三种鳖线粒体DNA细胞色素b基因序列的比较分析

对中华鳖、砂鳖和山瑞鳖线粒体DNA细胞色素b基因进行了引物设计、PCR扩增、序列测定和PCR-PFLP(Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism)分析。研究结果表明中华鳖、砂鳖与山瑞鳖线粒体DNACytb基因的序列全长相同,均为1140bp,其A、C、G、T含量相似,分别为378个(33.2%)、322个(28.2%)1、22个(10.7%)、318个(27.9%)、373个(32.7%)、324个(28.4%)、124个(10.9%)、319个(28.0%)、380个(33.3%)3、30个(28.9%)、127个(11.1%)、303个(26.7%)。同源性及序列差异率分析表明:中华鳖与砂鳖b基因序列的同源性为92.3%,中华鳖、山瑞鳖的为85.0%,砂鳖、山瑞鳖的为84.1%;中华鳖与砂鳖b基因核苷酸序列间的差异率为7.7%,中华鳖、山瑞鳖间的序列差异率为15.0%,砂鳖、山瑞鳖间的序列差异率为15.9%,而中华鳖、砂鳖、山瑞鳖各自个体间的序列差异率分别为2.37%、0.88%和0.18%,种间差异显著。用内切酶酶切分析其扩增产物,结果表明:用内切酶NdeⅠ可准确鉴别砂鳖,而用内切酶BamHⅠ则可准确鉴别山瑞鳖。内切酶NdeⅠ和BamHⅠ的联用分析,可使这三种鳖在分子水平都得到明确的鉴定。从三种鳖线粒体DNACytb基因核苷酸序列的显著差异和酶切位点的变化,可以进一步证明砂鳖是不同于中华鳖的鳖属一新种。     

YLY在中华鳖日本品系温室养殖的应用效果

YLY是采用新型技术、依据中华鳖日本品系温室养殖环境,由长双岐杆菌、嗜酸乳杆菌、硝化菌等菌种联合组成,是针对中华鳖日本品系温室养殖所研发的新型制剂。本试验为探讨YLY试剂在中华鳖黑暗型温室养殖中的应用效益,在112天内,通过一组对照组以及四组试验组的试验,可知YLY试剂在净化水体、增加溶解氧、抑制有害菌生长、提高饵料系数、生长速度具有优良的表现,可取代常用消毒剂使用;并获得了YLY试剂在中华鳖黑暗型温室养殖中的最佳浓度为4ppm。     

膨化饲料动植物蛋白比对中华鳖稚鳖生长特性的影响

本实验设计了营养相近、不同动植物蛋白比的四种膨化饲料（饲料1,1.5∶1;饲料2,3∶1;饲料3,5∶1;饲料4,7∶1）,研究了动植物蛋白比对中华鳖稚鳖摄食、生长、饲料利用能力和营养组成的影响。饲料1组稚鳖的摄食率显著高于饲料2—4组。饲料1—4组稚鳖的特定生长率没有显著影响。饲料1组稚鳖的干物质和脂类消化率、饲料转化效率、蛋白贮积率和能量贮积率显著低于饲料2—4组。饲料1组稚鳖体脂肪含量显著低于饲料4组。稚鳖的上述指标在饲料2—4组间均无显著差异。结果表明,鳖膨化饲料动植物蛋白比对中华鳖稚鳖生长特性有明显的影响,适宜的动植物蛋白比为3∶1。     

中华鳖致病病原菌的分离及药物试验研究

嗜水气单胞菌为该病的条件致病菌。在适宜的条件下 ,该菌可通过体表伤口进入鳖体引起疾病。此病以体表腐皮与赤斑 ,有的中华鳖背部有明显的乳白色小点和出血性败血症为主要病理学表现 ,以各器官功能衰竭为致病原因。解剖后 ,肝脏病变呈污泥色 ,腐烂液化 ,肾呈青紫色、肿大 ,肠内无食物 ,呈灰白色 ,部分肠壁有出血点 ,脾脏明显肿大。经分离鉴定 ,生理生化特性分析 ,结果为典型的嗜水气单胞菌嗜水亚种 (Aeromonashydrophilasubsp .hydrophila)。     

