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1.
猪雌激素受体基因(ESR)点突变的PCR-SSCP检测   总被引:21,自引:2,他引:19       下载免费PDF全文
姜运良  李宁  习欠云  吴常信 《遗传》2000,22(4):214-216
雌激素受体基因(ESR)是控制猪高产仔数的主效基因之一,具有明显的基因效应:BB型比AA型母猪胎总产仔数和产活仔数分别高出1.40~3.37和0.63~3.58头,是目前商品猪育种和生产中重点检测的主要基因之一。常规采用PCR-RFLPs方法区分该基因由点突变造成的3种不同的基因型。本研究建立1种基于PCR的SSCP(single-stranded conformation polymorphism)方法对猪ESR该位置的点突变进行检测,具有操作简便、灵敏度高和不需要酶切等优点,可以在育种实践中广泛应用。 Abstract:ESR is a major gene controlling litter size in swine.The sows of BB genotype produce 1.40~3.37 more piglets of the total number born and 1.07~2.40 piglets of the number born alive respectively comparing with those of AA genotype.ESR has been one of the widely detected genes in pig breeding and production.Usually the point mutation of ESR gene was detected by PCR-RFLP approach.The present study established a novel method based on PCR-SSCP,with the advantage of easy maniputation,high sensitivity and no necessity for restriction enzyme digestion.This method may be applied for commercial detection of the point mutation of ESR gene in swine breeding.  相似文献
2.
一个母系遗传非综合征耳聋大家系mtDNA序列分析   总被引:7,自引:4,他引:3  
通过分析本家mtDNA序列,探讨淮阴一非综合耳聋大家患病的分子遗传学机制。采用聚合酶链反应(PCR)扩增mtDNA与非综合征耳聋相关位点nt1555,nt7445的区域和人类种群研究的D-loop区,PCR-异源双链分析,PCR-RFLP、PCR产物克隆序列测定等技术对该家系进行了系统的研究。发现该家系中全部母系亲属有mtDNAA1555G突变,而家系中非母 个体,对照组(100例正常个体)的mtDNA1555位点均为A。该家系mtDNA7445位点无突变;该系属于Ⅱ型线性体;发现家系D-loop区存在未见报道的碱基插入。提示mtDNAA1555G位点突变可能是导致该家系患致聋的主要因素之一。遗传背景可能对家系疾病的表现存在一定程度的影响。  相似文献
3.
CELⅠ酶的粗提取及其活性检测   总被引:6,自引:0,他引:6       下载免费PDF全文
韩锁义  杨玛丽  盖钧镒  喻德跃 《遗传》2006,28(9):1112-1116
CEL I酶是第一个从真核生物中提取的用于高效特异切割DNA双链碱基错配和DNA扭曲的内切酶, 因而也是TILLING技术中用到的一种关键酶。文章对CELI酶的粗提取及其活性检测进行了研究。错配切割实验表明, CELI酶在包含有G→A点突变的杂合双链中, 能有效地在错配位点进行切割, 并可以通过ABI377测序仪获得直观的检测结果, 从而可以用于TILLING分析。  相似文献
4.
崔治中 Lee  LF 《病毒学报》1999,15(2):147-153
用鸡马立克病病毒(MDV)强毒GA株的38kD磷蛋白(pp38)基因克隆DNA转染I型弱毒疫苗CAI988/Rispens株MDV感染的鸡胚成纤维细胞,再用能识别I型强毒pp38的单克隆抗体H19做免疫荧光试验,筛选到能在pp38基因上表达强毒株特异性抗原决定簇的定向点突变弱毒株CVI/rpp38。用^35S-蛋氨酸标记的细胞裂解物做免疫沉淀反应表明,单抗H19不能识别天然CVI988株MDV中的  相似文献
5.
磁场对质粒pBR322DNA的影响   总被引:6,自引:1,他引:5       下载免费PDF全文
讨论了经500mT、900mT、1200mT、1500mT恒磁场作用后的质粒pBR322DNA与Ⅱ型限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠSalⅠ、PstⅠ、PuvⅡ、TaqⅠ、BglⅠ、RsaⅠ、HinfⅠ、APaⅠ、KpnⅠ等的单酶解、双酶解及多酶解反应。从琼脂糖电泳分离酶解片段的结果,发现经磁场作用过的pBR322DNA在3361—631bp的区段内产生了一个被HinfⅠ识别的新序列GANTC,证明了磁场作用能引起DNA点突变。  相似文献
6.
植酸酶基因的多点突变及在毕赤酵母中的高效表达   总被引:5,自引:2,他引:3       下载免费PDF全文
根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性,不改变其编码氨基酸序列,对来源于黑曲霉N25植酸酶phyA基因,进行了突变,构建了含有正确突变的酵母表达载体pPIC9k-phyAm-4,电击转化毕赤酵母,获得优化了密码子的重组酵母转化子。经PCR鉴定表明,植酸酶基因已整合到酵母基因组中; 表达产物的SDS-PAGE分析表明,酶蛋白分子大小为70.15KD。Southern blotting结果表明,phyA基因整合到酵母染色体DNA中;转化子酶活测定结果表明,经密码子优化的重组酵母PP-NPm-4-2酶活可达136900U/ml,比Arg没有优化的PP-NPm-8 (47600 Uoml-1)酶活高约2.8倍。  相似文献
7.
