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国内免费 | 683篇 |
出版年
2023年 | 102篇 |
2022年 | 101篇 |
2021年 | 130篇 |
2020年 | 151篇 |
2019年 | 127篇 |
2018年 | 120篇 |
2017年 | 87篇 |
2016年 | 101篇 |
2015年 | 108篇 |
2014年 | 265篇 |
2013年 | 226篇 |
2012年 | 295篇 |
2011年 | 296篇 |
2010年 | 306篇 |
2009年 | 324篇 |
2008年 | 573篇 |
2007年 | 293篇 |
2006年 | 260篇 |
2005年 | 323篇 |
2004年 | 315篇 |
2003年 | 285篇 |
2002年 | 334篇 |
2001年 | 277篇 |
2000年 | 205篇 |
1999年 | 162篇 |
1998年 | 154篇 |
1997年 | 155篇 |
1996年 | 120篇 |
1995年 | 118篇 |
1994年 | 117篇 |
1993年 | 123篇 |
1992年 | 95篇 |
1991年 | 96篇 |
1990年 | 92篇 |
1989年 | 55篇 |
1988年 | 52篇 |
1987年 | 16篇 |
1986年 | 14篇 |
1985年 | 16篇 |
1984年 | 9篇 |
1983年 | 7篇 |
1982年 | 3篇 |
1981年 | 6篇 |
1980年 | 2篇 |
1966年 | 1篇 |
1963年 | 2篇 |
1958年 | 1篇 |
1957年 | 1篇 |
1950年 | 1篇 |
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1.
目的:探讨SD大鼠肺微血管周细胞(rat pulmonarymicrovessel pericytes,RPMPC)的分离、培养与鉴定方法。方法:采用机械剪切、Ⅰ型胶原酶消化法和微孔过滤结合超高速离心法分离大鼠肺微血管片段,用含15%胎牛血清(FBS)的高糖培养基(DMEM)进行培养,倒置显微镜观察原代RPMPC的形态及生长特性。免疫荧光法检测神经元-胶质抗原2(neuron-glial antigen 2,NG2),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、结蛋白(desmin)和CD31相关抗原的表达,同时应用免疫细胞化学法检测血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)的表达。CCK-8测定周细胞生长曲线。通过周细胞-内皮细胞共培养成管实验检测细胞成管能力。结果:本方法培养获取的RPMPC纯度较高,并能连续传代。细胞48 h后爬出,呈长梭形、三角形等不规则形,8~10 d细胞汇合,呈栅栏或旋涡状生长,无接触性抑制,前期可见有少量内皮细胞伴随生长,单核偶见双核,核呈卵圆形,胞浆丰富。PDGFR-β、α-SMA、NG2、desmin染色阳性,CD31阴性;周细胞与内皮细胞共培养形成管腔结构。结论:通过本方法能够获得纯度较高的肺微血管周细胞,且所获细胞具有周细胞的特性及功能。 相似文献
2.
3.
4.
旨在探究抗病品种与易感品种香蕉的健康株和病株内生菌与其中广谱拮抗菌的主要分布规律,并对广谱拮抗菌进行拮抗活性的测定。以样品根、球茎、假茎、叶为材料分离培养内生菌,在实验室条件下,筛选对供试的10种香蕉致病菌均有良好拮抗活性的菌株并测定它们的拮抗活性,对活性最强的菌株进行形态学、16S rDNA序列同源性分析。结果显示,分离得到内生菌438株,其中细菌240株,放线菌142株,真菌56株。抗病品种南天黄病株中分离得到的内生菌最多,共计128株。内生菌数量在香蕉植株中的分布呈现规律为:根部球茎部假茎部叶部。内生真菌在各香蕉种病株中的分布最广泛。筛选出具广谱活性的放线菌10株、细菌2株。其中内生放线菌菌株041的广谱拮抗活性最强,最大抑菌带宽为28.13±1.89 mm。对广谱拮抗内生放线菌菌株041、04-1、19-1、03A-1进行的形态学和16S rDNA序列分析表明,它们属于链霉菌属。 相似文献
5.
在胎儿组织中存在一类低分子肿瘤抑制物,胎肝细胞的甲醇-丙酮提取物中保留有大部分抑瘤活性,用体外液体培养条件下对人急性粒系白血病细胞系(HL-60)的抑制作用为指标,跟踪指导分离过程,提取物经反相C18中压液相色谱,Sephadex LH-20凝胶色谱及氨基键合相高效液相色谱分离得到一纯活性物质。经NMR和MS鉴定为7-酮基胆固醇(7-ketocholesterol,7-KC)。体外琼脂培养条件下7-KC对小鼠WEHI-3和S-180细胞较对正常小鼠骨髓粒-巨噬系祖细胞有更强的抑制增殖及集落生成作用,7-KC对HL-60细胞增殖较对正常人骨髓CFU-GM有更强的抑制作用。 相似文献
6.
