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去甲斑蝥素是我国自行研制的抗肿瘤药物,在临床上主要用于消化道肿瘤的治疗.实验表明,去甲斑蝥素可引起人胃癌BGC-823细胞发生 M期阻滞及细胞凋亡.进一步利用双向电泳和质谱技术,筛选出了去甲斑蝥素抑癌作用相关蛋白.研究显示,线粒体热休克蛋白CH60、线粒体ATP合酶d亚单位、内质网葡萄糖调节蛋白GRP78、线粒体Hsp70的辅助因子GRPE1、SH3L3以及染色质组装因子1小亚基RBBP4参与了去甲斑蝥素的抑癌作用.研究提示,去甲斑蝥素可能通过促进线粒体热休克蛋白及p53的表达进而激活caspase-3依赖的凋亡通路,并且去甲斑蝥素在引发内质网协迫之后,可通过抑制胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase, ERK)的活性促进肿瘤细胞的凋亡.进一步分析了去甲斑蝥素与线粒体ATP合酶抑制剂寡霉素A的联合用药对人胃癌细胞生长的影响,结果表明,联合用药的抑瘤效果比单独用药的抑瘤效果显著,提示去甲斑蝥素可能通过抑制线粒体ATP合酶功能抑制BGC-823生长.上述结果为优化去甲斑蝥素的联合用药方案提供了新线索. 相似文献
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目的:表达和纯化人组氨酸磷酸酶PHP14蛋白,并寻找与其存在体外相互作用的蛋白。方法:PCR扩增PHP14的全长cDNA,并将其克隆至pGEX4T原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione Sepharose 4B凝胶颗粒进行亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳确定融合蛋白的表达。进行GST-Pulldown实验,寻找体外与PHP14相互作用的蛋白,并进行质谱鉴定。结果:在大肠杆菌BL21中成功了表达出了PHP14的可溶性融合蛋白;经Glutathione Sepharose4B凝胶颗粒纯化后,获得了纯化的GST-PHP14融合蛋白,GST-Pulldown实验和质谱鉴定结果发现PHP14与HSP90在体外存在相互作用。结论:实现了PHP14的原核表达和纯化,发现PHP14与HSP90在体外可能存在相互作用。 相似文献
3.
钙指示剂常被用于细胞及细胞器钙信号的检测,是钙信号转导研究中必不可少的工具.目前的钙指示剂分两大类,包括化学钙指示剂,如Fura-2、Indo-1、Fluo-4等,和基因编码的钙指示蛋白如D1ER、GCaMP、CEPIA1er等.随着技术的发展及研究需求的不断提升,各版本的钙指示剂也在不断更新.本文对已有的钙指示剂进行了系统地梳理,详细介绍了目前应用最为广泛的钙指示剂,总结了现有钙指示剂的优缺点,并对可优化提升的部分进行了展望,旨在为钙指示剂研究的进一步发展提供一些思路. 相似文献
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利用超速离心沂淀及紫外分光光度测定等技术,研究了不同比例的玉米(Zea nays L.)花粉内泊前纤维蛋白对玉米(Zea mays L.)花烩肌动蛋白(前纤维蛋白与肌动蛋白摩尔数比分别为2:1,1.5:1,1:1,0.5:1,0.1:1)聚合与解聚的影响。初步实验结果显示,前纤维蛋白在各种比例下均可与Mg=ATP肌动蛋白结合并抑制肌动蛋白的聚实验条件下尚水见玻有前纤维蛋白促进植物肌动蛋白聚合的作用 相似文献
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表达PKCα反义RNA对人肺癌细胞增殖的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
运用基因重组和基因转染技术 ,将 PKCα c DNA反向插入的重组质粒 p XJ41 - CKPα导入人肺癌 LTEPa- 2细胞 .经 Northern印迹 ,Western印迹等检验 ,表明成功地建立了稳定表达 PKCα反义 RNA的人肺癌细胞 (LT· AS4) .进一步研究了表达 PKCα反义 RNA对人肺癌细胞 LTEPa-2增殖的影响 .结果表明 ,表达 PKCα反义 RNA可抑制人肺癌细胞增殖速率 ,流式细胞光度术检测 ,G1 期细胞百分数增加 ,S期细胞百分数降低 ,并进一步探讨了其作用机理 ,观察到与增殖相关基因 c- myc、Ca M和 Cyclin B1的表达水平均下降 .这可能是 PKCα表达被阻抑、负调细胞增殖的分子机理之一 相似文献
