多节段腰椎间盘突出症的责任节段治疗与整体治疗的临床疗效比较

目的:研究和比较不同的治疗方式(责任节段治疗与整体治疗)治疗多节段腰椎间盘突出症(Herniation of Mutisegmented Lumber Intervertebral Disc,HMLD)的临床疗效及安全性。方法:对2010.01年至2013.01在我科明确诊断为多节段腰椎间盘突出且行手术治疗的共计78例患者进行回顾性分析。按照治疗方式的不同分为责任节段组(实验组,42例)和整体治疗组(对照组,36例)。结合手术前后的随访资料,评价并比较两组患者的疼痛模拟评分(VAS)、JOA功能评分及围手术期的手术时间、术中出血量、术后下地时间,花费,并发症等指标。结果:实验结果显示,实验组与对照组在术后6月,12月及36月的VAS疼痛评分及JOA评分的比较中并无显著性差异(P0.05)。但术后第二日实验组患者的疼痛程度显著好于对照组(P0.05)。实验组的术中出血量、花费及下地时间显著优于对照组(P0.05)。在并发症方面,术后1年内,实验组的并发症发生率显著优于对照组(P0.05);术后1年后,对照组的发生率较好,但两组间均无统计学差异(P0.05)。结论:对于多节段椎间盘突出症,找到责任节段并针对责任节段进行治疗较整体治疗来讲,能够在取得相似治疗效果和安全性的同时,能够有效的减少花费,手术创伤及术后疼痛指标,并能有效减少短期并发症的发生。在多节段腰椎间盘突出症的治疗中可以作为一种推荐的手术术式。     

精氨酸甲基转移酶1和核因子κB在哮喘豚鼠中的表达变化

目的：探讨共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1和核因子-κB在豚鼠支气管哮喘模型气道和肺组织的表达变化。方法：24只白色雄性豚鼠随机分为：①正常对照组；②哮喘组。卵清蛋白致敏并激发后采用间接免疫荧光法检测气道及肺组织精氨酸甲基转移酶1和核因子NF—κB（P65）的表达水平，探讨其在哮喘中可能的作用机制。结果：CARM1和NF—κB（P65）在对照组和哮喘组均有阳性表达，主要在支气管-终末细支气管上皮细胞和肺组织成纤维细胞胞核表达。正常对照组和哮喘组CARM1和NF—κB（P65）的表达差异均有统计学意义？结论：在哮喘豚鼠气道上皮及肺组织CARM1和NF—κB（P65）在细胞胞核高表达，提示CARM1可能通过增强募集NF—κB到相关位点激活NF—κB信号转导通路，并启动了多种前炎性基因和免疫调节基因的转录激活从而诱发哮喘炎症反应.     

人参皂苷Rg1组合诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中Prohibitin的表达与定位变化

选择性抽提经人参皂苷Rg1组合（RCT）诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质，对prohibitin在核基质中的存在、分布及其与相关基因产物在RCT处理前后MG-63细胞中的共定位关系进行观察研究.蛋白质组学分析结果显示，prohibitin存在于人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白组分中，并在RCT处理后细胞核基质中表达下调；蛋白质印迹杂交确证了prohibitin在MG-63细胞核基质中的存在及其在RCT处理后下调变化；免疫荧光显微镜观察进一步证实prohibitin定位在核基质上，经RCT处理后出现分布位置与表达水平变化；激光共聚焦显微镜观察可见prohibitin与c-Fos、c-Myc、p53和Rb基因产物均存在共定位关系，并在RCT处理后共定位分布区域出现变化.本研究证实了prohibitin是一种新发现的核基质蛋白，其在核基质上的定位与表达在RCT诱导分化前后发生显著变化，并与相关癌基因、抑癌基因产物存在共定位关系.实验表明RCT处理引起的prohibitin的变化与人成骨肉瘤MG-63细胞的诱导分化与调控具有密切关系，为深入揭示RCT等中药有效成分诱导肿瘤细胞分化的机理提供了重要科学依据和深入探索的新方向.     

