人睫状神经营养因子的原核表达,纯化及其生物效应

人睫状神经营养因子（ｈＣＮＴＦ）克隆入ｐＢＶ２２０中，在ＤＨ５α菌株中表达，重组蛋白以包含体的形式存在，表达量为菌体总蛋白的５０％左右。经比较发现用２ｍｏｌ／Ｌ脲洗涤包含体可溶解大量可溶性细菌蛋白，且包含体损失较小。在高浓度变性剂条件下进行ｓｅｐｈａｒｃｙｌＳ－２００凝胶过滤，解决了纯化中ｈＣＮＴＦ易聚合的问题，在低浓度变性剂条件下进行ＤＥＡＥ离子交换，有利于蛋白活性的保持。经两步纯化后得到均一性ｈＣＮＴＦ，纯度达９５％以上。在自然状态下使ｈＣＮＴＦ复性。纯化复性后的ｈＣＮＴＦ对无血清培养的鸡胚背根节神经元和脊髓腹角运动神经元有明显的维持存活和促进生长发育的生物效应。     

2002-2009年徐州市14家医疗卫生机构获市科技进步奖统计分析

目的 通过对医疗卫生机构2002-2009年获科技进步奖情况的统计分析,客观评价卫生机构科研工作的优势及问题,为进一步促进卫生科研工作提供借鉴. 方法 通过查阅徐州市科技局科技进步奖成果档案及各单位科技档案,对医疗卫生机构获徐州市科技进步奖的等级、研究类型等情况进行统计分析. 结果 2002-2009年14家医疗卫生机构获徐州市科技进步奖239项,呈逐年增长之势,特别是近4年明显上升.学科分布以基础医学、临床医学成果为主. 结论 在成果数量增加的同时更应该注重成果的含金量；应加强学科建设及各重点学科间的联合,获取大成果.     

克隆绵羊——多莉（DOLLY）的研究进展

多莉，第一例大型克隆哺乳动物，由一只称为ＦｉｎｎＤｏｒｅｔ的６岁母羊乳腺体细胞的基础生命物质经细胞核转移等操作而产生。成果分布后，持怀疑观点的学者提出，提供体细胞的母羊是否本身处在妊娠状态？推测多莉是由胚胎细胞产生，并非体细胞本身克隆所致。由于６岁的母羊死于１９９５年，只能用其冷冻保存的乳腺组织在Ｈａｎｎａｈ研究中心进行细胞群体的分析。首先，用微卫星扩增技术，以三套引物进行测定；其次，进行ＤＮＡ指     

采用AMV和M-MLV逆转录酶的直接DNA序列测定方法

最近发表在《Focus》杂志上的几篇文章,论述了几种改进测定含dG·dC或dA·dT同聚物区M13模板序列的方法。包括以AMV(禽类髓细胞瘤病毒)逆转录酶代替DNA聚合酶Ⅰ大片段(Klenow fragment),以及仍用Klenow片段但提高测序反应温度等。     

具有重要应用价值的真核表达系统

基于Ｔ７ＲＮＡ聚合酶与Ｔ７强启动子（Φ１０）间的特异认识而建立起来的偶联表达系统在大肠杆菌中已取得了令人满意的结果。最后，该系统在酵母、昆虫、浦乳动物细胞和植物细胞中陆续实现了高效表达。Ｔ７ＮＲＡ聚合酶－Φ１０启动子偶联表达系统的相对独立性和高效性，不仅预示着该系统可以在真核基因工程中发挥重要作用，而且其独特的作用机制为人们探索新的特异高效真核表达系统提供了一个可供借鉴的模式。     

鸭C4BPα的克隆、表达及其与鸭疫里默氏菌的互作

为研究鸭C4结合蛋白(C4b-binding protein,C4BP)与鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)的相互作用,对鸭C4BPα进行克隆、原核表达,免疫小鼠制备多克隆抗体,并利用间接免疫荧光试验及斑点杂交试验验证C4BP与RA的相互作用。结果显示,鸭C4BPα核苷酸序列全长为1230bp,与鸡C4BPα的相似性最高(82.1%);系统进化树分析发现,鸭C4BPα与鸡C4BPα处于同一系统进化树分支上,两者遗传进化关系最近;C4BPα在大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3)中能高效表达,重组蛋白以胞内可溶性形式存在;多克隆抗体效价超过1∶10000,并且可以与重组蛋白发生特异性反应;间接免疫荧光试验和斑点杂交试验结果显示RA与鸭C4BP可以发生相互作用。研究结果为进一步揭示RA的致病机制奠定了基础。