羊栖菜多糖诱导lovo细胞凋亡及其机理探讨

本课题研究羊栖菜多糖(Sargassum Fusiforme Polysaccharides,SFPS)诱导人大肠癌lovo细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。MTT法检测SFPS对大肠癌细胞增殖的抑制率;通过电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术鉴定细胞凋亡;应用Western blot法测定Caspase-3酶原的变化; RT-PCR检测Caspase-3 mRNA表达。结果显示:SFPS作用lovo细胞24,36,48和72h的IC_(50)分别为375,355,178和60mg/L,表明对lovo细胞具有显著生长抑制作用。在电镜下,可见明显的细胞凋亡特征:细胞膜表面微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成。在琼脂糖凝胶电泳中,药物浓度为5-300mg/L作用24h后,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带;而500mg/L处理后梯状条带模糊,开始出现“涂片状”,表明在高药物浓度的作用下,细胞有坏死。流式细胞仪测得细胞凋亡率有剂量的依赖性;DNA直方图出现亚G1峰,但细胞周期时相的分布无明显改变。SFPS处理lovo细胞后,发现Caspase-3酶原蛋白表达降低,Caspase-3的mRNA高表达,并具有剂量和时间的依赖性。实验结果提示,SFPS在体外能够诱导lovo细胞凋亡,这可能是SFPS抑制肿瘤增殖的机制之一,而Caspase-3的活化参与了SFPS诱导lovo细胞凋亡的调控。     

羊栖菜多糖通过激活Caspase途径诱导Lovo细胞凋亡

研究了羊栖菜多糖（Sargassum Fusiforme Polysaccharides,SFPS）诱导人大肠癌lovo细胞凋亡及凋亡过程中caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性变化。MTT法检测SFPS对lovo细胞增殖的抑制率;通过电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术鉴定细胞凋亡;应用Western印迹法测定caspase-3酶原和caspase-9的变化;RToPCR检测caspase-3 mRNA表达;caspase-3,caspase-8、caspase-9活性检测试剂盒观察caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性改变。结果显示,SFPS对lovo细胞增殖有显著抑制作用,经形态变化、DNA条带和流式细胞分析,可见明显的细胞凋亡特征。SFPS处理lovo细胞后,发现caspase-3酶原蛋白表达降低,caspase-3 mRNA高表达,并具有剂量和时间的依赖性。而在检测蛋白中,也发现caspase-9被激活进而形成具有活性的片段。另外,caspase的活性检测也进一步发现caspase-3、caspase-9的活性逐步增高。实验结果提示SFPS在体外诱导lovo胞凋亡,这可能是SFPS抑制肿瘤增殖的机制之一,并且是通过激活启动caspase-9,进而激活下游效应caspase-3的级联反应来实现的。     

阳光紫外辐射对褐藻羊栖菜生长和光合作用的影响

为探讨经济褐藻羊栖菜对阳光紫外辐射变化的响应,我们在全波段阳光辐射(280－700 nm),去除UV-B辐射(320－700 nm)以及光合有效辐射PAR (400－700 nm)三种辐射条件下对其进行培养,测定了其光合作用与生长的变化。羊栖菜的生长是通过每两天测量一次藻体的湿重来测定的,光合放氧是用Clark型氧电极测定的,为了测定藻体叶绿素a和紫外吸收物质的含量,从250 nm到750 nm对羊栖菜的甲醇提取液进行扫描,叶绿素a的浓度用Porra的公式计算,紫外吸收物质的计算是根据Dunlap的方法先计算紫外吸收物质和叶绿素a的比率,然后乘以每单位藻体叶绿素a的含量。结果表明,当藻体接收较多的日辐射量时有较高的相对生长速率,当滤除UVR后,较高的太阳辐射也导致了较高的光合放氧。然而太阳紫外辐射能够抑制藻体的光合放氧和生长速率,降低叶绿素a的浓度,并且这种抑制作用随着辐射水平的升高而增强。此外,阳光紫外辐射也诱导产生了一定量的紫外吸收物质,但并不足以抵抗紫外辐射对藻体的伤害作用。     

羊栖菜多糖诱导lovo细胞凋亡及其机理探讨

本课题研究羊栖菜多糖（Sargassum Fusforme Polysaccharides．SFPS）诱导人大肠癌lovo细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。MTT法检测SFPS对大肠癌细胞增殖的抑制率：通过电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术鉴定细胞凋亡：应用Westernblot法测定Caspase-3酶原的变化：RT—PCR检测Caspase-3mRNA表达。结果显示：SFPS作用lovo细胞24,36,48和72h的IC50分别为375,355,178和60mg／L,表明对lovo细胞具有显著生长抑制作用。在电镜下,可见明显的细胞凋亡特征：细胞膜表面微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成。在琼脂糖凝胶电泳中,药物浓度为5—300mg／L作用24h后,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带：而500mg／L处理后梯状条带模糊,开始出现“涂片状”,表明在高药物浓度的作用下,细胞有坏死。流式细胞仪测得细胞凋亡率有剂量的依赖性;DNA直方图出现亚G1峰,但细胞周期时相的分布无明显改变。SFPS处理lovo细胞后,发现Caspase-3酶原蛋白表达降低,Caspase-3的mRNA高表达,并具有剂量和时间的依赖性。实验结果提示,SFPS在体外能够诱导lovo细胞凋亡,这可能是SFPS抑制肿瘤增殖的机制之一．而Caspase-3的活化参与了SFPS诱导lovo细胞凋亡的调控。     