PNRC1核定位信号序列的鉴定

为鉴定富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1)分子的核定位信号序列（nuclear localization signal sequence, NLS），在生物信息学方法预测的基础上，先构建野生型PNRC1及删除预测NLS的PNRC1突变体的绿色荧光蛋白（GFP）重组表达载体，转染细胞后通过激光共聚焦显微镜观察PNRC1分子在删除预测NLS后细胞内的定位变化.然后,将预测的NLS编码序列直接连到GFP表达载体上，以及将预测的NLS加到胞浆蛋白上构建其GFP重组表达载体，转染细胞，观察预测的NLS能否把构建的重组体都带到细胞核内.结果显示,删除PNRC1中预测的NLS后，其定位从细胞核中变为主要定位在细胞浆中，而预测的NLS能把GFP或胞浆中的蛋白带到细胞核中.研究表明,预测的NLS为PNRC1分子真正的NLS.     

卵形鲳鲹对刺激隐虫的免疫应答和免疫保护研究

用刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)的幼虫对卵形鲳NFDA8(Trachinotus ovatus)进行腹腔注射和体表感染,然后每隔一周用阻动试验(Immobilization assay)检测免疫鱼的抗血清和皮肤培养液对刺激隐核虫幼虫的阻动效价,在第14周中,分别用亚致死剂量和致死剂量的刺激隐核虫幼虫对免疫鱼攻毒以检测所产生的免疫保护力.实验结果显示:两种免疫方法都能让卵形鲳鲹的血清和皮肤生成阻动刺激隐核虫幼虫的特异性抗体,并能使被免疫鱼获得明显的免疫保护,但是体表感染免疫组的血清和皮肤培养液的阻动效价都要比腹腔注射免疫组高,所获得的免疫保护力也更强.同时还发现,免疫鱼血清和皮肤培养液中的抗体存在明显的差异:两者的最初生成时间、达到峰值的时间、变化规律以及阻动效价等都不一致.因此,我们推测鱼类的系统免疫应答和皮肤黏膜免疫应答有可能是相互独立的,或者是不同步的.鱼类的体液免疫应答,特别是黏膜免疫应答对抵御刺激隐核虫的感染起了重要的作用,采用刺激隐核虫虫体疫苗可能成为预防海水鱼类白点病的一种选择.     

扁绒泡菌Physarum compressum原质团细胞核核骨架制备技术的研究

以扁绒泡菌显型原质团为材料，进行细胞核的提纯、核骨架的制备及电镜观察。结果表明：用2mol/L NaCl+TritonX-100/NP40可得到具有复合纤维的核骨架，而用Lis + TritonX-100/NP40得到的核骨架具有核纤层，不使用RNase得到了具有网状的细胞核骨架，RNA在核骨架的结构形态中起重要作用。阐述了原质团中游离细胞核在细胞生物学研究中的意义。     

PRRSV血液抗体间接ELISA检测方法的建立

中国动物卫生与流行病学中心陈义军与扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室彭长凌等科研专家用亲和层析纯化的猪繁殖与吸人综合征病毒PRRSV重组核衣壳蛋白GST-N作为诊断抗原，建立检测PRRS血清抗体的间接ELISA方法。抗原最佳包被量为每孔400ng，待检血清最佳稀释度为1：100，     

