蜈蚣碱性蛋白SSmp—d的分离纯化及其部分理化性质的鉴定

少棘巨蜈蚣经９５％乙醇脱脂后,再经４℃水冷渗,水提液低温旋转浓缩,冻干,得到的冻干粉先后经过Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５柱,等电聚焦制备电泳,再经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０柱,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱,最后经ＨＰＬＣ制备得到一个纯的碱性蛋白,命名为ＳＳｍｐ－ｄ。该蛋白经ＨＰＬＣ、超薄等电聚焦电泳检验是均一的。采用ＨＰＬＣ和Ｐｒｏｔｅｉｎ－Ｐａｋ＾ＴＭ１２５柱测定其分子量为２４．６４ｋＤ。ＩＥ     

野油菜黄单胞菌分泌组双向电泳样品制备方法的建立

野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是十字花科植物黑腐病的病原细菌。我们建立了Xcc的蛋白质组学研究平台,用于分离、鉴定该菌的致病相关蛋白。为了减少胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)对蛋白材料质量的影响,我们构建了EPS缺陷的Xcc8004ΔgumB突变体。本研究以Xcc8004ΔgumB出发菌株,用诱导培养液培养,取细胞上清通过超滤浓缩得到蛋白质粗提物,分别采用丙酮沉淀法、试剂盒纯化法和丙酮沉淀-试剂盒联用法来纯化蛋白质粗提物,通过比较双向电泳的结果优选最佳的样品制备方法。结果证明丙酮沉淀-试剂盒联用法较为理想,所得双向电泳图片清晰,分辨率高。因此,此方法可以用于制备野油菜黄单胞菌分泌组双向电泳样品,并可以满足进一步研究的需要。     

IMPACT-TWIN蛋白纯化系统的机制及其应用

IMPACT-TWIN系统是一种新型的蛋白融合表达及纯化系统,已被应用到蛋白质工程的众多领域。此系统中目的蛋白与蛋白自剪接元件intein及几丁质结合蛋白域CBD构成融合蛋白,利用几丁质亲和层析柱,通过诱导内含肽的肽键裂解活性,使目的蛋白释放出来,而内含肽与几丁质结合蛋白仍结合在几丁质介质上,实现了单柱分离纯化蛋白。本文主要阐述了IMPACT-TWIN蛋白表达纯化系统的机制、特点,以及其在蛋白表达纯化方面应用的最新进展。     

优化脐血间充质干细胞的新方法

目前在脐带血间充质干细胞分离纯化过程中,往往出现纯度不高,有大量混杂的细胞。人羊膜组织是胚胎发育的早期产物,由于人羊膜具有无毒、无菌、无刺激性、抗微生物、不表达人HLA—ABC和HLA—DR抗原、易于获得和处理等特性,近十几年来羊膜在组织工程和移植治疗的临床应用较为广泛。     

拟南芥HyPRP蛋白AZI1在大肠杆菌中的表达及其抗真菌活性分析

AZI1(AZELAIC ACID INDUCED 1)基因位于拟南芥4号染色体上,编码产物是脂质转移蛋白(lipid transfer protein, LTP)家族的一个成员。该基因在系统获得抗性(systemic acquired resistance, SAR)中具有重要功能,名称来自它可以被壬二酸(azelaic acid, AzA)诱导。已有的研究结果显示,在拟南芥中由AzA和甘油-3-磷酸(glycerol-3-phosphate, G3P)诱导的SAR反应需要AZI1和DIR1,这两个脂质转移蛋白有助于G3P的积累。为了确定AZI1蛋白是否具有抗真菌活性,本工作构建了原核表达载体pET28a-AZI1,利用大肠杆菌BL21(DE3)受体细胞制备了没有信号肽的AZI1重组蛋白。Western免疫印迹分析发现通过半乳糖苷类似物IPTG诱导表达的AZI1重组蛋白主要以包涵体的形式存在。体外抑菌实验以及激光共聚焦显微观察结果表明,用镍离子亲和层析树脂纯化的AZI1重组蛋白对灰霉菌、赤霉菌、棉花枯萎病菌和酿酒酵母细胞的生长/分裂均具有抑制作用。     

木霉菌发酵羊胃容物产木聚糖酶的分离纯化及特性

目的:为城市屠宰场牛羊胃容物类的生物垃圾型可再生资源的潜在工业化开发应用(城市无害鲜生物垃圾变废为宝的低碳生物循环经济工程)提供了部分可靠科学依据.方法:M-112木霉菌固态发酵羊胃容物的粗酶提取液,经20～60%饱和度的硫酸铵粗分级分离、Sephadex G-25脱盐、Sephadex G-150到Sephadex G-100分子筛顺序纯化,通过蛋白质测定、酶活测定、SDS-PAGE和底物-PAGE电泳等.结果:制备到一种分子量约为64.7kDa的电泳纯木聚糖酶,其回收率为5.59%,纯化倍数10.43,比活力为253.36IU/mg.纯化出的木聚糖酶,经性质研究表明,其Km=11.20g/L,Vmax=0.70μmoL/min;最适温度为65℃,最适pH为6.0,该酶在中温条件下稳定性好,在酸性至弱碱性(pH 3.0～8.0)条件下稳定性好.结论:采用改良的凝胶色谱技术,首次纯化出木霉菌固态发酵羊胃容物所产的木聚糖酶.     

几种水稻RubisCO小亚基基因在大肠杆菌中表达方法的比较与产物的纯化

本文采用常规IB液体培养基37℃培养;增加0．66MM甜菜碱,0．33M山梨醇＋0．33M甜菜碱,0．66MM山梨醇,25℃培养于常规LB液体培养基培养以及更换温敏表达载体PBV200等三种方法,比较RubisCO小亚基基因在大肠杆菌中表达。结果表明,采用降低温度和增加培养介质的方法,目的基因以可溶性蛋白形成表达,且表达量与常远规LB培养基表达量相同;而以温敏表达载体PBV200质粒,表达总量增加且培养周期大大缩短。     

大鼠βB2—晶体蛋白的克隆,高效表达及纯化

β－晶体蛋白是含量最高的一组晶状体结构蛋白。它的正常结构对维持晶状体的高折射系数和透明至关重要,而其结构的改变与白内障的形成密切相关。为了获得大量纯的βＢ２－晶体蛋白并用定点突变的方法研究其聚合的机制,建立了大鼠βＢ２－晶体蛋白的细菌表达系统及纯化方法。用ＲＴ－ＰＣＲ的方法克隆了β－晶体蛋白中含量最高的βＢ２－晶体蛋白的ｃＤＮＡ。用苯啶酮酸诱导ｒｅｃＡ启动子后,蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达。β     

锁阳多糖的提取及纯化工艺

目的:优化锁阳多糖(Cynomorium songaricum polysaccharide,CSP)的提取纯化工艺.方法:回流提取法提取CSP,以CSP得率为评价指标,在单因素试验的基础上,结合正交试验对提取工艺进行优化;以蛋白脱除率和多糖保留率为考察指标,比较Sevage法、TCA法、醋酸铅法及木瓜蛋白酶法对CSP...