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1.
成年耳细胞克隆山羊(Capra hircus)   总被引:32,自引:2,他引:30       下载免费PDF全文
繁殖季节采集关中奶山羊卵巢,采集获得可用卵母细胞5.5枚/卵巢(1815/330).经约20 h 成熟培养,第一极体排放率66.17%(1201/1815).将有类第二极体排出结构的成熟卵母细胞去核,去核率75.44%(906/1201).培养济宁青山羊耳部皮肤成纤维细胞传2代后液氮冷冻,解冻培养3~6代,用0.5% FBS饥饿2~10 d作为供体细胞.利用卵母细胞胞质内注射法将分离的供体细胞核胞体注入到去核卵母细胞内,注核成功率98.12%(889/906).克隆胚胎用5μmol/L 离子酶素激活4.5 min, 在含2 mmol/L 6-二甲氨基嘌呤(6 dime-thylaminopurine,6-DMAP)的培养液中培养3 h,然后在mCR1aaBF培养液中培养36 h,卵裂率76.69%(645/841).其中由未经冷藏处理供体细胞克隆得到308枚胚胎,激活后卵裂率、4-细胞发育率、囊胚发育率分别为68.5%(211/308),59.72%(126/211)和17.46% (22/126);另外,由4℃冷藏处理24h供体细胞获得的109枚克隆胚胎,激活率、4-细胞率、囊胚率分别为72.48%(79/109),53.16%(42/79)和19.05%(8/42).统计学分析表明,4℃处理供体细胞对克隆胚胎的早期发育没有显著影响.将102枚发育至4-细胞期的克隆胚胎移植到17只自然发情2~3 d 的受体山羊输卵管,其中非冷藏供体细胞克隆的84枚胚胎移植后没有产仔.18枚冷藏体细胞克隆的胚胎移植获得1只发育足月的克隆山羊.将冷藏或非冷藏处理供体细胞克隆得到的19枚体外发育囊胚移植到自然发情6~8 d 的受体山羊,结果无一产仔.未经冷藏处理供体细胞克隆得到的18枚体外发育桑椹胚移植到自然发情5 d受体山羊后获得1只足月羔羊.微卫星引物PCR扩增结果证实2只克隆山羊来源于同一供体细胞.  相似文献
2.
由成年转基因山羊体细胞而来的克隆山羊   总被引:22,自引:0,他引:22       下载免费PDF全文
在已经获得的乳腺特异性表达人促红细胞生成素 (rhEPO)成年转基因山羊 (Caprahircus)的基础上 ,取其耳尖成纤维细胞和卵巢颗粒细胞 ,进行体外传代培养 ,然后将这种培养的转基因山羊的体细胞移入去核的处于第Ⅱ次减数分裂中期的卵母细胞中 ,并进行电融合 ,构建重构胚胎 ,重构胚胎在体内培养 6d ,再将发育至囊胚或桑椹胚的重构胚胎移入同步情期的寄母羊子宫内。结果 ,有 2只寄母羊妊娠并最终产下 2只成活的克隆山羊。她们分别来自同一成年母羊的耳尖成纤维细胞和卵巢颗粒细胞。克隆羊经PCR RFLP图谱分析显示 :以克隆羊组织DNA为模板的PCR产物与相应的提供体细胞的基因羊的PCR产物的酶切图谱完全一致 ;并且经PCR对外源hEPO基因检测表明 2只克隆山羊均携带hEPO外源基因。由此证明获得了转基因成年体细胞的克隆山羊  相似文献
3.
D—半乳糖对神经元和成纤维细胞拟老化作用的实验研究   总被引:21,自引:0,他引:21  
实验用体内、外相结合的方法,观察了D-半乳糖(D-galactose,D-gal.)对细胞的促老化作用。结果表明,D-gal使培养大鼠胎脑神经元出现生长发育缓慢、突起脱落、死亡率增高等退行性变;大鼠肺成纤维细胞的体外分裂代数减少;人胎儿肺二倍体成纤维细胞(HBS)分裂周期中G2-M期细胞减少、G-G1期细胞增加、DNA含量下降,细胞增殖速度减慢;大鼠胎脑神经细胞和HBS中SOD含量降低,丙二醛(MDA)水平升高,这些结果与次黄瞟呤(HPX)-黄瞟呤氧化酶(XOD)系统产生的超氧阴离子自由基(O-2·)作用一致。提示,D-gal抑制细胞生长发育和分裂繁殖,加速细胞老化,其机理可能与O-2·等活性氧(ROS)过荷引起的脂质过氧化有关。  相似文献
4.
