稀释液中添加海藻糖对山羊精子功能和膜完整性的影响

选用5只年龄为3～4岁的波尔山羊公羊研究在稀释液中添加海藻糖对山羊精子功能和膜完整性的影响。山羊精子分别用含6.6 mmol/L、13.2 mmol/L、19.8 mmol/L、26.4 mmol/L、39.6 mmol/L、52.9 mmol/L、66.1mmol/L、79.3 mmol/L的不同海藻糖的Tris-柠檬酸-葡糖糖(TCG)稀释液(卵黄:18%;甘油:6%)稀释和冷冻。结果表明:39.6 mmol/L、52.9 mmol/L、66.1 mmol/L、79.3 mmol/L组降温后的精子活率显著(P<0.05)降低;52.9 mmol/L、66.1 mmol/L、79.3 mmol/L组降温后的精子畸形率和39.6 mmol/L组降温后的膨胀精子率显著(P<0.05)提高。26.4 mmol/L组和39.6 mmol/L组冻融后的精子活率显著(P<0.05)高于对照组;66.1mmol/L和79.3 mmol/L组冻融后的精子活率、畸形率分别显著(P<0.05)低于和高于对照组。19.8 mmol/L、26.4 mmol/L、39.6 mmol/L组冻融后精子获能率显著(P<0.05)低于对照组。39.6 mmol/L组冻融后顶体完整率和膨胀精子率显著(P<0.05)高于对照组,而66.1 mmol/L组和79.3 mmol/L组显著(P<0.05)低于对照组。39.6 mmol/L组的受胎率显著(P<0.05)高于对照组,而66.1mmol/L组和79.3 mmol/L组的受胎率显著(P<0.05)低于对照组。结果表明,在含18%的卵黄(v/v)、6%甘油(v/v)的TCG稀释液中,添加适宜浓度(26.4mmol/L和39.6 mmol/L)海藻糖,可显著提高山羊精子功能和膜的完整性。     

白鹤冷冻精液人工授精实验

为了探索鹤类精液冷冻保存和使用技术,2003～2005年,进行了白鹤(Grus leucogeranus)的冷冻精液保存及人工授精实验。使用Beltsville家禽精液稀释液作为白鹤精液稀释液,12%的二甲基亚砜(DMSO)为冷冻液。精液样本冷冻经过三个阶段的降温,最后保存在液氮中。成功保存了编号93001雄性白鹤精液36 支（0.2 ml/支）。冷冻精液在0~4℃冰水中解冻3~5 min,解冻后白鹤精液精子活率为29.3%±15.5%（n=16）,2004和2005年分别为92101号雌鹤产的两窝卵进行人工授精实验,2年共产卵5枚,其中1枚卵受精并成功孵化。实验发现在雌鹤产卵前一周和产卵期间每天输精,并增加每次输精量,同时在产完1枚卵后4 h内完成一次输精,效果最佳。     

不同稀释液对冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗质量的影响

为选择合适的的冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗的稀释液,以注射用水(H2O)、生理盐水(NS)、磷酸盐缓冲液(PBSpH6.8～7.2)作为候选稀释液,进行了相关溶解度、pH、渗透压、异常毒性、免疫原性的检测比较。溶解度、pH、免疫原性结果显示三种稀释液无差异;H2O作为稀释液的渗透压不符合人用制剂渗透压的要求,另两者则符合要求;三种稀释液溶解制品后的pH检测数据均符合要求,但PBS的缓冲能力更强。故认为PBS更适合作为冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗的稀释液。     

不同稀释液对圈养黑熊精液品质的影响

对23头圈养黑熊进行63次电刺激采精,并在对精液进行品质检查的基础上,通过对3种稀释液4℃保存精液结果的筛选比较试验,得出以下结果:圈养黑熊采精量平均为1.06±0.93ml,pH值为6.71±0.44,精子密度为(3.23±1.68)×108个/ml,精子畸形率为(23.48±7.95)%,顶体完整率为(88.58±3.86)%,精子活率和活力分别为(76.30±13.91)%和(63.91±18.53)%;Tris-柠-果-葡-卵稀释液保存圈养黑熊精液效果最好,可作为进一步研究优化的首选。     

cDNA文库的快速构建法

ｃＤＮＡ文库的快速构建法周立,任东路（中国科学院发育生物学研究所,北京１０００８０）ｃＤＮＡ文库的构建是现代分子生物学中一门重要的技术。它主要用于基因的筛选。通过这种方法能够得到完整的编码蛋白质的目的片段。通过构建表达型ｃＤＮＡ文库还能分离到调控基因转录的蛋白质因子的基因。此外,差别筛选（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）技术有助于我们获得在发育的不同阶段特异表达的基因片段。     

