全文获取类型
收费全文 | 7778篇 |
免费 | 1754篇 |
国内免费 | 1527篇 |
出版年
2024年 | 23篇 |
2023年 | 273篇 |
2022年 | 277篇 |
2021年 | 282篇 |
2020年 | 308篇 |
2019年 | 277篇 |
2018年 | 217篇 |
2017年 | 264篇 |
2016年 | 308篇 |
2015年 | 307篇 |
2014年 | 517篇 |
2013年 | 421篇 |
2012年 | 466篇 |
2011年 | 480篇 |
2010年 | 460篇 |
2009年 | 460篇 |
2008年 | 511篇 |
2007年 | 398篇 |
2006年 | 401篇 |
2005年 | 386篇 |
2004年 | 471篇 |
2003年 | 373篇 |
2002年 | 342篇 |
2001年 | 332篇 |
2000年 | 238篇 |
1999年 | 245篇 |
1998年 | 187篇 |
1997年 | 233篇 |
1996年 | 211篇 |
1995年 | 183篇 |
1994年 | 192篇 |
1993年 | 149篇 |
1992年 | 182篇 |
1991年 | 147篇 |
1990年 | 132篇 |
1989年 | 138篇 |
1988年 | 61篇 |
1987年 | 71篇 |
1986年 | 43篇 |
1985年 | 43篇 |
1984年 | 14篇 |
1983年 | 11篇 |
1982年 | 6篇 |
1981年 | 12篇 |
1980年 | 2篇 |
1977年 | 1篇 |
1966年 | 2篇 |
1963年 | 2篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 15 毫秒
1.
目的:探讨颈围用于筛选糖调节受损人群的临床价值。方法:选取哈尔滨市第一医院2017年3月至11月收治的糖调节受损患者共100例,男性颈围以38 cm为临界值,女性以35 cm为临界值,分为颈围正常组和颈围异常组,比较两组患者空腹及餐后血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白等相关指标水平,并分析颈围与以上指标的相关性。结果:颈围异常组患者的餐后2 h血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白数值高于颈围正常组,尤以甘油三酯明显,高密度脂蛋白数值低于颈围正常组,差异有统计学意义(P0.05)。颈围与餐后2 h血糖、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平呈正相关,差异均有统计学意义(P0.05),颈围与高密度脂蛋白水平呈负相关,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:颈围可以作为临床预测、评估糖调节受损患者的早期指标,为早期社区筛查及诊断提供相关的参考依据。 相似文献
2.
移动学习作为一种全新的学习模式已经逐渐成为教育技术领域的研究热点,通过对概念图作为教学工具在生物学移动学习中的应用进行尝试性研究。 相似文献
3.
【目的】比较恒定链(invariant chain,Ii)CLIP的2个片段(PBS、GBS)影响免疫载体增强体液免疫的效果。【方法】首先,构建了基于小鼠Ii功能片段与新城疫病毒抗原肽F2的6个嵌合体(Cyt/TM/F2、Cyt/TM/F2/GBS、Cyt/TM/PBS/F2、Cyt/TM/F2/TRIM、Cyt/TM/F2/GBS/TRIM、Cyt/TM/PBS/F2/TRIM);其次,定向克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达和纯化目的蛋白;最后,免疫小鼠,经间接ELISA法测定血清抗体效价,以及比较分析不同嵌合体免疫组免疫效果。【结果】一是所构建的含不同Ii功能片段/F2嵌合体的6个免疫组,均比单独F2的免疫组提高抗体水平1.5-4.9倍;二是在上述6个免疫组中,含CLIP的PBS或GBS的免疫组比不含CLIP的免疫组增强1.6-2.4倍;三是含PBS比含GBS的免疫组增强1.5倍。【结论】Ii胞浆区、跨膜区具有增强免疫效果的作用,而CLIP的PBS在Ii免疫载体中的作用优于GBS。 相似文献
4.
