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1.
非典型肺炎病例标本中新型冠状病毒的分离与鉴定   总被引:108,自引:0,他引:108       下载免费PDF全文
目的对非典型肺炎的病原体进行分离鉴定,为该病的诊断、预防和治疗提供依据。方法采用细胞培养和乳鼠接种法,从非典型肺炎病例标本中分离致病病原体,通过电镜形态学、血清学和动物致病性观察及RTPCR扩增与部分基因序列分析,对分离的病原体进行鉴定。结果成功地从死亡病例尸解的肺组织标本和患者鼻咽拭子标本中采用细胞培养法分离出病原体。通过电镜在病变细胞及其培养上清中观察到大量冠状病毒样颗粒。免疫荧光染色检测非典型肺炎患者血清,表明分离的病毒与此次流行的非典型肺炎密切相关。分离的病毒可对乳鼠致病,并在发病乳鼠的肺组织标本中通过电镜同样观察到冠状病毒样颗粒。从非典型肺炎病例尸解肺组织、传代发病小鼠肺组织及分离物感染的细胞培养物中,通过RTPCR可分别扩增出冠状病毒的cDNA片段,测序结果显示其核苷酸序列与已知冠状病毒的同源性在60%左右。结论从非典型肺炎病例标本中已成功分离出一种新的冠状病毒,它与此次流行的非典型肺炎密切相关,很可能是此次流行的非典型肺炎的主要病原体 。  相似文献
2.
中国19个狂犬病病毒街毒分离株N基因的序列分析   总被引:35,自引:2,他引:33  
测定了30年来从不同动物中分离的19个中国狂犬病病毒街毒株N基因的部分核酸序列,并对其核苷酸差异做了比较分析。可将中国狂犬病病毒街毒株分为4个组群,各组间的同源性为83.45%-88.62%。除广西地区分离的狂犬病病毒街毒株彼此差异较大外,其余街毒株的地理分布与其N基因核酸序列差异的距离是密切相关的,基本上可按其地理分布分为东、西二大组。  相似文献
3.
猪肥胖基因cDNA的克隆与分析   总被引:33,自引:0,他引:33  
戴茹娟  李宁  吴常信 《遗传学报》2000,27(4):290-297
肥胖基因(ab)是近年刚被克隆的新基因,该基因产物Leptin是反映体内脂肪含量和调节体重的重信号因子,首次报道猪ob基因全长序列,并对不同种物ob基因的同源性进行了比较,以λUni-ZAP^TM为载体构建了猪脂肪cDNA文库,根据已知的人和鼠ob基因序列设计PCR引物,利用PCR法筛选猪脂肪cDNA文库,并用RT-PCR从脂肪RNA中扩增的366bp猪ob基因片段作探针,获得了全长3277bp的  相似文献
4.
小尾寒羊4个微卫星座位的克隆及序列分析   总被引:32,自引:5,他引:27  
小尾寒羊是我国优良的地方绵羊品种 ,具有极高的繁殖力 ,平均每胎产羔 2 6只。利用与Booroola绵羊高繁殖力主效基因 FecB连锁的 4个微卫星座位 OarAE10 1、OarHH35、BM14 3和BMS2 5 0 8对小尾寒羊、多赛特羊、多赛特公羊×小尾寒羊母羊杂一代羔羊 3个绵羊群体 15 9只绵羊进行了遗传检测 ,证实了微卫星DNA的共显性遗传特性。用非变性 (中性 )聚丙烯酰胺凝胶电泳检测微卫星的PCR扩增产物。对小尾寒羊 4个微卫星座位 6个克隆的PCR扩增片段测序获得的序列已被GenBank接受 ,登录号分别为AF394 4 4 5、AF394 4 4 6、AF394 4 4 7、AF394 4 4 8、AF394 4 4 9、AF394 4 5 0。本研究中小尾寒羊微卫星OarAE10 1的测序结果与GenBank登录的绵羊OarAE10 1序列的同源性为 98% ,小尾寒羊微卫星OarHH35的测序结果与GenBank登录的绵羊OarHH35序列的同源性为 99% ,小尾寒羊微卫星BM14 3的测序结果与GenBank登录的牛BM14 3序列的同源性为 95 % ,小尾寒羊微卫星BMS2 5 0 8的测序结果与GenBank登录的牛BMS2 5 0 8序列的同源性为 95 %。测得的小尾寒羊微卫星OarAE10 1、OarHH35、BM14 3和BMS2 5 0 8均为完全的微卫星 (TG) n。这些结果可为小尾寒羊种质特性研究提供分子基础数据  相似文献
5.
