两种不同冻存保护剂对细胞冻存效果的比较

为比较甘油和二甲基亚砜这两种细胞冷冻保护剂对同一种细胞冷冻保存的效果,通过甘油和二甲基亚砜分别与血清、基础培养基的不同配比,进而比较二者对肿瘤细胞的冻存效果,并且分别探索出二者哪种用于细胞冻存效果更好和各自最佳冻存效果的比例。本文研究成果将为细胞冻存提供更明确的冻存方法。     

冷冻处理对驴肉品质的影响研究

为明确冷冻处理对驴肉品质的影响，本研究以成熟48 h的驴肉为研究对象，测定了冷冻处理前后驴肉pH值、含水量、解冻损失、挥发性盐基氮、肉色等理化及感官指标，发现冷冻前后驴肉pH值、含水量之间无显著差异，不同部位肉常温解冻损失不同，冷冻处理后挥发性盐基氮含量上升，L*、a*下降，b*变化不明显。为达到规模化驴肉生产的提质、减损、增效的目的，有必要针对性的开展驴肉贮藏及解冻技术研究。     

小鼠休眠胚胎与正常胚胎冻融后体内外发育潜力的比较

目的检验小鼠休眠胚胎冻融后的质量及体内外发育潜力,为胚胎休眠技术的生产应用提供必要的参考。方法采用常规冷冻方法将正常孵化期胚胎和休眠胚胎进行冷冻,之后分别进行体外复苏培养实验和胚胎移植实验。随后利用双重荧光染色的方法分别对冻融前后的小鼠休眠胚胎与正常孵化期胚胎进行细胞计数,观察两种胚胎冻融前后的质量变化。结果休眠胚胎的冷冻解冻回收率、发育率均极显著高于孵化期胚胎(72.1%vs 50.2%,P<0.01;94.2%vs 73.9%,P<0.01)。休眠胚胎的移植妊娠率显著高于孵化期胚胎(40.8%vs 30.1%,P<0.05)。休眠胚胎的内细胞团细胞数显著高于孵化期胚胎(27.83 vs 19.53,P<0.05),滋养层细胞数差异不显著。冻融培养后休眠胚胎的内细胞团数,滋养层细胞数均显著高于孵化期胚胎(25.18 vs 14.68,P<0.05;114.09 vs 73.88,P<0.05)。结论小鼠休眠胚胎冻融后胚胎质量及体内外发育潜力均优于小鼠正常孵化期胚胎。     

蔗糖和海藻糖对水牛卵母细胞玻璃化冷冻保护效果的比较

本实验比较蔗糖或海藻糖作为非渗透性保护剂对水牛成熟卵母细胞冷冻效果的影响。将体外成熟的水牛卵母细胞随机分成对照组、蔗糖组、海藻糖组,研究玻璃化冷冻后的存活率、细胞骨架和孤雌激活后发育潜能的变化。结果表明:玻璃化冷冻中蔗糖组(89.68%)与海藻糖组(91.81%)的存活率差异不显著;冻融后的卵母细胞在细胞骨架方面的表现为:蔗糖组和海藻糖组的纺锤体结构、染色体形态与微丝分布正常率分别为34.69%、42.83%、39.13%和39.51%、49.43%、42.61%,两组间差异不显著(p0.05),但均明显低于对照组(66.40%,71.82%,76.18%,p0.01);在进一步研究发育潜能中发现,冻融后卵母细胞的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数在实验组中均无显著性差异(p0.05),但两组的卵裂率、囊胚率均显著低于对照组(p0.01)。综上所述,玻璃化冷冻时添加蔗糖或海藻糖作为非渗透性保护剂对水牛成熟卵母细胞的保护作用差异不明显,表明两者均可在冷冻时添加使用。     

江苏金坛盐矿形成时期盐湖水体成分:来自石盐包裹体的证据

我国白垩纪晚期-古近纪由于燕山运动和喜马拉雅运动,形成了一系列的断陷盆地,金坛盐矿就是该时期始新世中晚期的盐湖沉积.本次研究首次在国内半定量的进行了石盐原生包裹体的分析,发现其中Ca2+缺失而富含SO2-4,原始卤水成分为Na-Mg-K-Ca-C1-SO4体系.     

麋鹿人工授精技术初步研究

为了为麋鹿的人工繁殖提供理论基础,2007年7月～2009年6月对麋鹿人工授精技术进行了研究.2007年7月,对5只雄性麋鹿进行了6次电刺激采精试验,成功率100%(6/6),采得的精液品质优良,采精量为0.7～4.0 mL,平均采精量(1.7±1.3)mL,平均精子密度(14.25±2.88)亿/mL,精子活力为50%～80%.2007年,应用孕激素类药物(CIDR)对6只雌鹿进行同期发情处理,采用定时1次人工输精,鲜精输精6只,受胎1只,受胎率为16.7%;2008年,5只雌鹿发情采用雄鹿试情,冻精输精5只,受胎1只,受胎率20%.这两只麋鹿孕期分别为288 d和268 d.     

