全文获取类型
收费全文 | 21303篇 |
免费 | 1564篇 |
国内免费 | 8624篇 |
出版年
2024年 | 69篇 |
2023年 | 486篇 |
2022年 | 587篇 |
2021年 | 662篇 |
2020年 | 708篇 |
2019年 | 699篇 |
2018年 | 496篇 |
2017年 | 612篇 |
2016年 | 666篇 |
2015年 | 780篇 |
2014年 | 1314篇 |
2013年 | 991篇 |
2012年 | 1327篇 |
2011年 | 1514篇 |
2010年 | 1469篇 |
2009年 | 1585篇 |
2008年 | 2265篇 |
2007年 | 1445篇 |
2006年 | 1363篇 |
2005年 | 1426篇 |
2004年 | 1588篇 |
2003年 | 1342篇 |
2002年 | 1278篇 |
2001年 | 1203篇 |
2000年 | 933篇 |
1999年 | 815篇 |
1998年 | 628篇 |
1997年 | 524篇 |
1996年 | 456篇 |
1995年 | 443篇 |
1994年 | 366篇 |
1993年 | 262篇 |
1992年 | 235篇 |
1991年 | 227篇 |
1990年 | 169篇 |
1989年 | 172篇 |
1988年 | 57篇 |
1987年 | 42篇 |
1986年 | 46篇 |
1985年 | 53篇 |
1984年 | 45篇 |
1983年 | 45篇 |
1982年 | 33篇 |
1981年 | 43篇 |
1963年 | 5篇 |
1950年 | 17篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 31 毫秒
1.
目的:探讨癌基因Src在体外培养骨肉瘤细胞侵袭伪足形成中的作用。方法:构建Src sh RNA慢病毒表达载体,在HEK293T细胞中包装慢病毒,感染HT-1080骨肉瘤细胞,经嘌呤霉素加压筛选,获得稳定沉默Src基因的骨肉瘤细胞系HT-1080-sh Src;实时定量PCR和Western Blot法检测基因沉默效率;采用原位明胶酶谱法检测侵袭伪足形成;采用侵袭小室实验检测下调Src基因表达对HT-1080细胞侵袭力的影响。结果:成功构建稳定沉默Src基因的骨肉瘤细胞系HT-1080-sh Src及对照细胞系HT-1080-shluc,经实时定量PCR和Western Blot检测,与对照细胞系相比,HT-1080-sh Src细胞中Src基因表达下调3倍以上;下调HT-1080细胞中Src基因表达能显著抑制HT-1080细胞侵袭伪足形成及其对细胞外基质的降解能力;下调Src基因表达能显著抑制骨肉瘤细胞侵袭力。结论:癌基因Src参与调节骨肉瘤细胞HT-1080侵袭伪足形成,促进肿瘤侵袭、转移。 相似文献
2.
3.
4.
5.
6.
7.
吴国俊 《国外医学:分子生物学分册》1997,19(6):276-279
蛋白质截短检测(protein truncation test,PTT)是从蛋白质水平对基因突变进行检测的方法。由于PTT具有与以往广泛使用的方法不同的独特优点,自1993年发明以来,先后在APC、DMD、BRCA1、错配修复基因(mismatch repair gene)突变检测中得以应用。 相似文献
8.
人睫状神经营养因子的原核表达,纯化及其生物效应 总被引:2,自引:0,他引:2
人睫状神经营养因子(hCNTF)克隆入pBV220中,在DH5α菌株中表达,重组蛋白以包含体的形式存在,表达量为菌体总蛋白的50%左右。经比较发现用2mol/L脲洗涤包含体可溶解大量可溶性细菌蛋白,且包含体损失较小。在高浓度变性剂条件下进行sepharcylS-200凝胶过滤,解决了纯化中hCNTF易聚合的问题,在低浓度变性剂条件下进行DEAE离子交换,有利于蛋白活性的保持。经两步纯化后得到均一性hCNTF,纯度达95%以上。在自然状态下使hCNTF复性。纯化复性后的hCNTF对无血清培养的鸡胚背根节神经元和脊髓腹角运动神经元有明显的维持存活和促进生长发育的生物效应。 相似文献
9.
10.
A new system for selection of transformed Aspergillus foetidus was reported. In this system, TK- A. foetidus which were constructed by homologous recombination of mutated TK gene of vaccinia virus with TK gene of A. foetidus were screened by adding BUdR in agar plates. Conditions for screen of TK+ A. foetidus strain, transformation of A. foetidus and selection of transformed TK- A. foetidus have been studied. By using this system, several transformed A. foetidus which contained HBsAg gene derived bf a promoter H8 cloned from genomic DNA of A. foetidus were isolated. It was demonstrated that HBsAg gene was integrated into the chromosome DNA of A. foetidus by Southern blot after many passages of spores. ELISA showed that HBsAg was positive in the growth medium (p/n = 20). The 22 nm particles which were very similar to the HBsAg particles in human serum were found in the growth medium by immunoelectromicroscope. Western blot also gave the specific bands. All these data showed that HBsAg gene was expressed in A. foetidus and the products were secreted into the growth medium. The selection system using TK gene as marker could generally be used to study the expression of foreign gene in A. foetidus. 相似文献