磷脂的表面电荷及磷脂的组成相关。     

一株高效防治甜菜夜蛾的莱氏野村菌的筛选

从罹病斜纹夜蛾中分离获得一杀虫真菌菌株Nr101,经ITS鉴定该菌为莱氏野村菌Nomuraea rileyi。室内采用浸渍法测定了其5个浓度(2.25×104-2.25×108个孢子/m L)对3龄甜菜夜蛾的毒力。施药后8 d后,2.25×108、2.25×107、2.25×106、2.25×105、2.25×104个孢子/m L浓度下,甜菜夜蛾3龄幼虫死亡率分别为100%、97.5%、86.67%、57.5%、43.33%。2.25×105、2.25×106、2.25×107、2.25×108的LT50分别为7.4165、5.7384、4.7908、4.3292 d。药后8 d LC50为6.2180×104,显示出很好的应用前景。     

莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因的克隆与表达分析

【目的】为揭示昆虫病原真菌分泌的几丁质酶对宿主感染致病时的作用,对莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因进行了克隆与表达,并检测了表达产物的活性。【方法】采用CTAB法提取菌体DNA,设计特异性引物,多次PCR扩增克隆莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因全序列,并克隆基因的ORF片段chit1,与载体pPIC9K相连接,构建表达载体pPIC9K-Chit1,转入毕赤酵母感受态细胞中,然后通过1.5mg/L浓度的G418筛选及PCR验证,将阳性转化子进行诱导培养,对发酵液分别进行酶活性测定试验、几丁质酶透明圈验证试验和SDS-PAGE电泳检测。【结果】莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因全长序列为2756bp(NCBI登录号:EU795711),PCR扩增得到开放阅读框ORF片段chit1为1827bp,其中包含3个内含子,5′端非编码区长76bp,3′端非编码区240bp,编码424个氨基酸的几丁质酶前体,理论信号肽剪切位点在Gly(20)与Leu(21)之间;毕赤酵母重组细胞发酵液中几丁质酶活性随着发酵时间的延长而增加,72h达到最大值482.5U/100μL,透明圈活性验证试验显示,在含1%的几丁质平板上可出现明显的透明圈,表达产物SDS-PAGE电泳检测其分子量为41.0kDa。【结论】本研究克隆到莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因,其ORF成功重组到毕赤酵母中并表达出有活性的几丁质酶。基因表达产物的利用对进一步研究病原真菌染病昆虫的机制等具有重要意义。     

响应面设计优化莱氏绿僵菌SZCY固体发酵培养条件及致病力测定

【背景】莱氏绿僵菌(Metarhizium rileyi)对新入侵我国的草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)具有较强的致病力和田间流行性,因此具备深入开发的价值。【目的】优化莱氏绿僵菌SZCY固态发酵培养条件,测定所产分生孢子对草地贪夜蛾幼虫的毒力,为提高该菌株分生孢子规模化生产奠定基础。【方法】采用单因素试验确定了相对适宜的固态培养基,利用Box-Behnken响应面法优化该菌株的固态培养基和发酵参数,同时评价不同条件下该菌所产分生孢子对草地贪夜蛾幼虫的毒力。【结果】去颖稻谷(rice)为莱氏绿僵菌SZCY菌株固相产孢最佳载体。培养温度、光周期及酵母浸粉含量是影响莱氏绿僵菌SZCY固态发酵产孢量的主要因素。莱氏绿僵菌SZCY固态发酵最佳工艺参数为温度22.83℃、光周期18.68 h L:5.32 h D、酵母浸粉4.98 g/100 g,在此条件下,莱氏绿僵菌在去颖稻谷固态培养基上的产孢量为5.65×10¹⁰孢子/g,用其制备浓度为10⁷孢子/mL的孢子悬浮液,对草地贪夜蛾3龄幼虫的LT₅₀为3....     

莱氏拟乌贼缠卵腺的显微与超微结构

为了解莱氏拟乌贼(Sepioteuthis lessoniana)缠卵腺的结构和功能,本研究采用组织切片技术和透射电镜技术对该腺体进行显微与超微结构观察。结果显示,缠卵腺由腺壁组织、分泌叶瓣和结缔组织组成。其中,腺壁组织由外膜层和肌肉层组成,位于腺体外部;分泌叶瓣是腺体的主要部分,由分泌细胞和支持细胞组成,分泌细胞具有分泌功能,支持细胞起到支持分泌细胞的作用。分泌叶瓣两侧为分泌细胞,分泌细胞较大,细胞内细胞器丰富,包括大量线粒体、内质网和高尔基体,此外分泌细胞内充满分泌物质,主要是蛋白泡。结缔组织夹杂在外膜层和分泌叶瓣中。分析认为,莱氏拟乌贼的缠卵腺是一种典型的分泌型腺体,其分泌的凝胶物质主要功能是形成第三层卵膜,以保护受精卵免受外界环境侵袭。     

红树林恢复初期莱氏锥滨螺分布动态

树栖腹足类动物是红树林底栖动物的重要组成部分,其组成和分布受到红树植被的影响。因此,在红树林生态修复中,腹足类动物的恢复依赖于植被的发育。滨螺科(Littorinidae)锥滨螺属(Mainwaringia)动物是亚洲红树林的广布种,但针对其在红树林中的分布及种群特征的研究较少,对红树林植被恢复过程中锥滨螺属动物的恢复动态更是鲜有研究。调查了厦门下潭尾湿地秋茄(Kandelia obovata)红树林恢复初期,新记录种莱氏锥滨螺(Mainwaringia leithii)种群恢复的时间动态,并分析其与植被参数的关系。研究发现,红树林恢复初期,秋茄植被生长迅速,株高、冠幅、基径和覆盖度分别由0.5年生幼林的41.3 cm、25.0 cm、1.04 cm和25%增长为8年生样地的179.2 cm、76.7 cm、5.96 cm和95%。在秋茄胚轴种植6个月左右开始记录到莱氏锥滨螺的个体,其密度和生物量在1.5 a后达到最大(分别为136个/m²和1.86 g/m²),而后逐渐降低,种植3 a后秋茄林内莱氏锥滨螺仅零星分布。除8年生的样地,莱氏锥滨...     

抗生素对莱氏衣原体膜流动性和Mg~(2+)-ATPase活性的影响

本文以莱氏衣原体AIH089为材料,用DPH荧光偏振等技术研究红霉素和土霉素对莱氏衣原体膜流动性和Mg~(2+)-ATPase活性的影响,并用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳技术进一步分析膜蛋白的组成,发现红霉素和土霉素能使莱氏衣原体膜的流动性显著增加,使Mg~(2+)-ATPase活性显著降低。红霉素和土霉素对莱氏衣原体膜流动性和膜上Mg~(2+)-ATPase活性的影响与它们的抑菌能力有很好的相关性。