目的:建立能够同时检测常见呼吸道病毒的Array-ELISA方法。方法:未经标记的单克隆抗体作为捕获抗体在96孔板的微孔中点制成阵列,生物素标记的单克隆抗体作为检测抗体,与待检病毒反应后,利用电化学发光法放大反应信号,通过CCD传感器读取反应结果。结果:经过优化后,使用的抗体组合能够检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒和副流感病毒3型,其最低检测限分别为3.1×102、1.3×103、5×103、2.5×103和1.5×104TCID50/m L,各病毒之间未见交叉反应。结论:建立的Array-ELISA方法可用于检测以上5种病毒,具有较高的灵敏性和较强的特异性。 相似文献
5.
目的:构建及筛选高效表达原创性全人源抗人Ig E单克隆抗体的重组工程细胞株。方法:将采用核糖体展示技术筛选到的原创性全人源抗人Ig E单链抗体(sc Fv)基因改构设计为Ig G1κ型全长抗体,构建重组真核表达质粒并电转染CHO-S细胞,Dot-blot法选取多株高表达克隆进行40ml摇瓶批次培养,再据细胞生长特征及抗体表达量选取高表达克隆进行40ml摇瓶及3L摇瓶流加培养研究,选取候选细胞株并对改构前后抗体的生物学活性进行比较研究。结果:成功构建了p MH3-H、p MH3-L、p CApuro-H、p CApuro-L四种重组真核表达质粒并成功共转染CHO-S细胞。完成了4次电转染8轮细胞克隆筛选,获得两株表达量较高的候选克隆Mab1#和Mab2#,在3L摇瓶流加培养中抗体表达量分别达到470mg/L及499mg/L。生物膜光干涉技术(Bio-Layer Interferometry,BLI)亲和力结果显示Mab1#及Mab2#两株单抗亲和力均达到nmol/L级(10-9),与现有唯一上市的抗人Ig E单抗药物奥马珠单抗(Omalizumab)的亲和力相当。选取Mab1#全长抗体与其改构前的母本单链抗体的表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)中和活性比较结果显示Mab1#抑制h Ig E与FcεRI结合的EC50为3nmol/L,EC90为9nmol/L,较改造前亲和力提高了4.3倍,中和活性(EC50)提高了23.7倍,中和活性(EC90)提高了41.3倍。结论:成功将表达原创性全人源抗人Ig E的单链抗体(约25k Da)改造为亲和力及中和活性均大幅提升的全长抗体(约150k Da),获得2个候选细胞株。 相似文献
6.
大豆两个C2H2型转录因子基因序列特征及表达分析 总被引:1,自引:0,他引:1
干旱气候已严重影响需水作物大豆的产量,而植物中C2H2型转录因子在应答非生物逆境中起到重要作用,因此充分挖掘优异抗旱大豆种质的基因资源及功能研究,为利用基因工程手段获得抗旱大豆种质奠定理论基础。本研究从大豆叶片中克隆到2个基因,分别命名为GmZAT9-like和GmZAT5-like。序列特征分析表明二者都属于C2H2型转录因子,均包含典型双锌指结构域和EAR保守基序,且氨基酸同源性低于其他物种同源基因。分子进化树分析表明,2个基因分别与拟南芥AtZAT9和ATZAT5基因划分为一类。基于荧光实时定量PCR技术检测到2个基因分别在叶片和根部组织特异性表达。通过半定量RT-PCR和荧光定量PCR分析大豆幼苗在PEG、SA、ABA、NaCl和4℃胁迫处理条件下2个基因的表达模式。结果表明,在PEG和SA胁迫条件下,叶片中GmZAT9-like基因表达在处理后期有升高趋势,而根部GmZAT5-like基因在处理早期受到诱导表达;ABA胁迫条件下,2个基因均在处理初期呈现表达升高趋势而后下降;盐和冷胁迫条件下,叶片中GmZAT9-like基因表达受到抑制,而根部GmZAT5-like基因表达在冷胁迫处理初期呈现升高趋势。因此推测这两个基因与大豆非生物胁迫响应相关。 相似文献
7.