三个品种家鸡催乳素基因cDNA的克隆及序列分析   总被引:28,自引:0,他引:28  
从粤黄鸡、毛丝乌骨鸡及伊莎蛋鸡的垂体中快速抽提总RNA,根据国外已发表的肉用仔鸡乳素基因cDNA的序列,设计并合成了能与特定载体末端互补的1对引物,经反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增获得了特异性片段。将扩增片段与线性化质粒pBSSK连接,克隆后进行序列分析,与已报道的肉用仔鸡、矮脚鸡和火鸡催乳素基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行了比较。结果表明,不同品种间核苷酸同源性介于93.97%-99.87%之间,其中丝毛乌骨鸡与矮脚鸡间的同源性最高为99.87%。推导的相应氨基酸序列的同源性在98.25%-100%之间,也是丝毛乌骨鸡与矮脚鸡间的同源性最高,为100%。在粤黄鸡、丝毛乌骨鸡和伊莎蛋鸡中,发现前两者的催乳素前体的cDNA片段推导的 氨基酸序列中信号肽裂触位点跟肉用仔鸡,矮脚鸡及火鸡的一样,为Leu-Pro-IIe-Cys,而伊莎蛋鸡的信号肽裂解位点则不一样,为Pro-Pro-IIe-Cys。此位点的差异可能导致催乳素前体翻译加工的不同,使伊莎蛋鸡无就巢性。这3个家鸡品种与国外的肉用仔鸡、矮脚鸡催乳素氨基酸序列还在以下位置出现差异:71、141、150、175。在肉用仔鸡、丝毛乌骨鸡催乳素氨基酸序列中还发现了一个肝素结合位点175-181(L-R-R-D-S-H-K)。  相似文献
6.
肠道病毒71型中国分离株全基因组核苷酸序列分析   总被引:25,自引:0,他引:25       下载免费PDF全文
对肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)中国(深圳)分离株SHZH98基因组建立了覆盖全基因组的5个首尾重叠的克隆,并在此基础上进行了全基因组(未包括多聚腺苷酸尾)7408个碱基的核苷酸序列测定.数据分析表明,SHZH98株与其他EV71毒株相比,5′UTR和3′UTR的长度和序列有一定的差异.同源性分析发现,与免疫源性密切相关的P1结构蛋白基因与台湾流行株的同源性最高,与欧美流行株的同源性较低,P2,P3区非结构蛋白基因的同源性与Coxsakievirus A16及MS,BrCr株较高,而与台湾流行株相比则较低.遗传进化分析发现,SHZH98株结构蛋白基因与台湾流行株亲缘关系较近,而非结构蛋白基因与Coxsakievirus A16及MS,BrCr株的亲缘关系较近.上述结果在分子水平上对肠道病毒71型中国分离株进行分析,并探索了中国分离株的可能进化途径,有助于肠道病毒71型及整个肠道病毒的基础研究和我国对于EV71所致疾病的预防.  相似文献
7.
绵羊线粒体DNA控制区5‘端序列PCR—SSCP与序列分析   总被引:23,自引:1,他引:22  
赵兴波  储明星 《遗传学报》2001,28(3):225-228
通过绵羊线粒体DNA控制区功能域(5‘端序列)PCR-SSCP和序列分析,发现小尾羊、乌珠穆沁羊、湖羊、萨福克羊和夏洛来羊以及多赛特公羊与尾寒羊杂交家系共202只绵羊可归纳为两种类型,突变型和野生型,提示现代绵羊品种在起源上存在两种主要的进化途径。  相似文献
8.
