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1.
非洲猪瘟病毒的分子生物学研究进展   总被引:4,自引:0,他引:4  
非洲猪瘟是一类动物传染病,致死率高达100%,在我国虽未发现该病,但一旦发生会给畜牧养殖业带来巨大经济损失。文中概述了非洲猪瘟病毒的分类、形态、基因组特征、主要结构蛋白,以及分子生物学诊断技术的研究进展。为进一步研究该病毒的复制机理、毒力、致病机理及疫苗的开发提供参考依据。  相似文献
2.
参照Genebank中非洲猪瘟VP73基因序列,人工合成的VP73全基因克隆至pMD 18-T克隆载体质粒中,采用PCR扩增得到1188 bp的VP73基因;将VP73基因片段亚克隆插入pBAD/Thio表达载体,经测序鉴定,筛选获得VP73基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了非洲猪瘟病毒VP73基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP73蛋白抗原。SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.002 %的L-Arabinose进行诱导,4 h后表达量最高,表达蛋白为融合蛋白,分子量约60 kDa,表达产量约占菌体总蛋白的30%。Western blotting和ELISA检测表明,表达的融合蛋白能与非洲猪瘟阳性血清发生特异性反应,说明表达获得的产物为非洲猪瘟病毒VP73融合蛋白,且具有良好的反应原性,这为应用该表达蛋白抗原制备ASFV免疫血清学诊断试剂和疫苗研究奠定了基础。  相似文献
3.
蛋白多肽二级结构的电脑预测表明,非洲猪瘟病毒( African swine fever virus , A S F V)j5 R阅读框编码12 .9 k Da 膜蛋白。该蛋白的 C 末端含有一个潜在抗原决定簇,针对其合成肽的抗体能在 A S F V 感染细胞和病毒颗粒中检测到23 或25 k Da( 取决于不同毒株) 特异蛋白。免疫荧光试验显示,j5 R 蛋白主要位于感染细胞的病毒复制部位。油水两相分离和细胞分级分离试验结果证明j5 R 蛋白是膜相关蛋白  相似文献
4.
非洲猪瘟因其高死亡率、没有疫苗防疫、影响国际贸易而备受广泛关注。1921年首次确认非洲猪瘟疫情以来,先后在非洲、欧洲、美洲等多个国家和地区发病造成重大经济损失。野猪作为该病传播的重要生物媒介在俄罗斯等多个国家非洲猪瘟疫情散播中发挥了重要作用。充分了解全球非洲猪瘟疫情状况和野猪在俄罗斯非洲猪瘟疫情中的影响,分析我国野猪分布、疫病监测和管理现状,将为我国非洲猪瘟外来疫情防控策略制定提供参考。  相似文献
5.
人工合成VP73基因全长序列,利用DNAstar软件确定其中抗原性较高的区域,利用Primer Premier5.0设计一对特异性引物,通过PCR扩增得到243bp的非洲猪瘟病毒VP73基因片段(vp73l)。将该片段与表达载体pET-32a连接克隆至大肠杆菌Escherichia coli(E.coli)DH5α菌株,经测序、菌落PCR和酶切鉴定,选取VP73L基因正向插入,读码框正确的阳性克隆。构建重组质粒并转化BL21(DE3),经IPTG诱导,融合蛋白以可溶性形式在E.coli BL2(DE3)高效表达,经His亲和层析柱得以纯化。Western blotting显示,该融合蛋白能与兔抗非洲猪瘟病毒VP73多克隆抗体发生特异性反应。所得结果为进一步研究:分离纯化该重组融合蛋白;确证目标抗原蛋白VP73L免疫原性及其特异性,进而达到建立非洲猪瘟病毒的免疫检测方法奠定了必要的材料与技术基础。  相似文献
6.
【目的】非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)能导致猪群高死亡率,从而造成严重的经济损失。因此,建立严密、高效的防控系统,包括灵敏、准确的诊断方法以及高效的预报预警机制等,以避免ASF传入我国。本文旨在建立一种新型而高灵敏度的ASFV微滴数字PCR (Droplet digital PCR,ddPCR)检测方法。【方法】针对ASFV K205R基因设计一对特异性引物和TaqMan探针,通过反应条件优化,建立了ASFV实时荧光定量PCR (qPCR)和ddPCR检测方法;并对两种方法的线性关系、灵敏性、特异性和重复性进行了评估,利用建立的ASFV检测方法对163份国内和进境的组织样本及血清样本进行检测,血清样本经商品化ASFV ELISA试剂盒复检,评估不同方法检测结果的符合率。【结果】建立的ASFV qPCR和ddPCR检测方法线性关系较好(R2≥0.998),ddPCR的最低检测限度可达到0.36拷贝,在20 μL反应体系中约为10拷贝/反应,检测灵敏度是qPCR的10倍。ASFV ddPCR检测方法具有很高的特异性和重复性,不与其他猪常见病毒发生交叉反应。【结论】该方法灵敏度高、特异性强,可作为一种有效的分子生物学方法来诊断ASFV,为防止该病传入我国以及ASFV的实时监测提供新的技术储备,同时促进ddPCR技术在我国的发展和应用。  相似文献
7.
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起,是家猪和野猪的一种高度接触性、致死性传染病,可表现为最急性、急性、亚急性和慢性四种形式。猪感染后以发热、高病毒血症和出血性病变为特征。有的毒株可引起高发病率和高死亡率。自2007年ASF传入格鲁吉亚以来,该病在高加索地区(包括俄罗斯)逐步蔓延,造成多地大量家猪和野猪病死,经济损失惨重。2017年3月,ASF突然在远东地区伊尔库茨克州出现,疫点距中国北方最大陆路口岸满洲里仅约1 000 km,使得传入中国的风险空前提高。为此,本文对该病10年间在俄罗斯的流行状况和研究情况进行总结,以期为我国对该病的防控提供参考。  相似文献
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