CELL-DYN1700血液分析仪试剂的研制与应用

目的　为了降低实验成本而研制一种稳定性、准确性良好的配套试剂。　方法　研制试剂采用Na Cl、 Na HPO4、 KH2 PO4、 EDTA- Na2 为稀释液 ,稀释中加入适量酶、表面活性剂为清洗液 ,CH3( CH2 ) 11N+ ( CH3) 3Br-为溶血剂。测定两种试剂的理化指标、Hb吸收光谱、溶血速度 ,以及清洁度的比较 ;并在 CELL- DYN170 0血液分析仪上进行两种试剂的对比试验。　结果　与进口试剂比较 ,重复性、准确性、稳定性 ,两者无显著性差异 ( P >0 .0 5,平均 r=0 .96 831) ,研制试剂通过测定 CELL- DYN系列专用质控品试验 ,结果与靶值很接近 ,准确性良好 ,试剂存放半年 ,检测本底几乎为零。　结论　研制试剂可替代进口试剂用于临床 ,成本约为进口试剂的 2 0 % ,临床应用效果满意     

氨基酸分析仪测定脑组织中兴奋及抑制性氨基酸的实验研究

本文在传统分析方法的基础上,采用pH2.20的柠檬酸锂稀释液作为脑组织中兴奋性及抑制性氨基酸样品的预处理,经重复性、回收率以及平均值变异系数等项指标试验,结果改良后的分析方法有较好的重复性、回收率均在96%以上,此方法优于传统的分析方法。     

几种冷冻稀释液与单胺类防冻剂对中缅树鼩精子冷冻存活率的影响

该文实验精子采自昆明地区经笼养驯化的树鼩(Tupaia belangeri),检测其冷冻前后运动度、顶体完整率以及检测部分冷冻精子的受精能力。实验一:选用8种已报道的冷冻稀释液TTE、TCG、TCF、TTG、BWW、BTS、DM、SR稀释鲜精,并添加0.4mol/LDMSO,4℃预冷平衡2h后,TTE、DM和SR稀释液的精子的运动度与鲜精无差别(P>0.05),其余处理组均显著下降(P<0.05)。冷冻复苏后,各组的运动度显著低于预冷平衡处理后的运动度(P<0.05);DM组的复苏运动度显著高于其他稀释液组(P<0.05),BWW组最低(P<0.05)。对于顶体完整率,与鲜精相比,4℃平衡2h后,TTE和DM组精子的顶体完整率显著高于BWW、BTS和SR组(P<0.05)。冷冻复苏后,DM组精子的顶体完整率显著高于其它(除了TTE)冷冻组(P<0.05)。实验二:在DM稀释液基础上分别添加4种浓度0.2、0.4、0.8和1.2mol/L的二甲基甲酰胺(DF)、甲酰胺(F)、二甲乙酰胺(DA)和乙酰胺(A)以及0.4mol/LDMSO,经过预冷平衡处理后,与鲜精相比,各防冻剂组的精子运动度没有下降(P>0.05);冷冻解冻后,各冷冻组精子的运动度显著低于预冷平衡处理后的精子运动度(P<0.05);0.8mol/LDF和0.4mol/LDMSO组精子的运动度显著高于其它冷冻组(P<0.05)。对于顶体完整率,预冷平衡处理后各高浓度组的比率显著下降;冷冻复苏后,0.4mol/LF和0.4mol/LDF组精子的顶体完整率相对较高。实验三,人工授精实验中,DM+0.8mol/LDF冷冻精子的受精率为16.7%,DM+0.4mol/LDMSO的受精率为50.0%。以上实验结果提示,含卵黄的非离子冷冻稀释液对树鼩精子冷冻保护效果好,但单胺类防冻剂的防冻效果还需进一步深入研究。     

原鸡采精技术与精液品质研究

以原鸡滇南亚种为研究对象,利用性欲反射强度、精液采集量等评判指标,探索适合于原鸡的人工采精技术.通过对精液感官评定和显微镜检,构建精液常规生理指标;在精液中,分别添加NaCl(0.9%、1%)、葡萄糖(5%、5.7%)、卵黄液(10%、13%)、蔗糖液(11%、13%)等4种稀释液,测量不同处理精子的活力、畸形率、质膜完整性、存活时间和生存指数,探讨稀释液、不同季节及二者交互作用对精液品质的影响,筛选新鲜精液的最优稀释液.结果表明:改进后的人工采精技术可使采精量增至0.16 ml、成功率达96%以上.精液中性微偏酸性(pH∶ 6.7～7.0),呈现"有云雾状"特性、春秋季较明显,呈乳白色或乳黄色,略带腥味.精液量为(0.13±0.02) ml (0.10～0.16 ml),精子密度为(15.03±4.46)×10~8个/ml(11.61×10~8～22.16×10~8个/ml),活力为(93.91±0.08)%(93.20%～95.00%),质膜完整性为(93.75±2.71)%(91.60%～95.64%),畸形率为(5.53±1.59)%(4.55%～6.48%).NaCl(0.9%、1%)、葡萄糖(5%、5.7%)和11%蔗糖液均可作为新鲜精液稀释液,其总存活时间达32 h以上,考虑对畸形率、活力和质膜完整性等影响,以1%NaCl处理效果相对最佳.就精子活力和质膜完整性而言,原鸡采精的季节(月份)对稀释液具有一定选择性.