为从分子水平掌握我国H9亚型AIV的遗传变异情况和流行规律,本研究汇集近年来从我国12个省、市、自治区的发病鸡群中分离到的23株H9亚型禽流感病毒,通过RT-PCR方法和核苷酸序列测定获得了23个毒株的HA基因cDNA核苷酸序列。核苷酸和推导的氨基酸序列同源性比较结果表明,这些毒株HA基因的核苷酸序列同源性为94.1%~100%,氨基酸序列同源性为95.4%~100%;将这23个毒株和来自亚洲及世界其它地区的另外31株的HA基因cDNA序列同源性进行比较发现,分离自香港的HK170499株与日本的2个毒株关系较近;氨基酸序列分析发现,CKGS199、CKTJ196、CKTJ296、CKSH300和CKBJ197五个毒株各发生了一个潜在的糖基化位点的丢失。54株H9亚型AIVHA基因55bp~1152bp的氨基酸序列分析发现,裂解位点尽管有10种基序,但本研究中的23株和近年来从我国大陆和香港地区的分离的毒株则均为RSSR↓GLF;构成受体结合位点的191位氨基酸有一个规律,即所有中国大陆毒株与部分香港毒株都为N,其它毒株均为H,141aa~143aa处的糖基化位点有与191aa类似的规律,即:凡是191aa为N的毒株,该处均为NVS(CKBJ194除外),凡是191aa为H的毒株,则该处均为NVT;遗传发生关系分析,中国大陆毒株处于欧亚谱系的第一支。本研究结果表明近年来我国鸡群中H9N2亚型禽流感病毒的感染流行可能有一个共同的来源,这为制定防治该亚型禽流感流行的有效对策提供了重要的科学依据。  相似文献
9.
我国婴幼儿中存在不同基因型杯状病毒的感染   总被引:23,自引:3,他引:20  
陈冬梅  张又  钱渊 《病毒学报》2001,17(3):265-269
Human caliciviruses were detected from stool specimens collected from infants with diarrhea from Beijing and Anhui Province by using RT PCR PCR products with molecular weight around 330 were obtained by using the primer pair of 289/290,which is proved to be able to amplify both Norwalk like and Sapporo like human caliciviruses The PCR products amplified from specimens collected in Beijing(CR480) and Anhui(A141) were cloned into the T A cloning vector pUCm T and sequenced The cDNA fragment amplified from CR480 is 319bp in length,which is consistent with the molecular weight of the cDNA fragment amplified from Norwalk like viruses with the primer pair 289/290,whereas the cDNA fragment amplified from A141 is 331 bp in length,which is the size of the cDNA fragment from Sapporo like viruses The sequence analysis revealed that the cDNA from CR480(the stool specimen collected in Beijing) shared higher nucleotide and amino acid identities with selected Norwalk like viruses (from 60% to 97% and 62% to 99%,respectively)than with selected Sapporo like viruses(less than 58%),having the highest identity with Takl 1999 jp and ARG320,which belong to genotype Ⅱ of Norwalk like viruses The sequence of the cDNA from A141 (collected form Anhui Province) shared higher nucleotide and amino acid identities with selected Sapporo like viruses(from 68% to 92% and 75% to 96%,respectively) than with selected Norwalk like viruses(less than 52%) It suggests that both Norwalk like and Sapporo like human caliciviruses are circulating in China and cause diarrhea in infants and young childeren  相似文献
10.
拟南芥LFYcDNA的克隆及转化菊花的研究   总被引:22,自引:0,他引:22  
以野生型拟南芥(Arabidopsisthaliana(L.)Heynh.)为材料,克隆并测序了Leafy(LFY)基因的全长cDNA;同时构建了LFYcDNA以CaMV35S为启动子的植物表达载体,并转化菊花(Chrysanthemummorifolium(Ramat.)Tzvel.)。该cDNA全长1263bp,共编码420个氨基酸残基,Southern杂交结果表明,LFYcDNA整合到菊花染色体组中。跟正常植株相比,转基因植株中有3株分别提早65、67、70d开花,2株分别推迟78、90d开花。  相似文献
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