珠江口伶仃洋中华白海豚栖息地利用对海岸线等变迁的响应

沿岸鲸豚类栖息地易受人类活动的干扰，导致其分布和核心栖息地发生变化。珠江口-漠阳江口中华白海豚种群是目前所知全球范围内最大的种群，其中伶仃洋水域是其重要的栖息地。近年来，珠江口伶仃洋周边城市发展带来的人类活动增加，白海豚的生存压力日益增大，分析伶仃洋中华白海豚对栖息地环境变化的响应，研究对应的保护策略显得非常迫切。以多源陆地资源卫星Landsat为数据源，通过影像分析近43年珠江口伶仃洋围填海造成的海域流失，结合近20年来采用截线抽样法收集的海豚观测数据，运用含障碍核插值（Kernel interpolation with barriers）方法，分析白海豚的分布及核心栖息地的变化。结果显示：1986-2015年期间，研究区域内流失的海域面积为344.08km²；目击分布离人工海岸线的平均距离大于自然海岸线的平均距离，目击分布到自然海岸线和人工海岸线的平均距离均在减小，表明过去20年白海豚的栖息地使用选择发生了一些变化，被迫适应人类活动的干扰；1997-2016年白海豚的分布范围呈现先增加后减小，白海豚栖息地使用的重心偏向伶仃洋东部水域，核心栖息地趋向主航道和无人海岛附近水域萎缩，可能是海豚因海域食物资源减少而迫不得已的选择。不同时期，珠江口中华白海豚国家级自然保护区所覆盖的核心栖息地比例呈递减趋势，占比由79.9%下降到49.4%，当前有必要对保护区范围和功能区作出一些优化调整，以适应栖息地使用的变化格局。     

抑制RANKL诱导破骨细胞分化的DNA适配子的筛选

目的:筛选能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白并有效抑制RANKL对破骨细胞诱导分化作用的DNA适配子。方法:首先,采用原核系统表达并纯化RANKL蛋白,通过SELEX(Systematic evolution of ligands by exponential)技术从人工合成的单链随机寡核苷酸文库中筛选能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白的DNA适配子。然后,用RNAfolding sever software分析适配子空间结构,以ELISA检测DNA适配子和RANKL亲和力大小并筛选出亲和力最高的一组DNA适配子用以验证DNA适配子对RANKL诱导破骨细胞分化的抑制作用。结果:(1)成功在原核系统表达并纯化RANKL蛋白;(2)筛选出能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白的12个DNA适配子。(3)与对照组相比,不同浓度DNA适配子能明显抑制TRAP阳性破骨细胞数量(P0.05),且浓度越高抑制效果越明显。结论:成功筛选出的DNA适配子能特异性结合RANKL蛋白并有效抑制RANKL对破骨细胞的诱导分化功能。     

靶向于TNF-α和RANKL的人源化抗体对DBA/1小鼠单关节炎的保护作用

目的制备同时拮抗肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和核因子κB受体活化因子配体(re-ceptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的人源化单克隆抗体(h8G12),通过单关节炎小鼠模型,评估h8G12在抑制TNF-α引起的炎症反应和拮抗RANKL引起的骨破坏中的保护作用。方法培养稳定表达h8G12的CHO细胞株,观察细胞生长状态,用间接ELISA检测细胞培养上清中h8G12的表达水平。纯化的h8G12经SDS-PAGE、West-ern blot分析及鉴定,用间接ELISA观察其亲和力。通过向DBA/1小鼠膝关节腔注射人TNF-α重组蛋白和人RANKL重组蛋白,建立单关节炎小鼠模型。用组织学评估观察不同给药方案[阴性对照组、阳性对照组、阿达木单抗(adalimumab,ADA)组和h8G12组]对小鼠单关节炎引起的炎症浸润、软骨侵蚀、膝关节腔内破骨细胞分化的保护作用。结果 CHO细胞株培养96 h时细胞生长状态良好,可稳定分泌h8G12;纯化的h8G12纯度可达90%,Western blot可见特异性条带,且可与rh TNF-α和rh RANKL结合。在单关节炎小鼠模型中,苏木精-伊红染色显示,h8G12组关节腔、周围软组织及骨髓腔内炎性细胞浸润明显少于阳性对照组,炎症评分降低了50%,治疗效果与ADA相似。甲苯胺蓝染色显示,h8G12组病理评分出现显著下降,h8G12治疗后小鼠关节结构相对完好,关节软骨厚度接近正常水平。抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示,h8G12组关节腔内破骨细胞明显减少。结论 h8G12可有效抑制TNF-α引起的炎症反应和拮抗RANKL引起的骨破坏,为类风湿关节炎的治疗提供了新方法。