凡纳滨对虾血蓝蛋白与病原菌凝集作用靶标的鉴定

血蓝蛋白是一种具有多种非特异性免疫学活性的多功能蛋白，以前的研究发现,血蓝蛋白具有凝集活性.本研究采用凝集抑制实验和亲和蛋白质组学等方法探索凡纳滨对虾血蓝蛋白与病原菌的凝集作用靶标.结果显示，大肠杆菌K12和副溶血弧菌外膜蛋白可以抑制血蓝蛋白对7种细菌的凝集活性，其中大肠杆菌K12中2种分子质量分别为16 kD、18 kD （命名为 p16、p18）的外膜蛋白可以与血蓝蛋白发生特异性的结合，经MALDI-TOF/MS鉴定，p16、p18 分别与大肠杆菌外膜蛋白OmpC、OmpX具有高度同源性.尤其是与大肠杆菌K12野生菌株相比，血蓝蛋白对 ΔOmpX 的凝集特异性明显降低，后者仅为前者的25％.由此推测，OmpX 应为血蓝蛋白与病原菌的凝集作用靶标.     

利用大孔微载体体外制备工程化组织

组织工程从诞生至今已有二十年的历史.微载体在组织工程领域的应用研究近年来才日趋升温.利用大孔微载体Cytopore体外构建工程化微构组织.并基于其聚团特性,进行灌注再装配大组织的尝试.结果20 d内微构组织达最高细胞密度16.4×107 cells/cm3;32 d后.所形成的微构组织整体均质性好、活性高、基质生成丰富;培养后期微构组织发生明显聚团,经灌注再装配得到细胞和基质分布均匀的厘米级(12 mm×6 mm)大组织.说明利用大孔微载体构建工程化组织是一种行之有效、富有潜力的体外组织构建方案,有望构建尺寸>5 mm、细胞和基质分布均匀的大组织.为体外组织构建提供新的思路.     

长江中下游浅水湖泊沉积物多酚氧化酶与过氧化物酶活性分布

采样分析了长江中下游浅水湖泊(鲁湖、梁子湖、后官湖、牛山湖、三角湖、龙阳湖、墨水湖、月湖以及太湖)沉积物多酚氧化酶与过氧化物酶活性的分布及其与微生物的关系.结果表明,在水平方向上,沉积物有机质含量较高的湖泊酶的活性明显较高,湖内酶的活性亦有明显的异质性,排污口、水生植物凋落区以及未疏浚点的活性明显较高.在垂直方向上,有机质含量较高的表层显示较高的多酚氧化酶活性.因此,不同来源的有机质均能诱导酶的产生;过氧化物酶活性随深度变化的趋势不明显,且在疏浚与未疏浚点显示相近水平,这种现象可能源于酶与腐殖质的结合;多酚氧化酶与过氧化物酶活性显著正相关,初步揭示了二者在有机质降解与腐质化过程中的偶联;细菌和放线菌(而非真菌)似为酶的主要生产者.并讨论了氧化还原酶在湖泊富营养化过程中的作用.     

镉胁迫对拟南芥幼苗错配修复基因表达的影响

采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术研究了Cd胁迫对拟南芥(Ara-bidopsis thaliana)幼苗错配修复和增殖细胞核抗原基因表达的影响,并结合幼苗的形态和生理指标,选取Cd胁迫敏感的生物标记物.结果表明:不同浓度(0.25、0.5、1.0 mg·L1)Cd处理对拟南芥幼苗叶片数、地上部鲜质量影响不大;Cd浓度为0.25 mg·L-1时,地上部分可溶性蛋白质含量明显升高(P<0.05),Cd浓度为0.5和1.0 mg·L-1时,可溶性蛋白质含量明显降低(P<0.05);叶绿素含量随着Cd浓度的增加而微弱增加(P>0.05).Cd浓度为0.25 mg·L-1时,以18S rRNA为内参照,PCNA1、PCNA2、MSH2、MSH3、MSH6、MSH7 6个基因均出现了诱导表达,当Cd浓度增加到1.0 mg·L-1时,除了MSH6持续表达诱导及MSH3基因与对照相比表达抑制外,其他基因的表达依然出现诱导,但都低于0.5 mg·L-1Cd处理下的基因表达水平.以上结果表明,基因表达的改变可作为检测Cd污染对植物遗传毒性效应潜在有用的生物标记物.     