胭脂鱼(Myxocyprinus asiaficus)精液超低温冷冻保存及酶活性测定

为了找到适合珍稀鱼类胭脂鱼的物种保存方法,本研究比较了不同的稀释液(D-17, D-20, Ringer液和Kurokura-1)以及不同的稀释比例(1∶2, 1∶3, 1∶6)、不同的抗冻剂(二甲亚砜,甘油和甲醇)以及不同的添加浓度(8%, 10%, 12%)对胭脂鱼精子超低温冷冻保存效果,结果显示:稀释液D-17、D-20保存效果显著优于Ringer液、Kurokura-1 (p0.05);D-17稀释液的最佳的稀释倍数为1∶3,D-20稀释液的最适稀释比例为1∶3或1∶6;冷冻保存107 d后,D-20 (1∶6)配方的激活率最高,达(81.67±2.89)%;抗冻剂二甲亚砜保存效果显著优于甘油和甲醇(p0.05),二甲亚砜的最适添加浓度为8%。同时测定了添加D-17 (1∶3)抗冻液、Ringer液(1∶3)抗冻液和未添加抗冻液冻存样本精浆中酶活力,结果显示未添加抗冻液精浆中ATPase、SDH、LDH、CK、GOT活性均高于添加抗冻液的样品;添加抗冻液D-17 (1∶3)的样品精浆中ATPase、SDH、CK、GOT的含量低于冻存相同天数的Ringer液(1∶3)样品;精浆中ATPase、SDH、LDH、CK、GOT含量随冻存时间的延长呈上升趋势。本研究为保护淡水珍稀鱼类胭脂鱼的种质资源提供了理论基础。     

大熊猫精液和包皮菌群组成及潜在致病菌调查

[目的] 大熊猫是我国国家一级保护动物,其种群面临着传染病和栖息地破碎化等持续威胁,其中生殖系统的细菌感染和菌群失衡会影响大熊猫生殖健康,严重者可导致流产,是引起大熊猫繁殖障碍的原因之一。本研究对精液与包皮分泌物样本的菌群组成情况及分离培养潜在致病菌开展研究。[方法] 通过采集13份大熊猫包皮分泌物和12份精液样本,采用16S rRNA扩增子测序技术、细菌培养及PCR鉴定的方法,确定样本中的细菌种类。[结果] 菌群组成分析结果显示,在门水平上,厚壁菌门（Firmicutes）的细菌丰度在大熊猫包皮与精液中均为最高;在属水平上,不同时期的雄性大熊猫包皮的菌群可能会发生改变,棒状杆菌属（Corynebacterium）和Dolosicoccus是Ⅰ期包皮样本中最丰富的微生物菌群,相对丰度分别为15.45%和12.40%;链球菌属（Streptococcus）和埃希氏菌属（Escherichia）是Ⅱ期包皮样本中最丰富的微生物菌群,相对分度分别为37.94%和9.68%;拟杆菌属（Bacteroides）和普雷沃氏菌属（Prevotella）是精液样本中最丰富的微生物菌群,相对丰度分别为14.40%和12.88%。菌群多样性分析结果显示,精液样品高于Ⅰ期包皮样品和Ⅱ期包皮样品,Ⅰ期包皮样品和Ⅱ期包皮样品之间无显著差异。通过细菌分离培养得到肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumonia）在内的多种潜在性致病菌。[结论] 本研究分析了大熊猫精液和不同时期包皮分泌物的菌群组成,其优势菌属存在差异,大熊猫包皮与精液中存在潜在性致病菌,这可能对大熊猫的生殖系统健康带来威胁,其致病性有待进一步研究。     

人脐带血有核细胞冷冻干燥保存实验初步研究

脐带血中的造血干细胞有着广泛的应用前景,随之而产生的保存问题已成为关注的热点。目前已有低温保存的研究,但未有冻干成功的报道。实验试图用冻干的方法来长期保存脐带血中的造血干细胞。冻干过程中选用PVP、HES和各种糖类作为保护剂,一次干燥阶段搁板温度控制在-30℃,二次干燥时搁板温度控制在 15℃,整个冻干过程为52．5h。冻干后复水性能极佳,能够在30s内完全复水,用显微染色观察,细胞形态完整;用流式细胞仪进行PI染色和CD34^ 抗体跟踪检测,测得有核细胞存活率为55．67％,CD34^ 抗体跟踪检测得到CD34^ 细胞占淋巴细胞的3．61％。