目的:在非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)中表达2型单纯疱疹病毒(HSV-2)毒力蛋白感染细胞多肽34.5(ICP34.5),并检测其对Vero细胞活性的影响。方法:PCR扩增HSV-2的ICP34.5基因,连接至pEGFP-C2载体,并对重组真核表达载体pEGFP-ICP34.5进行双酶切测序验证;将重组子瞬时转染Vero细胞,RT-PCR检测其在mRNA水平的表达,荧光倒置显微镜观察融合蛋白的表达,MTT法检测细胞活性。结果:经双酶切和测序验证表明pEGFP-ICP34.5构建成功,转染细胞后经RT-PCR验证有目的基因的转录,荧光显微镜下观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中表达,MTT法检测结果证实重组质粒可以抵消空质粒对细胞的损伤作用。结论:构建了pEGFP-ICP34.5真核表达载体,其能在Vero细胞中高效表达,并能抵消空质粒对细胞的损伤作用。 相似文献
8.
用单克隆抗体作芜菁花叶病毒不同分离物外壳蛋白抗原结构的比较研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用芜菁花叶病毒辽宁分离物(TuMV-LN),山东分离物(TuMV-SD)和榨菜分离物(TuMV-ZC)作抗原,分别免疫BALB/c小鼠,经脾细胞与SP2/O-Ag14骨髓细胞融合,共获得7个单克隆抗体分泌细胞株,为研究3个分离物的抗原差异,用胰蛋白酶消化TuMV的外壳蛋白(CP)。分别形成4、2和1条降解带,经SDS-15%PAGE后,转移至硝酸纤维薄膜上,用3个分离物的抗血清和7种单隆抗体分别做 相似文献
9.
鼻咽癌与细菌L型的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
大量研究表明,鼻咽癌与EB病毒有关。通过对98例鼻咽癌组织的切片革兰氏染色L型检查、电镜和L型抗体免疫组化染色等研究,发现鼻咽癌组织中细菌L型亦甚常见,切片革兰氏染色有78例查见细菌L型,其阳性率为79.6%;免疫细化染色L型抗原检出阳性率为62.2%,电镜不仅在细胞间质见到细菌L型,而且在癌细胞、巨噬胞细等细胞胞质内也见到细菌L型。提示,细菌L型与鼻咽癌关系十分密切,很可能是鼻咽癌致癌因子之一。 相似文献
10.
目的:初步探讨旋转恒定磁场治疗急性骨髓型放射病的效果。方法:BALB/C小鼠按体重随机分为磁疗组和对照组,每组再各分为4组.分别接受0Gy、6.0Gy、8.0Gy、10.0Gy ^60COγ射线全身辐射,照后,对照组不作任何处理,磁疗组接受磁场处理30d,每天2次,每次1.5h,旋转磁场强度为0.6T,比较两组小鼠30d的存活率和存活期。结果:单纯磁场处理对正常小鼠生存状态及存活率无明显影响;10.0Gy组和8.0Gy组小鼠生存率磁疗组与对照组之间比较均无统计学差异(P〉0.05);6.0Gy组生存率磁疗组和对照组之间比较有统计学差异(P〈0.05),其磁疗组30d平均存活率为71.43%,平均存活期为(24.93±8.43)d,对照组30d平均存活率21.4l%.平均存活期为(17.07±7.70)d。结论:旋转恒定磁场不能提高10.0Gy及8.0Gy剂量所致极重度急性骨髓型放射病小鼠的生存率,但对6.0Gy所致重度急性骨髓型放射病有明显的保护作用,从而为旋转恒定磁场应用于临床治疗重度急性骨髓型放射损伤提供了实验依据。 相似文献