MMP-9基因多态性与缺血性脑卒中发病及预后的相关性研究

目的:研究基质金属蛋白酶9(MMP-9)基因多态性与缺血性脑卒中(IS)发病及预后的相关性,为IS的防治提供新的理论依据。方法:选取治疗的IS患者100例,根据TOAST分型标准分为大动脉粥样硬化型(LAA)组41例,小动脉阻塞型(SAO)组59例,并选取健康体检者40例作为对照组,采用PCR-RFLP法检测各组MMP-9基因C1562T、R279Q多态性,并对IS患者进行3个月的随访,采用Logistic回归分析C1562T、R279Q多态性与IS患者预后的相关性。结果:LAA组、SAO组MMP-9基因C1562T位点T等位基因、C/T+T/T基因型频数均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),LAA组、SAO组C1562T位点C等位基因、C/C基因型频数及R279Q位点等位基因和基因型频数与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);Logistic回归分析显示,MMP-9各型别基因与预后无明显相关性(P0.05)。结论:MMP-9基因C1562T的T等位基因是IS发病的穿易感基因之一,但MMP-9基因多态性与IS患者的预后并无明显相关性。     

桃江县毛竹林生态系统碳储量及其空间分布

采用标准地调查和生物量实测方法,研究了湖南省桃江县毛竹林生态系统生物量、碳含量、碳储量及空间分布格局。结果表明,不同年龄毛竹林生态系统总生物量分别为:28.147、30.889 t/hm~2和57.763 t/hm~2,其中竹林层生物量为20.254、25.036、55.685 t/hm~2,各器官生物量均以竹竿最高,占器官生物量的63.0%以上。不同年龄毛竹各器官碳平均含量为0.466—0.483 g C/g;灌木层碳含量为0.474—0.489 g C/g;草本层为0.472—0.490 g C/g;死地被物层为0.213—0.276 g C/g;土壤层有机碳含量为14.790—34.503 g C/g。各年龄毛竹林生态系统总碳储量分别为131.273、139.089 t/hm~2和167.817 t/hm~2,其中植被层碳储量为13.627—28.419 t/hm~2,占系统总碳储量的9.935%—16.935%;死地被物为0.307—0.420 t/hm~2,占0.234%—0.265%;土壤层为117.339—138.978 t/hm~2,占82.815%—89.799%。毛竹林生态系统碳储量分布格局为:土壤层植被层死地被物层。研究结果可为深入研究毛竹林的碳平衡提供基础数据。     

六盘山地区油松树轮宽度年表与多尺度标准化降水指数的关系

研究利用在六盘山地区采集的油松树轮样芯建立树轮宽度标准年表(STD),分别与不同长度时间单元(月、半月、旬)和多时间尺度的标准化降水指数(SPIn)序列进行相关性分析。油松标准年表与不同长度时间单元SPI的相关结果显示,较小的时间单元会使相关性表达更加精确,而时间单元过小则会因为数据波动性增大而导致相关关系弱化。因此,相较于月和旬,半月是相关性分析更为合适的时间单元长度。油松标准年表与多时间尺度SPI的相关结果显示,SPI多时间尺度的特性有助于揭示油松径向生长对不同时间尺度水分状况的响应特征,且油松在不同生长时期对于不同时间尺度水分状况具有相异的响应机制。在温度较低(0℃)的冬季,短时间内的降水并不利于树木生长,而长时间良好的水分储备会为树木生长季需水提供保障;在生长季前期,长时间良好的水分状况比短期内的降水更有利于树木的生长;在生长季,补给性水分和土壤水分都对树木生长起着至关重要的作用。     

植物基因转移方法

基因工程的诞生和发展是与基因转移方法的出现和发展分不开的。为了实现不同的目标，就需要各种各样的基因转移方法。一般来说，向植物中转移基因，存在的困难要比微生物和动物多些；但由于植物基因工程对作物改良的重要性，近年来获得了迅速发展，各种基因转移方法层出不穷。本文系统地介绍了现有的植物基因转移方法。     

小麦丛矮病毒基因组5‘端尾随区的克隆及序列分析

根据已知的弹状病毒聚合酶Ｌ蛋白分子中一段高保守的８个氨基酸顺序ＥＧＬＲＱＫＧＷ，合成简并的２４核苷酸引物，用锚定ＰＣＲ方法从小麦丛矮病毒（ＷＲＳＶ）基因组中扩增出包含全长５‘尾随区和部分Ｌ蛋白基因的ＤＮＡ片段，并克隆到ｐＵＣ１９Ｔ载体上，经测序，获得全长的ＷＲＳＶ基因组５’尾随区顺序。     

利用磁珠构建稻瘟菌cDNA文库

本文以稻瘟菌菌丝体为材料提取RNA,[目的]改进张学敏等人的方法,通过磁珠构建稻瘟菌cDNA文库,并用于下一步研究稻瘟菌与水稻之间的互作关系.[方法]通过共价键连接的寡聚oligo(dT)磁珠纯化mRNA,并以磁珠上的oligo(dT)为引物引导第一链cDNA的合成,再利用末端转移酶加尾法合成第二链cDNA.构建过程中避免使用限制酶和连接接头.[结果]用此方法构建的文库容量为8.9×107cfu,滴度为8.9×106 cfu/mL,随机挑取的25个克隆插入片断平均大小达到1380bp.[结论]实验结果表明用改进的方法可构建高质量的cDNA文库,并且方便快捷,所用材料少,构建时间短,利于大规模的功能基因分析.     