重组野猪α-干扰素基因的高效表达和下游工艺的研发

利用PCR方法，从东北野猪和长白猪的肌肉基因组DNA中分别扩增出一条501bp的基因片断 ，与GenBank上登载的猪α-干扰素基因序列相比,核苷酸同源性达到98.4%以上。以其中野猪α-干扰素基因片断为参考模板，经过密码子优化、5?和3?区域的mRNA二级结构优化，全基因合成得到编码野猪α-干扰素基因成熟肽的基因。克隆该基因到原核表达载体pWL之中.随后转化至宿主菌DH-5α。经过SDS-PAGE电泳检测，发酵后的重组野猪IFN-α-干扰素基因的蛋白表达量大于25%。复性纯化后的重组蛋白，经过VSV-WISH系统检测，其生物活性为4.45×106IU/mg。     

小鼠sIL1ra基因克隆与其在骨髓抑制恢复中的功能研究

目的：构建鼠分泌型白细胞介素1受体拮抗剂（sIL1ra）基因的真核表达载体，进行体内表达，并研究其在5氟尿嘧啶（5-FU）所致骨髓抑制恢复中的作用。方法：根据鼠sIL1ra基因序列设计特异引物，以RT—PCR克隆其编码序列，并构建至phCMV真核表达载体中，通过胫前肌肌肉注射、随后电击转染等方法获得了该基因在小鼠体内的高效表达，并研究了sIL1m的药效学功能。结果：体内表达sIL1ra能增加5-FU注射后小鼠外周血白细胞数以及骨髓细胞数（P〈0．05或P〈0.01）。结论：体内转染sIL1ra可以促进小鼠骨髓抑制后造血的恢复。     

Neurospora crassa phytase功能区基因phy A''的克隆表达及活性变化

目的:检测N.crassa phtase功能区基因phy A′表达的Phy A′活性变化。方法:先将N.crassa phy A′克隆到表达载体pPIC9K中,然后将获得的重组质粒pPIC9K-phy′转化到毕赤氏酵母中分泌表达,分离纯化重组酶Phy A′,并测定其酶学性质。结果:与原酶相比,N.crassa Phy A′的最适温度降低、热稳定性降低以及酶活力的降低。结论:N.crassa phtase N端的前12个氨基酸对维持该酶的功能有比较重要的作用。     

羽叶千里光不同部位提取物的抗氧化活性研究

目的:比较研究羽叶千里光根、茎、叶和花四个部位甲醇提取物的抗氧化活性.方法:采用索式提取法分别对羽叶千里光根、茎、叶和花进行甲醇提取;采用分光光度法测定提取物对二苯代苦味酰自由基(DPPH)清除能力及其在β-胡萝卜素/亚油酸体系中的抗氧化活性.结果:羽叶千里光叶甲醇提取物对DPPH的清除能力最强,其次为茎、花、根.在β-胡萝卜素/亚油酸体系中,羽叶千里光抗氧化作用强弱依次为叶、茎、根、花.结论:羽叶千里光四个部位甲醇提取物均有抗氧化活性.其中,叶甲醇提取物的抗氧化能力最强.     

血清胱抑制素和血清转化因子-β1水平在新生儿窒息中的变化及意义

目的:探究血清胱抑制素C和血清转化因子-β1在新生儿窒息中的变化及其临床意义。方法:选取2012年1月至2016年9月我院收治的窒息新生儿46例作为窒息组,将同期出生的足月健康新生儿30例作为对照组。分别检测两组新生儿入院后第1、3、7天的血清转化因子-β1(TGF-β1)、血清胱抑制素C(Cys C)、血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)及肾小球滤过率(GFR)水平的变化,并依据是否有肾功能损伤将窒息组46例新生儿分为正常组和损伤组,分析两组新生儿血清指标的变化差异。结果:入院后第1、3、7天,窒息组新生儿的TGF-β1、GFR呈现逐渐升高趋势,且均显著低于对照组(P0.05);而Cys C、BUN及Scr呈现降低趋势,且均显著高于对照组(P0.05)。肾功能损伤组的Cys C、BUN及Scr显著高于正常组,TGF-β1、GFR显著低于正常组(P0.05)。此外,损伤组的TGF-β1水平分别与血清BUN、Scr水平呈负相关关系,与GFR呈正相关关系;而血清Cys C水平分别于血清BUN、Scr呈正相关关系,与GFR呈负相关关系(P均0.05)。结论:窒息新生儿的血清TGF-β1、Cys C水平均较健康新生儿有显著性变化,并与患儿肾功能显著相关,对患儿肾功能损伤的早期诊断、病情及预后判断有一定的临床指导意义。