目的:探究尖波间期和无尖波恢复期颞叶癫痫大鼠模型的海马CA1网络theta节律随癫痫发展进程的变化规律。方法:14只成年雄性Wistar大鼠(200~250 g)麻醉后开颅,在海马的背侧埋入一个双极性钢电极(直径小于1 mm),在颅骨上埋入三个不锈钢皮质电极,在左和右额皮质内分别植入两个电极,在小脑埋入参考电极,粘合颅骨,检测、记录大鼠脑电图;之后腹腔注射癫痫诱发药物,匹罗卡品氢氯化物(pilocarpine hydrochloride,310 mg/kg),30 min后给予大鼠莨菪碱 (scopolamine, 1 mg/kg);借助14只大鼠在嗅行(exploration)时脑深部记录(SEEG),应用Gabor小波时频能量分析估算断裂段数(以350 ms为1段),与总段数的比值定义为断裂比,用来衡量theta节律断裂程度,分别计算了癫痫发展进程的早期(D7)和晚期(D25)中两个邻近尖波之间时间段(定义为尖波间期)和随后无尖波恢复期theta节律断裂比,与注射前脑电图比较。结果:① 与对照脑电图比较,癫痫诱发大鼠的D7和D25的theta节律断裂比显著升高(P<0.05),并且D7远高于晚期D25;② 在无尖波恢复期,theta节律断裂比与尖波间期相当 (P<0.05)。结论:癫痫尖波直接导致了theta节律断裂,断裂程度将随癫痫发展进程而动态变化,早期伤害尤其严重。 相似文献
7.
脂肪酶假单胞菌的分离培养及最佳产酶条件研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以麻疯树油为唯一碳源,从以粉碎的麻疯树种子处理过的土壤中分离筛选出1株脂肪酶活性较高的菌株,初步鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas).实验观察了碳源、氮源、无机盐及发酵工艺对产酶的影响,摇瓶发酵结果表明.该菌株最适产酶培养基的组成是(%,w/v):橄榄油2,酵母膏0.5,(NH4)2SO4 0.5,MgCl2·6H2O 0.5,最适产酶温度为30℃,最佳产酶pH为6.5,转速180r/min,发酵培养36h酶活达到最高,为14.17U/mL.本研究为以麻疯树油为原料酶法生产生物柴油奠定了一定的基础. 相似文献
8.
大鼠皂素蜕膜心肌肌钙蛋白Ca^2+敏感性的实验研究 总被引:3,自引:0,他引:3
采用500μg/ml皂素溶液浸浴大鼠右室乳头肌30min制备蜕膜心肌纤维标本。经撤除MgATP法检验,肌膜通透性明显增高。用含不同浓度Ca ̄(2+)(以Ca ̄(2+)浓度负对数pCa表示)的激活液进行顺序激活,记录Ca ̄(2+)激活张力,其张力-pCa关系曲线描述了肌钙蛋白(TN)对Ca ̄(2+)的亲和特性;曲线中位值pCa_(50)(即产生50%最大张力所对应的pCa)是反映TNCa ̄(2+)敏感性的定量指标。本实验观察到大鼠右室乳头肌张力-pCa关系曲线呈S形,测得pCa_(50)为5.727±0.086(n=16);撤除激活液中磷酸肌酸和磷酸肌酸激酶,张力-pCa曲线左移位,pCa_(50)增高至6.194±0.121(P<0.01)。 相似文献
9.
10.
毛梗豨莶草(Siegesbeckia glabresce)的乙酸乙酯萃取部位具有显著的抑制细胞坏死性凋亡(necroptosis)的活性。为明确毛梗豨莶草的活性成分,该研究采用正相硅胶柱色谱谱(二氯甲烷:甲醇20:1~0:1)、反相ODS柱色谱(30%~100% 甲醇)、Sephadex LH-20柱色谱、重结晶等方法对毛梗豨莶草乙酸乙酯萃取部位进行了化学成分分离和纯化,并根据理化性质和波谱数据进行了结构鉴定。结果表明:从毛梗豨莶乙酸乙酯部位分离并鉴定了9个化合物,分别为3,7-二甲氧基槲皮素(1)、芹菜素(2)、奥卡宁(3)、okanin-4''-O-β-D-6″-trans-p-coumaroylglucoside(4)、1H-Indole-3-carbaldehyde(5)、对羟基苯甲醛(6)、3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲醛(7)、3,4-divanillyltetrahydrofuran(8)、buddlenol D(9)。除化合物1和化合物6外,其余7个化合物均为首次从豨莶属植物中分离得到 相似文献