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1.
土壤微生物总DNA的提取和纯化   总被引:73,自引:2,他引:71       下载免费PDF全文
本文建立了从土壤中提取总DNA的方法,并通过改进使适合于对革兰氏阳性菌的提取。用9种性质不同的土壤进行验证,均提取到了DNA,每克干土的DNA提取量从3.30μg~13.41μg,通过透析袋回收进行纯化,纯化回收率达到65.34%,纯化后的土壤DNA可以直接扩增出16S rDNA。9种土壤的提取率从60.51%~93.45%,可以从每g干土添加362个菌体的土壤中扩增到目的条带。  相似文献
2.
枯草芽孢杆菌抗菌蛋白X98Ⅲ的纯化与性质   总被引:43,自引:3,他引:40       下载免费PDF全文
枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BS-98是一株能强烈抑制苹果轮纹病菌(Physalosporapiricola)等植物病原真菌的拮抗菌株。BS-98菌株培养液经硫酸铵分级盐析、SephadexG-100柱层析和DEAE-纤维素(DE32)柱层析后分离纯化出一种抗菌蛋白,命名为X98Ⅲ。蛋白电泳分析结果表明,此蛋白分子量为59000,等电点为4.50.醋酸纤维膜电泳后经特异染色证明X98Ⅲ含糖及胀。用DNS法测其含糖量为6%。此蛋白对热稳定,对蛋白酶部分敏感。氨基酸组分分析表明,该蛋白含11种不同氨基酸,尤富含谷氨酸和半胱氨酸等,而缺少天冬氨酸等。纯化后的X98Ⅲ对苹果轮纹病菌、芦笋茎枯病菌等有很强的抑制作用。X98Ⅲ的抑菌机理主要是溶解细胞壁,造成菌丝畸形、孢子不发芽或发芽异常。  相似文献
3.
极大螺旋藻多糖的分离,纯化及其抗氧化特性的研究   总被引:41,自引:1,他引:40  
对极大螺旋藻(Spirulina maxima)用热水抽提、脱蛋白、醇析得粗多糖,再经DEAE-Sephadex A-25柱层析纯化得到2个组分的多糖精品(SPSⅠ和SPSⅡ),分别经Sephadex G-150柱层析鉴定为单一组分,它的紫外可见光谱只出现195.00nm的单峰。在体外设计产生超氧阴自由基(O_2~ )、脂质自由基(R·)和羟自由基(OH·)等3个体系,分别加入2个组分不同浓度的多糖,结果表明:极大螺旋藻多糖具有显著的清除OH·的活性(P<0.05),但对O_2~ 没有显著作用(P>0.1);在低浓度条件下(2.5×10~(-4)g/L),它们可以清除R·(P<0.05),SPSⅠ比SPSⅡ的活性显著;在较高浓度下清除R·的活性有所降低(P>0.2)。说明极大螺旋藻多糖的显著抗氧化作用主要表现在清除活性氧中最活泼的OH·方面。  相似文献
4.
枯草芽孢杆菌JA分泌物中具有抑菌作用的粗提液通过DEAESepharose FF、SOURCE 15 PHE、Sephacry1 S200HR和反相HPLC多步柱层析分离纯化后,获得3种对水稻纹枯和小麦赤霉病菌均有抑菌作用的抗菌肽AFP1、AFP2和AFP3。MALDITOF质谱法测得其分子量分别为1462.645D、1476.390D和1490.530D。氨基酸组成分析结果表明,AFP1和AFP3由苏氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸等多种氨基酸组成。目标产物热稳定性好、对蛋白酶有一定的耐受性,推断很可能是低分子量的环状脂肽。  相似文献
5.
灵芝胞外多糖的分离纯化及生物活性   总被引:33,自引:3,他引:30       下载免费PDF全文
目前,灵芝多糖的抗肿瘤及免疫活性已得到人们的广泛关注[1]。灵芝子实体多糖和发酵过程中产生的胞内和胞外多糖已被国内外的研究者证实都是有效多糖[2]。因此利用深层发酵来大规模地生产生物活性多糖是目前灵芝开发利用技术的热点。国内对灵芝培养基的组成、培养方法等已?..  相似文献
6.