羊栖菜多糖诱导HL-60细胞凋亡的研究

用MTT法观察羊栖菜多糖(SFPS)在体外抗人白血病HL-60细胞增殖作用;扫描电镜、透射电镜、DNA电泳和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡。结果表明SFPS对HL-60细胞具有显著生长抑制作用,并呈量效和时效关系,药物作用24,36,48,72h的IC_(50)分别为390,362,402,421mg/L;药物浓度为300mg/L和500mg/L作用HL-60细胞后,琼脂糖凝胶电泳显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带,细胞微绒毛减少、染色质固缩、过集,凋亡小体形成;DNA直方图出现亚G_1峰。在一定浓度范围内,SFPS诱导细胞凋亡的作用呈现浓度和时间依赖性,同时G_2/M期细胞比例增多。因此,SFPS抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡和G_2/M期细胞阻滞有关。     

羊栖菜褐藻糖胶部分酸水解产物中寡糖的结构分析

研究了羊栖菜褐藻糖胶DSF32部分酸水解小分子产物中寡糖的结构。DSF32经0.5 mol/L三氟乙酸(TFA)部分酸水解,水解液用截留分子量为3500 Da的透析袋进行透析,然后用D201柱将透过液分为中性糖部分(05N)和酸性糖部分(05A)。采用液质联用和甲基化分析研究了它们的结构,结果表明,05A可能存在以下寡糖:→4)G lcA(1→2)Hex(1→,→2)Hex(1→4)G lcA(1→2)Hex(1→,→4)G lcA(1→2)Hex(1→3)Fuc(1→。05N的一个组分05N-3的非还原末端是Hex(1→,还原末端是2→)Hex,寡糖中间的糖苷键类型主要是1,6,另外还有少量的1,4和1,2,6连接方式。     

东海原甲藻对羊栖菜合子生长及光合活性的化感作用研究

为评估东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense)赤潮发生对羊栖菜(Sargassum fusiformis)幼苗产量的影响并探讨其化感机理,在实验室条件下分别利用浓度为1.00×10⁵cells/mL东海原甲藻活细胞悬浮液(LC)、细胞破碎液(RC)和无细胞滤液(FC)培养羊栖菜合子,并对其生长发育及光合活性进行测定。结果显示,LC、RC和FC均会抑制羊栖菜合子的生长、叶绿素a合成和光合活性,其中FC及LC对合子的抑制程度相似且均大于RC。JIP-test分析表明,FC及LC对合子的最大量子产率(φP_o)、性能指数(PI)及PSⅡ反应中心密度(RCs/ABS)的抑制作用显著大于RC。表明东海原甲藻主要通过向细胞外释放化感物质产生抑制作用,这些化感物质抑制了羊栖菜合子PSⅡ的电子传递,使PSⅡ部分光化学反应中心(RCs)失活,进而使大量激发能转化为热能被耗散掉。而RC中可能含有某些能够刺激羊栖菜合子生长的物质,从而在一定程度上抵消了化感物质的抑制作用。结果表明东海原甲藻对羊栖菜合子的抑制作用主要是由化感物质引起的,东海原甲藻赤潮可以抑制羊栖菜合子的发育和光合活性,减少羊栖菜种苗产量,并最终阻碍了羊栖菜产业的发展。     

干出和沉水不同条件下羊栖菜光合作用碳源获得机制比较

经济海洋褐藻羊栖菜(Hizikia fusiforme(Harv.)Okamura)低潮时常常周期性地暴露于空气中.为了认识这种海藻在潮汐循环背景下的光合特征,对其在高潮沉水和低潮干出不同条件下的光合作用碳素获得机制进行了比较.沉水时,羊栖菜主要利用海水中HCO3-作为外源无机碳源驱动光合作用;而在干出条件下,其光合作用的主要碳源为空气中的CO2.在这两种不同环境条件下,光合作用与pH值的关系不同:沉水状态时,羊栖菜在高pH值(10.0)下光合活性很弱;而在干出条件下,羊栖菜在高pH值时仍有较高的光合活性.然而,光合作用无论是在沉水还是在干出条件下,对外源碳源的获得都表现出对胞外碳酸酐酶(CA)强烈的依赖性,并且其光合速率都受周围环境中无机碳源水平的限制.此外,在沉水和干出两种环境条件下,羊栖菜光合作用都表现出对氧气的敏感性.这表明,在羊栖菜中,依赖胞外CA的碳源获得机制不能使细胞内CO2浓度提高到阻碍其光呼吸的程度.增加空气中或海水中无机碳的浓度,能促进羊栖菜的光合作用,进而增加这种海藻的水产养殖产量.     

羊栖菜中褐藻糖胶的组分分离及分析

为了确定羊栖菜褐藻糖胶中的活性组分 ,用分子量结合硫酸化程度的分级方法将其分成不同组分。经热水抽提的羊栖菜多糖 ,将去除褐藻胶、海带淀粉后剩余的褐藻糖胶经过DEAE—Sepharose离子交换色谱柱和Sepharose 4B凝胶层析柱被分成 5个褐藻糖胶组分。 5个组分中硫酸基和岩藻糖近似的分子数量之比分别为 1.863、0 .0 68、1.2 2 9、1.62 9,1.0 10 ;平均分子量分别为 2 .0× 10 4 、2 .2× 10 4 、8.2× 10 4 、2 1.4× 10 4 、32 .0× 10 4 ;百分含量分别为 8.6%、2 2 .9%、4 8.5 %、5 .7%、14.3%。     

羊栖菜的药用功能研究现状

对经济海藻羊栖菜的药用功能进行综述。认为其功能主要是抗癌、提高机体免疫能力和降血脂、降血压、防治心血管疾病等。