Leber遗传性视神经病变家系的线粒体基因突变分析   总被引:5,自引:0,他引:5       下载免费PDF全文
林玲  陈贻锴  童绎  郑志竑  林建银  朱进伟 《遗传》2003,25(3):267-270
为探讨Leber遗传性视神经病变(Leber′s hereditary optic neuropathy,LHON)家系线粒体DNA(mtDNA)常见致病原发突变的频谱,用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和单链构象多态性(single-stranded conformational polymorphism,SSCP)以及DNA测序的方法,对13个家系22位临床诊断为LHON的患者及其母系亲属21人的线粒体DNA进行检测,同时检测71例正常人作为对照。临床拟诊为LHON的13个家系中,11个家系存在mtDNA位点11778 G→A突变,另2个家系存在14484位点T→C突变。说明中国LHON病人存在线粒体DNA 11778或14484位点突变,其中14484位点突变在国内尚未见报道。 Abstract:The purpose of the study is to investigate the frequency of common pathogenic primary mitochondrial DNA mutations in pedigrees of Leber′s hereditary optic neuropathy (LHON).Mutations were determined by polymerase chain reaction (PCR),single-stranded conformational polymorphism (SSCP) and DNA sequencing.Twenty-two patients with suspicion of LHON and twenty-one their maternal relatives underwent molecular genetic evaluation.Seventy-one normal individuals underwent molecular genetic evaluation as control at the same time.Members from 13 families with suspicion of LHON,11 families had nucleotide position nt11778 G→A mutations.Another 2 families had nt14484 T→C mutations.It is concluded that the point mutations at nucleotides 11778 and 14484 are primary LHON mutations,but the point mutation of nt14484 is rare in Chinese.  相似文献
8.
为在凝血基因IX基因剔除小鼠基础上建立基因组中整合有含特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体原转基因小鼠家系,为血友病乙的研究提供更接近临床实际的动物模型。利用体外定点突变技术,构建含有特定点突变的人凝因IX基因表达载体,该载体包括由人凝血因子IX编码区及第一内含子构成的人凝血因子IX基因(hFIXml)、4个拷贝的MCK增强子(MCKe)、鸡β-肌动蛋白启动子(bA)及PolyA,命名为pMe4bAIXml质粒。将其线性化后,用显微注射法注射入817只凝血因子IX基因剔除小鼠受精卵雄原核,再将它们分别回输45只假孕受体母鼠的输卵管中,共产仔69只,存活63只。采用PCR与基因组Southern杂交筛选法鉴定小鼠,证实6只小鼠基因组中整合有含特定点突变的pMe4bAIXml质粒,并对1只小鼠的PCR产物进行测序,证实转基因结构特征符合设计要求。  相似文献
9.
大仓鼠β2肾上腺素受体基因的套叠PCR法多点突变研究   总被引:4,自引:2,他引:2  
对大仓鼠β1肾上腺素受体蛋白(β2 adrenergic receptor,β2AR)进行立体结构与疏水性分析.利用套叠,PCR法对β2AR基因进行多点突变,将保守跨膜域疏水氨基酸突变为正电荷亲水氨基酸,成功构建分别带有7个与3个突变氨基酸的原核突变表达载体.探讨了套叠,PCR的反应条件,为β2AR基因在体外的高量表达提供基础.  相似文献
10.
碱基替换突变是形成物种多态性和造成生物进化的根本原因之一. 近年的研究表明: 基因组的碱基组分在不同程度上与碱基替换突变的发生相关. 以水稻全基因组3611007个SNPs(包括45462个编码区SNPs和242811个内含子区SNPs)和拟南芥全基因组32019个SNPs为研究对象, 研究突变位点周围的碱基A&;T(A和T)的使用频率和点突变类型的相关性, 结果表明: 水稻和拟南芥全基因组上转换和颠换的比值(Ts/Tv)以及紧邻突变位点(上下游各1个碱基)上A&;T碱基的个数负相关. 统计了6种SNP的AT2 (直接相邻的碱基是A或T的个数)和AT0 (直接相邻碱基是C或G的个数), 发现水稻和拟南芥都是C/G型SNP的AT2/AT0值最大, 说明C/G型SNP可能受直接临近区域上A&;T碱基的影响最大. 在水稻全基因组SNPs中, A&;T碱基影响突变的范围局限在突变位点上下游2个碱基内. 拟南芥A&;T碱基影响其全基因组SNPs的范围不超过上下游4个碱基.  相似文献
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