枯草芽孢杆菌B034拮抗蛋白的分离纯化及特性分析   总被引:31,自引:2,他引:29       下载免费PDF全文
枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis)B034分离自水稻叶面,对水稻白叶枯病菌具有较强的拮抗能力。除去菌体培养液以70%饱和度硫酸铵沉淀所得的拮抗物粗提液对热稳定,对胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K、链霉蛋白酶E部分敏感,对氯仿部分敏感,其作用的活性pH范围低至4,高至12以上,比较耐碱性。粗提液经PhenylSepharoseCL4B柱层析、DEAESephacel柱层析和HPLC的Superdex75HR10/30柱层析,得到二个拮抗活性峰:P1和P2。P2经SDSPAGE和PAGEIEF电泳显示为单一蛋白带,分子量503kD,等电点625。自动Edman降解法从P2的N端测出残基序列为IleSerAsnProXIleAspVal  相似文献
7.
枯草芽孢杆菌B2菌株产生的表面活性素变异体的纯化和鉴定   总被引:31,自引:1,他引:30  
利用6mol/L HCI沉淀枯草芽孢杆菌B2菌株的去细胞培养液,甲醇抽提获得脂肽类抗生素粗提物,过Sephadex LH-20层析柱获得粗纯化物,经MALDI-TOF-MS检测表明B2菌株仅含有表面活性素一种脂肽类抗生素。利用HPLC SMART SYSTEM,将粗纯化物过μPRC C2/C18层析柱对表面活性素变异体进行分离后获得纯化物。经MALDI-TOF-PSD—MS对纯化物的结构分析表明,B2菌株的表面活性素变异体由13、14和15个碳原子的脂肪酸链以及L-Glu-L-Leu—D—Leu—L-Val-L-Asp-D—Leu-L-Leu七环肽组成。  相似文献
8.
重组人CK2β亚基的原核表达、纯化与鉴定   总被引:30,自引:1,他引:29       下载免费PDF全文
将构建成功的人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的重组质粒, 转化大肠杆菌BL21 (DE3), 在IPTG诱导下表达. 表达蛋白大多数以不溶形式存在. 6L(约10.2 g)表达菌抽提得到约20 mg的可溶性表达产物, 通过P11磷酸纤维素一步层析分离, 得到6.8 mg纯化蛋白. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化的蛋白为一分子质量26 ku的单一蛋白带.蛋白质印迹结果证明:纯化的表达产物与抗人CK2β抗体可发生特异性免疫反应. CK2β亚基对CK2α有激活作用, 纯化的CK2α和β亚基在等摩尔混合时即可组成有最大生物活性的全酶. 实验结果有力地证明了克隆表达与纯化的重组蛋白是人蛋白激酶CK2β亚基.  相似文献
9.
D140大孔吸附树脂银杏黄酮提取纯化性能研究   总被引:29,自引:0,他引:29  
对国内外部分大孔吸附树脂的银杏黄酮吸附性能进行了比较筛选实验。其中D140型大孔吸附树脂具有较佳的吸附能力,应用该树脂研究了银杏黄酮的树脂法提取纯化工艺,研究结果表明,银杏黄酮提取液的预处理,提取液的pH,提取液过柱流速,洗脱剂种类及用量,洗脱物后处理等因素均对银杏提取物的收率、纯度等产生影响,采用D140树脂提取银杏黄酮的平均收率为3.54%,纯度为24.54%。已用于工业化生产。  相似文献
10.
豆壳过氧化物酶的分离纯化及其性质研究   总被引:29,自引:2,他引:27       下载免费PDF全文
 从豆壳抽提液经硫酸铵分级沉淀,DEAE-SephadexA-50离子交换层析,ConA-Sepharose4B亲合层析和Bio-GelP-60凝胶过滤,纯化了豆壳过氧化物酶(soybeanhulper-oxidase,ShP).纯化酶的比活力为7077U/mg,在SDS-PAGE上显示出一条蛋白质带.ShP分子量为38000,等电点为3.9;ShP为一含血红素的糖蛋白,含糖量为18.7%,光谱学分析揭示,在406nm处有一典型的Soret带,在510nm和640nm处有特征吸收峰.酶反应的最适pH在4.0附近,最适温度为45℃;在pH2.5~12.0之间较稳定,75℃,保温60min,酶活力残余68%,ShP是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶.动力学分析求得ShP的表观Km(愈创木酚)为1.62mmol/L,表现Km(H2O2)为0.34mmol/L.在所测定的化学试剂中,N-3、CN-、Fe3+、Fe2+和Sn2+对酶有较强烈的抑制作用,而重金属离子Ag+、Hg2+、Pb2+、Cu2+、Cr3+以及SDS和EDTA对酶活力无显著影响  相似文献
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