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1.
副溶血弧菌LAMP检测方法的建立   总被引:26,自引:0,他引:26       下载免费PDF全文
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种能引起食源性疾病的重要病原菌。首次将一种新颖的核酸扩增技术-环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP)应用于副溶血弧菌的快速检测。针对副溶血弧菌不耐热溶血毒素基因(tlh)设计四条特异性引物(两条内引物和两条外引物)进行LAMP扩增,对扩增反应进行优化,最佳反应时间为60 min,反应温度为60 ℃。对12种细菌共28株菌进行LAMP扩增,仅14株副溶血弧菌得到阳性扩增结果,证明引物具有很高的特异性。副溶血弧菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别约为90 fg和24 cfu/mL。对模拟食品样品进行直接检测,检测限为89 cfu/g。结果表明,该方法检测副溶血弧菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低,1 h即可完成,有望发展成为快速检测副溶血弧菌的有效手段。  相似文献
2.
类产碱假单胞菌耐热碱性脂肪酶的研究   总被引:20,自引:0,他引:20       下载免费PDF全文
从福建省福州市温泉澡堂污水浸润土壤中分离筛选到一株耐热碱性脂肪酶产生菌——类产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes)F331。产酶最适条件为:碳源小麦粉,氮源豆饼粉,起始培养pH9.4~9.5,培养温度24~26℃,培养周期32~34h。经硫酸铵盐析、Sepharose 4B和Sephadex G-200柱层析得到纯化的酶组分。该酶最适作用温度50℃,最适作用pH 10.0,60℃保温80min酶活基本不损失,在pH 7.0~10.0范围内酶蛋白稳定:Ca~(2+)和Mg~(2+)对酶有激活作用,Pb~(2+).Zn~(2+)、Fe~(2+)和Co~(2+)对酶活有抑制作用。该酶分子量45700。  相似文献
3.
通过计算机辅助分析,发现在耐热碱性磷酸酯酶(简称FD-TAP)的N端存在26个氨基酸的信号肽序列。但一般信号肽切点并非是完全专一的,所以利用基因工程手段将FD-TAP的N端分别缺失24、25、26和27个氨基酸,得到了N端分别缺失24、25、26和27个氨基酸的克隆子pTAPND24、pTAPND25、pTAPND26和pTAPND27。考虑到这样的无隆子其翻译起始区所形成的能量较低结构稳定的二组  相似文献
4.
用PCR方法扩增来源于极端嗜热厌氧古菌Pyrococcus furiosus中的超耐热酸性α-淀粉酶的结构基因,将该结构基因引入载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9K-Amy转化大肠杆菌DH5α细胞,测序结果表明,克隆到的α-淀粉酶结构基因为1305bp,其编码的成熟肽为435个氨基酸。将正确构建的重组质粒转化毕赤酵母GS115细胞,得到酵母工程菌株。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,超耐热酸性α-淀粉酶在甲醇酵母中大量表达并分泌到胞外,该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导,随着诱导培养时间的增加,在培养基上清液中的单位体积酶活力相应上升,在诱导培养7d后酶活力达到最大值。该酶最适反应温度为90~100℃,最适反应pH值为4.5~5.5。该酶具有非常好的温度稳定性,在100℃条件下热处理5h,仍具有60%以上的酶活力。该酶的这些优点使其非常适于在工业生产上应用。  相似文献
5.
耐热木聚糖酶研究进展   总被引:15,自引:0,他引:15       下载免费PDF全文
β1,4内切木聚糖酶(EC.3218)能够以内切方式作用于木聚糖主链产生不同长度的木寡糖和少量的木糖,因此是木聚糖降解酶系中最关键的酶。木聚糖酶具有很大的工业应用潜力和价值,由于许多工业应用木聚糖酶的单元操作都是在高温下进行的,寻求耐热木聚糖酶作为催化剂是非常重要的。重点介绍了耐热木聚糖酶的特性、分泌表达和结构区域的研究进展。  相似文献
6.
重组超耐热酸性α-淀粉酶的分离纯化及其性质研究   总被引:14,自引:0,他引:14       下载免费PDF全文
基因工程菌所产生的重组超耐热酸性α-淀粉酶,通过超滤浓缩、脱盐和聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳进行纯化,得到电泳纯的超耐热酸性α-淀粉酶,纯化倍数为11.7,活力回收率为29.8%。用SDSPAGE测得该酶的分子量为55kD,酶的等电点pI(室温)为5.0,以可溶性淀粉为底物的Km值为1.12gL,用硫酸酚法测得其含糖量为15.4%。该酶的最适反应温度为95℃,最适反应pH值为4.5。在pH4.0~7.0室温放置48h酶活没有变化,110℃保温1h残留60%活力。Cr3 、Fe2 、Cu2 抑制酶的活性,Ca2 对酶活无影响。EDTA和DTT对酶的活性无影响。  相似文献
7.
嗜热细菌的碱性磷酸酯酶的研究   总被引:13,自引:0,他引:13  
从58株来自国内温泉的嗜热细菌中分离到一株菌,它所产生的耐热碱性磷酸酯酶在95℃中保温60min后仍保留原来活力的75%。测定了酶的一系列性质,包括酶作用的最适PH,最适离子强度,最适温度,以及酶的热稳定性,米氏常数,活化能等等,还研究了一些无机离子,氨基酸以及表面活性剂对酶活的影响。  相似文献
8.
嗜热真菌耐热木聚糖酶的产酶条件和酶谱分析*   总被引:13,自引:0,他引:13       下载免费PDF全文
嗜热真菌Thermomyces lanuginosus CBS288.54-M18耐热木聚糖酶的产酶条件和酶谱分析结果表明:玉米芯水不溶木聚糖相对于其它来源木聚糖为最佳碳源,而酵母提取物和蛋白胨作为复合氮源时效果最好。培养基最适初始pH值为7.0,最适培养温度为50℃。在最适条件下发酵所产木聚糖酶活力最高达1.834u/mL。另外,SDS-PAGE和酶谱分析(变性和非变性状态下)结果都表明该菌只产生一种分子量约为26kD的G/11族木聚糖酶。  相似文献
9.
高温中性蛋白酶及其产生菌的初步研究   总被引:12,自引:0,他引:12  
活泼 《工业微生物》2003,33(2):30-34
对高温中性蛋白酶产生菌耐热芽孢杆菌(Thermophilic Bacillus)XJT9503的产酶条件及酶的提取进行了初步研究。耐热芽孢杆菌XJT503产酶的摇瓶培养基最适碳源为葡萄糖,最适氮源为豆饼粉,100r/min,46℃培养60h酶活最高。实验结果表明高温中性蛋白酶提取可采用硫酸铵分级沉淀法。  相似文献
10.
海藻糖在生物工程中的应用   总被引:10,自引:0,他引:10  
概述了近几年来海藻糖功能开发的最新进展,介绍它在提高分子生物学实验反应效率,改进生物制剂的保存方法及抗逆植物基因工程等领域的重要应用,同时介绍了海藻糖一些功能的分子机制。  相似文献
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