利用CRISPR-Cas9技术敲除MAS1基因的质粒构建与酶切方案优化的研究

CRISPR-CAS9技术是新一代基因编辑技术,可简便快捷地对哺乳动物细胞进行指定基因的敲除,实现沉默外源基因表达的目的。但传统的CRISPR-CAS9技术提供的酶切方案没有特异性,致使酶切效率不稳定,影响胶回收率以及后续实验。本实验通过改变酶切体系大小,以及酶切反应时间,继而通过胶回收率及测序检测的方法验证最佳酶切条件,最后通过荧光定量PCR和Western blotting实验检测目的基因的表达量,确认是否成功敲除目的基因。研究结果说明:BbsⅠ酶与px459质粒比值为1μL:500 ng,酶切体系为50μL,酶切时间为45 min时,酶切效果最佳、胶回收率最高,且此时目的基因在细胞内的表达量为0,确定该实验条件下目的基因被成功敲除。     

优化脐血间充质干细胞的新方法

目前在脐带血间充质干细胞分离纯化过程中,往往出现纯度不高,有大量混杂的细胞。人羊膜组织是胚胎发育的早期产物,由于人羊膜具有无毒、无菌、无刺激性、抗微生物、不表达人HLA—ABC和HLA—DR抗原、易于获得和处理等特性,近十几年来羊膜在组织工程和移植治疗的临床应用较为广泛。     

木犀草素脂质体冻干工艺优化及其对LX-2细胞的影响

[目的]优化木犀草素脂质体的冻干工艺,考察其对LX-2细胞增殖的影响。[方法]采用冷冻干燥法制备木犀草素脂质体冻干粉,以外观、再分散性、粒径及包封率为指标,通过单因素考察和Box-Behnken响应面法优选最佳冻干工艺,MTT法检测其对LX-2细胞增殖的影响。[结果]最佳冻干工艺为预冻温度-80℃,预冻时间12 h,干燥时间24 h,冻干保护剂为总量8%的蔗糖-乳糖-甘露醇(1.0∶1.0∶2.0)联合使用;与冻干前比较,冻干粉在4℃下30 d内较稳定;脂质体对LX-2细胞的抑制作用强于原药(P<0.01),并呈浓度和时间依赖性。[结论]按最优工艺制备的脂质体冻干粉包封率为89.03%,与预测值90.12%吻合度高达98.79%;且脂质体对LX-2细胞增殖的抑制率显著高于原药(P<0.01)。     

甘薯遗传作图策略研究与展望

甘薯分子遗传图谱的建立对甘薯分子育种技术体系的拓展和应用具有重要意义。当前,对甘薯分子遗传图谱的研究虽然取得一定的进展,但存在着很多技术瓶颈,如作图策略应用和优化等。总结了甘薯经典和分子遗传研究进展,剖析了甘薯分子遗传图谱作图的3种方法与策略;探讨和提出了提高甘薯作图效率和质量的途径主要是:优化作图群体质量、克服偏分离、整合多群体间遗传连锁图谱和选择合适的分子标记类型;并指出染色体关联在遗传作图中的重要性,提出甘薯分子育种领域亟待加强的方面,以期为今后甘薯精密分子图谱的建立及基于分子图谱的甘薯分子育种提供新的思路。     

在生物学教学中构建和谐课堂的探索

和谐教育就是以科学理论为指导,以社会发展需求与人的自身发展需求相和谐为宗旨,协调并整体优化各种教育因素,创设和谐的育人氛围,使受教育者在德、智、体、美、劳诸方面得到全面和谐发展,是实施素质教育的一种教育模式。     

SIR传染病模型的参数反演

本文将Adams微分方程数值求解方法和神经网络技术相结合,提出了一种适合于SIR传染病模型参数反演的新方法,该方法可以根据不同的传染病类型和传染病发展的不同阶段反演得到SIR模型参数,从而为分析疫情的发展、制定和评判控制措施提供依据.最后本文以北京2003年公布的SARS疫情数据,采用上述方法进行参数反演,计算结果表明反演参数得到的SIR模型计算结果与实测数据相吻合.     

素质教育与生物教学

素质教育是学科教学的主旋律,优化教学过程是实施素质教育的核心,本文探讨优化生物课教学过程的途径和方法。     

植物学讲授顺序的优化模式探讨

课堂教学是实施素质教育的主渠道,也是知识传递、信息汇集、思想交流和继承创新的重要园地。因此,优化教学过程就是实施素质教育,提高学生学习能力和基本素质。通常认为教学顺序不同于讲授顺序,前者是遵循教材内容的学科逻辑顺序,主要考虑知识表述上的系统和简洁;而后者则要符合学生学习的心理发展,充分考虑到他们掌握知识的思维和行为方式,易于学生理解和掌握,进而调动他们学习的主动性、积极性和创造性,从而达到教会学生学习的目的。教师的备课过程,实际上就是一个编排知识讲授顺序和技巧的过程,即对教材的再创造。只有将教材…     

分枝杆菌Mycobacterium ZLP生产雄烯二酮（4-AD）的优化工艺

利用正交实验对分枝杆菌降解植物甾醇生产雄烯二酮（4-AD）的发酵培养基进行优化,同时进行温度和pH的优化。结果表明：培养基的最佳组成为质量分数2．0％葡萄糖、2．0％蛋白胨、0．7％MgSO4、0．8％K2HPO4;最适温度28℃、最适pH7．0,在此基础上发酵96h,4-AD的产率可达到62．15％。     

亚麻SRAP反应体系的优化

通过研究亚麻SRAP反应体系中主要因子对扩增结果的影响,建立了亚麻SRAP-PCR反应的优化体系.在20μL的反应体系中将PCR的5个主要成分分别设定8个浓度梯度,结果表明,最适宜的优化浓度分别为:1.5 mmol/L Mg2+、0.3 mmol/L dNTP、1.5 U Tap酶、30 ng/μL模板DNA 90 ng和25 ng/μL引物100 ng.用6个亚麻材料验证优化体系,检测结果显示,多态性高,反应体系的稳定性和可重复性好,为SRAP标记技术在亚麻分子生物学研究方面的应用奠定了基础.