包涵体蛋白体外复性的研究进展

外源基因在大肠杆菌中高水平表达时 ,通常会形成无活性的蛋白聚集体即包涵体。包涵体富含表达的重组蛋白 ,经分离、变性溶解后须再经过一个合适的复性过程实现变性蛋白的重折叠 ,才能够得到生物活性蛋白。近年来 ,发展了许多特异的策略和方法来从包涵体中复性重组蛋白。最近的进展包括固定化复性以及用一些低分子量的添加剂等来减少复性过程中蛋白质的聚集 ,提高活性蛋白的产率。  

重组蛋白包涵体的复性研究

重组蛋白在大肠杆菌中的高表达往往形成不可溶、无生物活性的包涵体，需经过变性溶解后，在适当条件下复性形成天然的构象，才可恢复其生物活性．变复性实验是建立在对蛋白质体外折叠机制的了解的基础上．根据近年来对蛋白质折叠机制的认识和重组蛋白包涵体在复性方面的主要进展，论述以下3个方面的内容：1)蛋白质在细胞内的折叠机制；2)蛋白质体外折叠机制；3)蛋白质复性的策略和方法．  

大肠杆菌二硫键形成相关蛋白的结构、功能及其在基因工程表达外源蛋白上的应用

大肠杆菌分泌蛋白二硫键的形成是一系列蛋白协同作用的结果，主要是Dsb家族蛋白，迄今为止共发现了DsbA、DsbB、DsbC、DsbD、DsbE和DsbG。在体内，DsbA负责氧化两个巯基形成二硫键，DsbB则负责DsbA的再氧化。DsbC和DsbG负责校正DsbA导入的异常二硫键，DsbD则负责对DsbC和DsbG进行再还原，DsbE的功能与DsbD类似。除了直接和二硫键的形成相关外，DsbA、DsbC和DsbG都有分子伴侣功能。它们的分子伴侣功能独立于二硫键形成酶的活性并且对二硫键形成酶活性具有明显的促进作用。基于Dsb蛋白的功能特性，利用它们以大肠杆菌为宿主表达外源蛋白，特别是含有二硫键的蛋白，取得了很多成功的例子。本文简要介绍了这方面的进展，显示Dsb蛋白在促进外源蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达方面具有广阔的应用前景。  

肽合成中多对二硫键的形成策略及分析方法

二硫键的正确配对是富含二硫键多肽合成的关键。本文综述了含两对二硫键以上的多肽二硫键的形成策略，优化方法、以及二硫键配对方式的测定方法。  

蛋白质工程和蛋白质折叠

蛋白质一级结构决定着高级结构。蛋白质肽链在适宜条件下会自动卷曲形成其相应的高级结构,即自动发生蛋白质折叠,其自动发生的原因和过程仍不十分清楚,但是随着蛋白质工程的日益兴起,这些与折叠有关的问题也愈显重要,就此已有文章进行过讨论[1,2]。反之,如把新兴的蛋白质工程手段(尤其是基因定点诱变技术)应用来研究这些折叠问题,必将推动蛋白质折叠的研究。本文将就蛋白质折叠与蛋白质工程相互影响的一些例子进行讨论。