中华鳖对T3菌苗抗原的免疫应答

通过T3菌苗免疫中华鳖后的血清间接凝集抗体效价 (IAT)与免疫保护率 (PRP)的变化探讨了中华鳖的免疫应答规律。中华鳖对T3菌苗能产生较强的应答反应 ,免疫的二龄鳖PRP可达 82 6± 15 2 (19) % ,IAT达 1978 1± 716 4(19)。它对T3菌苗的免疫效应期为 3天 ,第 2 0天时免疫应答处于高峰 ,IAT与PRP分别为 176 8 0± 44 7 6 (4)与 91 7± 14 4(4) % ,持续 10天左右开始下降 ,到第 3个月左右基本上回复到免疫开始时水平。结论为 :中华鳖的免疫应答反应基本介于鱼类与鸟类之间 ,但较偏向于鸟类。     

饲料中添加乌贼肝粉和鱼浆蛋白对中华鳖抗氧化能力的影响

本实验研究了饲料中添加乌贼肝粉和鱼浆蛋白对中华鳖抗氧化能力的影响。设计了3个实验组,对照组（白鱼粉组）、乌贼肝粉组和鱼浆蛋白组。3种实验饲料的营养成分相近,主要区别是乌贼肝粉组和鱼浆蛋白组的饲料中分别用乌贼肝粉和鱼浆蛋白取代了对照组饲料中5%的白鱼粉。用3种饲料分别养殖中华鳖（Pelodiscus sinensis）稚鳖8周,测定了稚鳖血清和肝组织的超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛含量（MDA）、总抗氧化能力（T-AOC）以及血清碱性磷酸酶（AKP）和溶菌酶（LZM）的活性。结果发现,乌贼肝粉组稚鳖血清和肝MDA含量显著低于对照组,T-AOC高于对照组;鱼浆蛋白组稚鳖血清和肝MDA含量、血清T-AOC与对照组没有显著差异,但肝T-AOC显著低于对照组。实验结果表明,饲料中添加5%的乌贼肝粉能提高稚鳖的抗氧化能力。     

雌激素对中华鳖性腺分化及DMRT1、SOX9基因表达的影响

中华鳖(Pelodiscus sinensis)性别决定的方式一直存在较大的争议,分子机制更是不清楚。在大部分脊椎动物中,雌激素在性别决定和性腺分化中扮演重要的调控作用。实验通过对性别分化前胚胎进行雌二醇(E2)和芳香化酶抑制剂(AI)处理,研究雌激素在中华鳖性腺分化中的作用及机理。实验结果显示,与对照组(雌性比例49%)相比,E2处理组中雌性中华鳖仔鳖比例显著增加,高达92.3%;而在AI处理组中,雌性比例显著下调至13.1%。HE染色分析表明,ZZ(雄性)和ZW(雌性)胚胎分别经过E2和AI处理后,ZZ和ZW性腺结构呈现明显的雌性化和雄性化特征。同时,通过RT-PCR和免疫荧光染色发现,E2能显著降低雄性性别关键因子DMRT1和SOX9 mRNA和蛋白表达水平;AI则表现相反的调节作用。综上所述,雌激素通过抑制雄性性别关键因子DMRT1和SOX9的表达来抑制雄性分化,促进雌性分化,揭示雌激素在中华鳖雌性性别分化中起着重要的调控作用。     

中华鳖血清中抗体含量的研究

脊椎动物抗体的类型较多 ,如在哺乳类中可分为ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ及ＩｇＤ。在血清中的含量也各异 ,如在人血清中ＩｇＧ为 12 5ｍｇ/ｍＬ ,ＩｇＭ为 1 2 5ｍｇ/ｍＬ (杨廷彬和尹学念 ,1994)。低等脊椎动物 (如硬骨鱼 )免疫系统欠发达 ,一般认为其血清中只有 1种抗体即ＩｇＭ ,如大西洋鳕(Ｇａｄｕｓｍｏｒｈｕａ)的抗体浓度达 5 6 2ｍｇ/ｍＬ (Ｌｅｓｌｉｅ＆Ｃｌｅｍ ,1972 )。中华鳖 (Ｔｒｉｏｎｙｘｓｉｎｅｎｓｉｓ)血清中也只含有 1种高分子量的抗体 (简纪常等 ,1998) ,但其血清浓度尚不清楚 ,这有碍于对中华鳖体液免疫…