兔眼增殖性玻璃体视网膜病变模型的建立

目的探讨兔眼增殖性玻璃体视网膜病变模型的建立方法。方法①体外培养兔眼视网膜色素上皮细胞;②兔眼3组,每组6只,分别在玻璃体内注射0.1 mL的生理盐水、1×106细胞及2×106细胞,在不同时间段进行裂隙灯显微镜、间接检眼镜、眼底照像和B超检查,观察成模情况。结果注射后28 d,生理盐水组成模0眼;1×106细胞组成模5眼,其中Ⅰ级眼1只,Ⅱ级眼3只,Ⅲ级眼1只;2×106细胞组成模6眼,其中Ⅱ级眼2只,Ⅲ级眼4只。结论兔眼玻璃体内注射2×106同种视网膜色素上皮细胞建立增殖性玻璃体视网膜病变模型,符合病变发展规律,而且稳定可靠,成模较快,简单易行。     

小肠粘膜上皮细胞膜—骨架与吸收及防御

本文介绍了当代关于小肠粘膜柱状上皮细胞膜－骨架的结构模型，并阐明它们在营养成分吸收，粘膜栅，获得性免疫栅和细胞增殖中的作用及其与医学的关系。其膜－骨架作用受小肠肽调节，而小肠肽又受中枢调节肽调控。今后人们应从分子－细胞－组织进行多层次研究。这将有利于更入地阐明它们在吸收，防御与炎症中的作用，并启迪对其它系统细胞膜－骨架的研究，且指导设计更有效的口服药物。     

嗅觉受体在非嗅觉组织和细胞中的作用及其机制

嗅觉受体(olfactory receptor)不仅表达在鼻腔中,还广泛表达在全身其他部位,起着重要的生理作用.本文综述了非嗅觉组织和细胞中表达的嗅觉受体及其功能,这些嗅觉受体通过调控细胞周围的内源性化学物质,维持正常的生理功能,并且能在选定的外源性配体刺激下,表现出特定的功能.在医药领域,大约有40%上市药物的作用靶点都来自于G蛋白偶联受体(GPCR)家族,而嗅觉受体是GPCR中最大的基因家族,鉴于其表现出的重要作用,我们推测这些嗅觉受体可能成为未来重要的药物靶标.本文对非嗅觉组织和细胞中嗅觉受体功能的综述,一方面有利于将其作为潜在药物靶点,开发新的药物,另一方面也为中药中挥发性单体的药理作用提供了新的研究思路.     

嗅球成鞘细胞的分离培养与鉴定

目的:探讨一种获取高纯度嗅球成鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)的方法.方法:从新生SD大鼠(3d)嗅球中迅速分离嗅神经层和嗅颗粒层,采用酶消化法分离细胞,差速贴壁法纯化细胞,接种于多聚赖氨酸包被的培养板内培养2d,采用NGFRp75和S100蛋白双标免疫组化、以Hoechst33342复染鉴定OECs的纯度.结果:OECs的纯度为(95.64±2.76)%.结论:本法是一种相对简便易行且经济、稳定、有效的OECs分离方法.     

大鼠前列腺上皮细胞角蛋白8mRNA表达调节的定位研究

本文应用反义ＲＮＡ探针原位杂交法，研究雄激素对大鼠腹侧前列腺上皮细胞角蛋白８ ｍＲＮＡ表达的影响，发现１，在任何ＶＰ组织切片中，ＣＫ８探针专一、大量任何ＶＰ组织切片中，ＣＫ８探针专一、大量定位于ＶＰ腺上皮细胞中，ＣＫ８ ｍＲＮＡ是前腺上皮细胞特而灵敏的标志。２。去睾大鼠ＶＰ ＣＫ８ ｍＲＮＡ染色增强，提示ＣＫ ８ｍＲＮＡ有过度表达，注射雄激素又可抑制其过度表达，注射雄激素又可抑制其过度表达。３。与     

棕色田鼠雄性幼体不同发育期犁鼻器和副嗅球的组织结构

通过对出生后不同发育时期雄性棕色田鼠犁鼻器和副嗅球进行组织学观察,探讨棕色田鼠出生后犁鼻器和副嗅球的发育规律。实验以出生后当天(0日龄),5日龄,15日龄,25日龄以及成年棕色田鼠为研究对象,副嗅球采用Pischinger氏染色法染色,犁鼻器用H．E．染色法染色后进行组织学观察。结果显示,棕色田鼠出生时,犁鼻器和副嗅球就已具有成体的基本结构,随着动物个体的发育,犁鼻上皮逐渐增厚,犁鼻管变长,犁鼻上皮中神经元密度增加;腺体逐渐增大,犁鼻管腔填充物增多,犁鼻管背外侧的静脉血管逐日增大,管腔周围出现越来越多的血管;副嗅球长宽都增加,僧帽细胞层和颗粒细胞层逐渐增长,各层细胞密度变化稍有不同;出生后15日内,僧帽细胞层细胞密度增加,15日龄以后又开始降低,25日龄及成体的僧帽细胞层细胞密度与5日龄的相似;颗粒细胞层细胞密度持续增高。实验结果提示,棕色田鼠5日龄时,犁鼻器和副嗅球已具有了完整的结构,到25日龄时可能达到了功能上的成熟。     