产甘油假丝酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶基因（CgGPD）功能分析

【目的】从高产甘油生产菌株产甘油假丝酵母（Candida glycerinogenes）基因组中克隆了NAD+依赖3-磷酸甘油脱氢酶编码基因（CgGPD），但是该基因及其上游调控序列具体的功能还是未知的。本文研究了CgGPD基因及其上游调控序列的功能。【方法】本文以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）及其渗透压敏感型突变株为宿主，构建3种不同的酵母表达载体导入酵母细胞，研究了不同酵母转化子在渗透压胁迫条件下CgGPD基因表达对细胞的耐高渗透压胁迫应答及其细胞的甘油合成能力的影响。【结果】实验结果表明无论是以来源于S. cerevisiae 的TPI启动子还是来源于CgGPD基因的启动子，过量表达CgGPD基因的转化子均能够显著加速葡萄糖消耗速度和提高甘油合成能力，在gpd1/gpd2突变株中表达CgGPD基因能够消除细胞对外界高渗透压的敏感性，同时转化子胞内甘油大量积累。【结论】CgGPD基因在野生型酵母S. cerevisiae W303-1A表达显著提高细胞的甘油合成能力，在gpd/1gpd2突变株中能够互补GPD1基因的功能，CgGPD基因表达受渗透压诱导 调控。     

不同光质光对葡萄愈伤组织增殖和白藜芦醇含量的影响

研究不同光质影响‘黑比诺’种子诱导并继代10个月的葡萄愈伤组织增殖及白藜芦醇含量的结果表明：不同光质下愈伤组织的增殖顺序依次为黄光〉绿光〉红光〉蓝光〉白光；白藜芦醇的含量依次为白光〉黄光〉红光〉蓝光〉绿光：白藜芦醇的生产量是白光〉黄光〉红光〉蓝光〉绿光。     

应用DNA芯片鉴定HPV18 E6-siRNA诱导HeLa 细胞凋亡的分子机制

高危型人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）的E6基因在宫颈癌的发生中起关键作用，特异siRNA能有效抑制宫颈癌HeLa 细胞内HPV18 E6基因的表达，诱导肿瘤细胞凋亡.为进一步探讨HPV18 E6-siRNA诱导HeLa 细胞凋亡的分子机制，针对HPV18-E6基因设计siRNA序列，利用人源U6启动子为模板，经PCR表达框架法体外扩增，转染宫颈癌HeLa细胞抑制HPV18 -E6基因表达，从而诱导肿瘤细胞凋亡.对转染前后HeLa细胞总RNA样品进行荧光标记后，与Agilent Human 1A寡核苷酸芯片杂交、扫描、数据分析及标准化处理，确定表达差异的基因并经荧光定量PCR对部分基因进行验证，结合PANTHER数据分析系统，将这些基因按照生物学功能进行归类，查阅GenBank数据库及相关文献，对其结果进行深入分析及讨论.在检测的18 716个基因和EST中，共筛出差异表达基因359个，其中307个基因表达上调，52个基因表达下调，主要包括细胞周期相关基因CCNG1、p21；凋亡相关基因CASP4、CASP6、IGFBP3、DFFA；泛素蛋白酶解途径相关基因E6-AP、UBE2C；角化细胞分化相关基因KRT4、KRT6E、KRT18；抑癌基因RECK、VHL等.研究结果表明，HPV18 -E6基因抑制引起的细胞凋亡效应主要是通过P53信号途径和泛素蛋白酶解信号途径调节细胞周期相关基因和凋亡相关基因的表达，从而抑制HeLa细胞增殖、促进细胞凋亡.同时，抑癌基因的激活，角化细胞分化和免疫相关基因的表达上调，都说明了E6抑制后肿瘤细胞恶性转化程度的下降.     

BPH-1通过分泌PGE2上调前列腺间质细胞ERRα的表达

摘要 雌激素受体相关受体α（estrogen receptor-related receptor α，ERRα）是一类可以直接或间接参与雌激素应答反应的孤儿核受体，它与雌激素受体（estrogen receptor）在结构上有很强的同源性．雌激素效应在良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasis，BPH）的发生和发展中起着重要的作用．通常，孤儿核受体的转录活性多受一些非经典激素如维生素A衍生物、前列腺素类、固醇的调控．本文研究前列腺上皮细胞分泌的活性因子对间质细胞ERRα表达调控的分子机制．收集前列腺增生上皮细胞系BPH-1和前列腺癌上皮细胞系DU-145的条件培养液（condition medium，CM）培养的间质细胞，采用实时定量RT-PCR和Western 印迹法检测前列腺间质细胞（prostate stromal cells，PrSCs）中ERRα的表达，筛选CM中影响ERRα表达的活性因子．研究结果显示，BPH-1的CM可以上调ERRα的表达，而DU-145的CM对ERRα的表达没有影响；BPH-1中合成前列腺素E2 (prostaglandin E2, PGE2)的限速酶——环氧合酶2（cyclooxygenase-2, COX-2）的mRNA表达水平和PGE2的分泌水平明显高于DU-145中COX-2表达水平和PGE2分泌水平；用经添加COX-2抑制剂NS-398的培养液处理BPH-1，其CM中PGE2的浓度明显下降，并失去了对ERRα表达的上调作用；添加PGE2可上调间质细胞中ERRα的表达．结果表明，BPH-1通过分泌PGE2促进间质细胞ERRa的表达，提示：在良性前列腺增生的发生和发展中，上皮细胞的旁分泌作用可促进间质细胞由ERRα介导的雌激素效应．