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1.
重组包涵体蛋白质的折叠复性   总被引:49,自引:1,他引:48       下载免费PDF全文
综述了减少包涵体形成、包涵体分离和溶解以及包涵体折叠复性的策略及其最新进展 .详细讨论了包涵体蛋白质折叠复性的基本原则、包涵体折叠复性促进剂和包涵体折叠复性方法  相似文献
2.
重组蛋白包涵体的复性研究   总被引:18,自引:0,他引:18  
重组蛋白在大肠杆菌中的高表达往往形成不可溶、无生物活性的包涵体,需经过变性溶解后,在适当条件下复性形成天然的构象,才可恢复其生物活性.变复性实验是建立在对蛋白质体外折叠机制的了解的基础上.根据近年来对蛋白质折叠机制的认识和重组蛋白包涵体在复性方面的主要进展,论述以下3个方面的内容:1)蛋白质在细胞内的折叠机制;2)蛋白质体外折叠机制;3)蛋白质复性的策略和方法.  相似文献
3.
蛋白质的结构转换   总被引:8,自引:0,他引:8       下载免费PDF全文
许多不相关的蛋白质含有相同的短肽序列却形成不同的空间构象. 结构转换广泛存在于蛋白质折叠和功能过程中, 具有重要的生物学意义. 综述了Serpin和EF-Tu的失活、血细胞凝集素的激活、蛋白酶成熟、亚基装配和蛋白质淀粉样化等过程中肽链同源肽段的结构转换模式, 并讨论了它在理解蛋白质折叠机理和“构象病”病因中的应用.  相似文献
4.
分子伴侣的功能和应用   总被引:7,自引:0,他引:7  
本文综述了分子伴侣的分类、功能、作用机理、研究现状及应用前景。分子伴侣是在生物大分子的折叠、组装、转运及降解等过程中起协助作用,参与协助抗原的呈递和遗传物质的复制、转录及构象的确立,但自身并不发生任何变化的一大类广泛存在于生物体内的蛋白质分子。随着对分子伴侣的进一步研究和相关知识的不断深入,分子伴侣在生物产品开发、物种改良、抗衰老,疾病预防、诊断和治疗以及环境监测方面具有广阔的前景。  相似文献
5.
分子内分子伴侣--Pro肽在蛋白质折叠中的作用   总被引:5,自引:0,他引:5  
在体内,许多蛋白质,如很多胞外蛋白酶、某些多肽激素等都以含前导肽的前体形式合成,前导肽在蛋白质折叠中具有分子伴侣的功能。为了与一般意义上的分子伴侣相区别,人们将对蛋白质折叠有帮助的前导肽称为分子内分子伴侣,分子内分子伴侣帮助蛋白质在折叠过程中克服高的能量障碍,某些蛋白质的分子内分子伴侣甚至促进其在氧化性折叠中二硫键的正确配对。  相似文献
6.
细胞内的大分子拥挤环境   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
所有的细胞中都存在着大量的蛋白质、核酸、多糖等各种生物大分子,它们大约占用细胞容积的20%~30%,总浓度高达80~200 g/L,因此任何一种大分子都处于一个充满其他大分子的拥挤环境中. 对源于排斥容积效应的拥挤理论分析表明它对所有大分子之间的反应在热力学和动力学上都有很大的影响. 可是以往人们在体外研究生物大分子的性质和相互作用时几乎都忽略了这样一个细胞大分子拥挤的实际环境. 最近几年建议把大分子拥挤与pH、离子强度和溶液组成等一样作为常规因素来研究生物大分子的呼声很高,在体系中添加大分子拥挤试剂以在体外模拟细胞内环境研究蛋白质折叠已有一些实验报道.  相似文献
7.
脲梯度电泳方法的技术关键   总被引:3,自引:1,他引:2       下载免费PDF全文
介绍在应用丙烯酸胺-脲梯度电泳技术进行蛋白质折叠、去折叠研究工作中的实验步骤和技术关键,并在文献方法的基础上作了改进。通过加入15%~0%的甘油,抵消在凝胶中由于脲浓度不同而引起的溶液粘度变化,保证在凝胶上脲浓度不同的部位对蛋白质保持同样的电泳阻力,防止前沿偏斜.采用核黄素光照催化合脲凝胶的聚合,以防止凝胶在梯度灌制完成前发生聚合.加浓缩胶和样品梳于脲梯度胶上可较好地克服边缘效应,获得好的样品迁移图谱.  相似文献
8.
分子伴侣在蛋白质折叠中的作用   总被引:2,自引:0,他引:2  
分子伴侣主要由三个高度保守的蛋白质家族组成,这三个家族的成员广泛分布于原核和真核细胞中。TCP1复合物是真核细胞细胞溶质内的伴侣蛋白。分子伴侣在蛋白质折叠过程中防止多肽链形成聚集物或无活性结构,提高正确折叠率。本文重点讨论Stress-70家族蛋白质和伴侣蛋白协助蛋白质折叠过程中的协同性以及伴侣蛋白GroEL和GroES的作用机理。  相似文献
9.
人肌和兔肌肌酸激酶在低pH条件下再折叠的研究   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
利用蛋白质内源荧光和远紫外CD光谱研究了在低pH条件下人肌肌酸激酶和兔肌肌酸激酶的构象状态。结果表明,在低离子强度下,随着酸的加入人肌和兔肌肌酸激酶去折叠,至pH2.0附近几乎都达到充分去折叠。它们的色氨酸荧光发射峰位红移至350nm,这表明了内埋的色氨酸残基已经完全暴露到极性溶剂之中,它们的远紫外CD光谱表明二级结构也遭破坏,但是仍保留有相当部分的二级结构。而且在高离子强度低pH条件下由Goto等人首先发现的中间体构象状态(融球结构状态)在我们的实验中也被观察到了。它具有与天然酶类似的二级结构。色氨酸荧光发射光谱表明与天然酶类似,它的最大发射峰位也为335nm表明了蛋白质已经完全折叠,然而其荧光强度远低于天然酶,表明这种结构状态具有较大运动性而导致荧光的动态淬灭。上述结果支持了Goto等人的发现,说明了融球中间体结构可能是蛋白质折叠过程需经历的一个中间态。  相似文献
10.
FT-Raman光谱研究金属硫蛋白的折叠过程   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
为探索金属硫蛋白( MT) 的折叠过程,寻找含硫蛋白折叠的动力,采用调节溶液pH 值的方法,使MT 处于不同的折叠状态。 测定了在pH1 .0 - 7 .5 时溶液的Raman 谱, 进而得出MT 结构的变化。实验数据表明,在pH= 4 时蛋白质的二级结构出现了两个转折点,提示MT 折叠过程中有两个中间态存在。根据实验结果,对MT 主链折叠的动力进行了讨论。  相似文献
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