绿脓菌素激活MAPKs、NF-KB信号通路诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达

采用绿脓杆菌培养上清及绿脓菌素刺激人呼吸道上皮细胞株A549和SPC-A-1,用ELISA方法检测细胞IL-8分泌水平,并使用免疫印迹(Western blot)方法观察绿脓菌素对细胞内重要的炎症信号传导途径NF—κB及丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)的激活作用。实验发现,绿脓杆菌培养上清及绿脓菌素可诱导呼吸道上皮细胞株IL-8分泌增加,且具有剂量依赖效应。绿脓菌素刺激细胞可使细胞内IκB—α发生降解,同时使MAPK家族蛋白分子(ERK1／2、p38、JNK)发生磷酸化。MEK1／2(ERK1／2激酶)抑制剂U0126(10μmol／L)和p38MAPK抑制剂SB203580(10μmol／L)可降低绿脓菌素诱导A549细胞IL-8的合成。以上结果显示绿脓菌素通过MAPK信号传导通路增强呼吸道上皮细胞IL-8的表达;NF-κB通路也参与了绿脓菌素调控细胞IL-8表达的过程。     

改进的培养体系在小鼠体细胞核移植及重构胚ES细胞分离培养中的应用

取8周后的雌性昆明小鼠进行超排,取卵母细胞用作核受体,收集卵母细胞周围的卵丘细胞作核供体,进行体细胞核移植。核移植重构胚经SrCl2激活处理6h后,与改良的M16培养液和小鼠输卵管上皮细胞共培养;将发育到早期囊胚阶段的重构胚转移至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,添加含心肌细胞培养液的ES细胞培养液;把孵出的ICM进行消化接种培养,对孵出的ES细胞集落进行鉴定培养。结果显示,以小鼠卵丘细胞为核供体,体细胞核移植重构胚激活率为65．23％,囊胚发育率为11．69％;9个核移植重构囊胚中分离出ES细胞集落,分离率为2．77％;分离出的核移植ES细胞集落具有岛屿状团状隆起结构、碱性磷酸酶染色呈阳性,体外分化可形成类胚体,并能分化成上皮样或梭形细胞。ES细胞集落经常规冻存和复苏后,显示出同冻存前相似的集落形态,并具有较强的增殖能力。实验证实小鼠输卵管上皮细胞、改良的M16培养液及含心肌细胞培养液的ES细胞培养液可以更为成功地运用于小鼠的体细胞核移植及ES细胞的分离培养研究。     

非小细胞肺癌中肿瘤标志物CEA、SCC、NSE表达水平的临床分析

目的分析和探讨肿瘤标志物CEA、SCC、NSE在非小细胞肺癌临床预诊中的价值。方法对83例非小细胞肺癌患者和50例健康人进行肿瘤标志物CEA、SCC、NSE检测,从非小细胞肺癌不同分期、不同病理类型及综合阳性率等方面进行观察分析。结果非小细胞肺癌组CEA阳性率各期均在50%以上,NSE阳性率随肿瘤分期递增,平均为51.8%,二者的测定值Ⅲb、Ⅳ期均明显高于Ⅱ、Ⅲa期(P<0.01);SCC阳性率25%~33.3%,测定值各期差异不显著(P>0.05)。CEA以腺癌阳性率最高,测定值腺癌组明显高于其他组(P<0.01);SCC鳞癌组的阳性率和测定值均高于其他组(P<0.05);NSE鳞癌和大细胞未分化癌阳性率均在50%以上,测定值鳞癌、大细胞未分化癌和其他类型明显高于腺癌组(P<0.01)。不同病理类型综合阳性率的表达:有一项以上阳性者鳞癌为71.1%,腺癌为81.3%,大细胞未分化癌为80%,其他类型为100%。结论CEA、SCC、NSE三者联合检测综合阳性率明显提高。NSE敏感性高,特异性差,可作为肺癌早期诊断的辅助手段。     

活性氧诱导线粒体损伤导致晶体上皮细胞凋亡

目的探讨线粒体损伤在活性氧诱导晶体上皮细胞凋亡中的作用。方法以过氧化氢为处理因素,MTT方法测定过氧化氢对晶体上皮细胞的半数致死浓度(IC50),使用确定的IC50处理培养的人晶体上皮细胞,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化降解,流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位(Δψm)变化、透射电镜观察细胞线粒体形态,定量免疫印迹检测胞质溶胶中细胞色素c含量的变化及caspase-3的活化。结果过氧化氢对晶体上皮细胞的IC50是32.24μmol/L。32.24μmol/L的过氧化氢处理12h可以检测到晶体上皮细胞染色体DNA发生片段化降解;6h可以检测到线粒体跨膜电位去极化,且随时间延长逐渐加强;18h透射电镜观察可见明显的线粒体膜损伤。定量免疫印迹分析显示细胞色素c在胞质溶胶中的表达逐渐提高及caspase-3活化加强。结论活性氧可能是通过诱导线粒体结构和功能损伤导致晶体上皮细胞凋亡。