碱性成纤维细胞生长因子研究进展   总被引:19,自引:0,他引:19  
碱性成纤维细胞生长因子是一种在体内分布广泛、生理功能重要的生长因子,本文综合讨论了其家族成员、分子结构、生物学功能、作用机理和研究趋向等问题。  相似文献
5.
成纤维细胞生长因子对神经元的营养作用   总被引:14,自引:0,他引:14  
成纤维细胞生长因子是一类多功能的多肽生长因子。近年来的研究表明,FGF成神经系统的生长发育有十分密切的关系。FGF体外能促进多种神经元的存活及突起生长,体内也能促进受损伤神经元的修复与再生,是一类新的神经营养因子。FGF还与许多中枢神经系统疾病。如Parkinson's病、Alzheimer's病的发生发展有关,因此深入开展FGF神经营养作用的研究具有十分重要的意义。  相似文献
6.
成纤维细胞生长因子研究进展   总被引:14,自引:0,他引:14  
成纤维细胞生长因子(FGF)家族至少有七个成员,有些成员是原癌基因的产物。它们对多种细胞的生长与分化具有调节作用。该家族存在两类受体,高亲和力受体具有酷氨酸蛋白激酶活性,低亲和力受体为肝素受体。FGF对神经生长因子、血小板衍生生长因子的表达有一定调控作用。  相似文献
7.
碱性成纤维细胞生长因子   总被引:14,自引:0,他引:14  
郭庆  温进坤 《生命科学》1997,9(1):15-18,46
综述了近年来碱性纤维细胞生长因子(bFGF)的研究进展,重点介绍了bFGF的两类受体及其在信号传递过程中的作用,讨论了bFGF的基因结构及表达调控机制,阐述了BFGF的生物学功能。  相似文献
8.
新生大鼠心室成纤维细胞条件培养液的促心肌细胞肥大作用   总被引:13,自引:2,他引:11  
利用新生大鼠心室成纤维细胞条件培养液孵育心肌细胞,证实成纤维细胞条件培养液能明显增大心肌细胞的表面积,增加心肌细胞的蛋白含量和「^3H」-亮氨酸「^3H」-Leu)的掺入,上述作用以第3天的条件培养液作用最强,具有剂量依赖性。ETA受体拮抗剂BQ123能部分阻断成纤维细胞条件培养液促进心肌细胞肥大的作用,而AT1受体拮抗剂CV11974和α-肾上腺素受体拮抗剂regitin却无此效果。结果提示:成  相似文献
9.
李扬  吴凯峰  郭旭东  郭继彤  旭日干 《遗传》2002,24(6):653-655
通过脂质体(FuGENE-6)介导,将真核表达载体pEGFP-C1成功导入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,探讨影响外源基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA与脂质体复合物的时间长度。通过实验发现,绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的表达随DNA、脂质体量的增加而增加,延长细胞暴露时间反而使转染效率下降,转染细胞数适当才能得到较高的转化率。 Optimization of Parameters of Exogene Transfection of Bovine Fetal Fibroblasts in vitro Mediated by Liposome LI Yang,WU Kai-feng,GUO Xu-dong,GUO Ji-tong,BOU Shor-gan The Research Center for Laboratory Animal Science of Inner Mongolia University,The Key Laboratory of Ministry of Education of China for Mammal Reproduction Biology and Biotechnology,Huhhot 010021,China Abstract:pEGFP-C1 eucaryon expression vector was successfully transfected by liposome into bovine fetal fibroblasts.We investigated the effect of parameter such as the dose of DNA and liposome,number of cell transfected and exposure time of the cell to the DNA-liposome complexes.It was indicated that GFP(green fluorescent protein)expression was enhanced as the dose of DNA and liposome increased and on decline as the exposure time was prolonged.The improvement of transfection efficiency depent on the suitable cell number. Key words:liposome; GFP; bovine fetal fibroblasts; transfection  相似文献
10.
鸡γ干扰素成熟蛋白基因的表达及其产物抗病毒活性测定   总被引:13,自引:0,他引:13  
以血淋巴细胞提取的总RNA为模板,通过RT-PCR的方法克隆出鸡γ干扰素成熟蛋白的基因,把它与非融合表达载体pRLC相重组.通过对阳性宿主菌的不同时间的诱导摸索出最佳表达时间.把表达产物进行变性,复性,纯化后加入鸡胚成纤维细胞上,用水疱性口炎病毒进行攻毒,测出鸡重组γ干扰素的活性单位为1.0×106U/mL,获得了满意结果.  相似文献
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