抗菌肽CP10A在大肠杆菌中的融合表达

CP10A是一种由抗菌肽Indolicine经过序列改造，且对多数革兰氏阳性病源细菌具有较强抗菌活性的多肽序列。本研究根据已报道的CP10A氨基酸序列，兼顾大肠杆菌密码子偏好性，设计CP10A的核苷酸序列，利用PCR技术合成相应的DNA序列，后克隆构建重组表达载体pET32a（+）-CP10A，转入大肠杆菌AD494菌株。经IPTG诱导表达和15% SDS-PAGE电泳检测后发现产物以包涵体形式存在，且融合表达量占总蛋白的50%。在变性条件下经Ni-NTA亲合柱层析及复性，最终获得了较高纯度的可溶性重组蛋白。本研究首次实现了CP10A抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达，为进一步研究其生物学活性及应用奠定了一定的基础,同时也为研究抗菌肽表达提供了一种方法。     

预防疫情,我们一直在行动

在疫情爆发初期,卫生部和国家疾病预防控制中心立即密切跟踪疫情动态,分析疫情发展情况,就疫情对我国的影响进行评估。我国风险评估报告认为,疫情在我国流行的可能性较小,     

ERIC-PCR对鸡舍大肠杆菌气溶胶向舍外环境传播的鉴定

为了研究鸡舍环境中大肠杆菌气溶胶向舍外环境的传播，本实验采用Andersen-6级空气微生物样品收集器和RCS（reuter centrifugal sampler）-离心式采样器分别在5个鸡场舍内空气、合外上风向10，50m和下风向10，50，100，200，400m不同距离收集气载大肠杆菌，计算每一个采样点的大肠杆菌的浓度（CFU·m^-3空气）；并采集鸡的粪便，分离大肠杆菌．利用肠杆菌基因间重复一致序列的聚合酶链式反应（enterobacterial repetitive intergenic consensus-polymerase chain reaction．ERIC-PCR）鉴定技术，扩增不同测量点收集的大肠杆菌的DNA条带，形成聚类图谱．通过每一个采样点分离的大肠杆菌遗传相似性分析以及大肠杆菌浓度变化，确认动物舍微生物气溶胶向舍外环境的传播模式．结果显示，5个鸡场舍内空气中大肠杆菌的浓度（中间值）为9-63 CFU·m^-3,远远高于舍外上风和舍外下风处的大肠杆菌浓度（P〈0．05），但是舍外下风不同距离间的大肠杆菌浓度差异并不显著（P〉0．05）．ERIC-PCR结果表明，从鸡的粪便中分离到的大肠杆菌与从舍内空气中分离到的部分大肠杆菌（34．1％）相似性可达100％，从鸡场舍外下风方向（10，50，100，200m）分离到的多数大肠杆菌（54．5％）与舍内空气或粪便中分离的大肠杆菌相似性可达100％．而从鸡舍上风分离到的大肠杆菌与舍内空气或粪便中分离的大肠杆菌相似性仅在73％～92％之间．结果表明：从上风分离到的多数大肠杆菌并非来源于鸡的粪便或者舍内空气，而很多从舍内空气和舍外下风方向分离到的大肠杆菌来源于鸡的粪便，说明源于鸡舍的微生物气溶胶能够通过舍内外气体交换传播到舍外，依气象条件传播到舍外不同的距离，造成周边环境的生物污染以及病原微生物的扩散．对动物舍环境微生物气溶胶的发生与传播规律的研究，具     

大肠杆菌O157:H7感染流行概况

大肠杆菌O157:H7是肠出血性大肠杆菌的主要病原血清型,可引起腹泻、出血性肠炎,极易继发溶血性尿毒综合症和血栓性血小板减少性紫癜两种严重的并发症,死亡率高.1982年被发现以来,大肠杆菌O157:H7已在世界多个国家引起过爆发流行,呈现了流行的世界性,中国也于上世纪90年代末在局部地区出现了爆发,死亡率极高,引起了相关部门的高度重视.本综述试图通过对大肠杆菌O157:H7在世界范围流行状况的描述,提高公众对该病的认识,为相关疫苗的研发提供流行病学资料.     

2型登革病毒ns1基因克隆及其表达产物的生物学特性研究

目的 克隆并表达2型登革病毒非结构蛋白ns1基因片段,初步鉴定重组蛋白的生物学特性.方法 利用登革热2型病毒重组质粒,经PCR方法扩增出ns1全长基因片段,在pQE30表达系统中表达,表达产物用Ni柱亲和层析纯化后,用鼠抗登革病毒免疫血清对重组蛋白进行Western Blot及ELISA鉴定.结果 构建的重组质粒pQE-30/NSl,pQE-30/NS1-N,pQE-30/NS1-80-200aa和pQE-30/NS1-C经IPTG诱导,重组蛋白高效表达并纯化成功,经Western Blot及ELISA证实重组蛋白可以被免疫血清特异识别.结论 2型登革病毒结构蛋白表达载体在大肠杆菌SG13009中高效表达.纯化产物具有较强的免疫原性,为进一步研究NS1的生物学特性和血清学检测奠定了基础.     

韩国研究人员利用转基因大肠杆菌生成汽油

2013年9月30日，韩国科学技术院（Korea Advanced Institute of Science and Technology，KAIST）宣布，其化学与生物分子工程学科的LeeSangYup教授率领的研究团队，采用基因重组技术对大肠杆菌脂肪酸代谢途径进行了再造，用这种转基因菌发酵生产短链（4～12个碳）烷烃，即汽油，每升发酵液可以成功生成580毫克汽油。     

土拉弗朗西斯菌两种不同长度的外膜蛋白FopA抗原和抗体的制备

目的:根据外膜蛋白 FopA 的序列信息,建立土拉弗朗西斯菌 FopA蛋白全长(FopA-L)和部分(FopA-S)的特异性抗原的 BL21 表达系统,获得高活性的重组 FopA-L、FopA-S蛋白并制备相应的多克隆抗体,为土拉菌的监测、诊断和治疗提供依据。方法:通过 pET100 质粒构建FopA-L及FopA-S的表达载体,转化大肠杆菌BL21细胞并诱导表达FopA-L及FopA-S蛋白,螯合镍离子次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲合层析纯化FopA蛋白,用重组蛋白免疫大耳白兔制备多克隆抗体,通过 ELISA、Western 印迹、胶体金免疫层析技术等方法进行检测。结果:构建了FopA-L及FopA-S的表达载体,获得相应的高表达目的蛋白 BL21 细胞株,用表达的蛋白为抗原成功制备了 FopA特异性的抗体,效价皆在1 ∶100000以上且特异性良好。结论:FopA-S与FopA-L两种抗原和相应抗体的制备为建立土拉菌快速检测方法奠定了基础。