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Pup-蛋白酶体系统(Pup-proteasome system,PPS)是原核生物的一种翻译后蛋白质修饰降解体系,在去酰胺酶(deamidase of Pup,Dop)和蛋白酶体辅助因子A (proteasome accessory factorA,PafA)两种酶的作用下,原核生物类泛素蛋白(prokaryotic ubiquitin-like protein,Pup)可以标记靶蛋白,并介导靶蛋白经蛋白酶体降解。在分枝杆菌中PPS参与氧化应激、营养缺乏、热激、DNA损伤等多种应激反应,并在金属离子稳态调控、毒素-抗毒素系统(toxin-antitoxin system,TA system)的调节以及抵抗宿主免疫等过程中发挥作用。PPS与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)的持留性和致病性直接相关,因此PPS中的PafA、Dop和蛋白酶体均是抗结核药物开发的新靶点,筛选针对PPS的小分子抑制剂将成为新型抗结核药物研发的一个新途径。此外,Paf A催化的蛋白质Pup化被应用于生物技术的研发,形成了一种新的邻近标记技术——基于Pup化的邻近标记技术... 相似文献
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蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞中Ha-ras基因表达的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
运用基因转染技术,将蛋白激酶C(PKCα)cDNA正向插入的真核表达重组质粒pXJ41-PKCα,导入人正常肝细胞(L-02),经蛋白质免疫印迹等检验,表明成功构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型(LT3),用LT3和表达反义PKCα的人肝癌细胞HT6为细胞模型,通过RT-PCR,蛋白质印迹(Western blot)等分析和进一步运用自行构建的真核表达质粒prasGL3,进行荧光素酶活性检测表明:过表达PKCα可以促进L-02细胞的增殖速率,并引起Ha-ras基因转录水平上升和Ha-ras启动子活性升高;反之,表达反义PKCα的BEL-7402细胞增殖被抑制,Ha-ras基因转录水平下降,Ha-ras启动子活性降低.通过实验我们首次观察到,PKCα亚类对Ha-ras癌基因表达的影响与其对Ha-ras启动子活性的作用有关,PKCα可能参与了对Ha-ras基因表达的调控. 相似文献
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【目的】鉴定结核分枝杆菌基因组上MazF同源蛋白基因与其上游基因是否组成毒素-抗毒素系统,阐明毒素蛋白的作用机理,并初步探讨毒素-抗毒素系统在营养缺乏时的表达调控。【方法】在大肠杆菌和耻垢分枝杆菌中将MazF同源蛋白单独表达或与其对应的抗毒素蛋白共同表达,鉴定MazF同源蛋白对细菌生长的抑制作用以及其对应的抗毒素蛋白能否消除这种生长抑制;通过体外RNA切割实验,检测MazF同源蛋白是否具有RNA切割活性;检测正常生长条件下和饥饿条件下毒素-抗毒素系统的启动子活性,探讨其在应激条件下的表达调控。【结果】结核分枝杆菌MazF同源蛋白中,Rv0659c、Rv1495和Rv1942c不具有抑制细菌生长的毒素蛋白活性,Rv1991c、Rv2801c、Rv1102c和mtPemK能够抑制细菌生长,而且它们的抑制作用可以分别被其对应的抗毒素Rv1991a、Rv2801a、Rv1103c和mtPemI解除。Rv1991c、Rv2801c和Rv1102c具有RNA切割活性,mtPemK则不能切割RNA。Rv1991a-1991c和Rv2801a-2801c系统的启动子在饥饿条件下活性显著升高。【结论】结核分枝杆菌基因组上Rv1991a-1991c、Rv2801a-2801c、Rv1103c-1102c和mtPemI-mtPemK是毒素-抗毒素系统。毒素蛋白Rv1991c、Rv2801c和Rv1102c通过切割RNA发挥抑菌或杀菌活性,mtPemK具体作用机理目前还不清楚。Rv1991a-1991c和Rv2801a-2801c系统可能参与结核分枝杆菌在营养匮乏条件下的生长调控。 相似文献
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Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的生物学功能研究 总被引:4,自引:0,他引:4
Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolamine-binding protein,PEBP)家族,广泛存在于各种生物中,参与了对细胞内多种信号转导通路的调节作用。RKIP可以与Raf-1结合,从而抑制MAPK信号转导通路,并参与了对G蛋白偶联受体信号通路和NF-κB信号通路的调控。RKIP在膜的生物合成、精子发生、神经发育和细胞凋亡等生理过程中发挥重要作用,并参与了老年痴呆症及糖尿病等的病理过程。此外,近年来的研究表明RKIP是一个新的转移抑制因子,可以抑制前列腺癌、人乳腺癌和黑色素瘤细胞的转移,并已成为一个新的前列腺癌诊断标志物。 相似文献
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分化抑制因子Id在若干种癌及永生性细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
利用半定量RT PCR方法对 1 7种细胞的Id基因表达进行了检测 ,发现在CD34+阳性干细胞增殖过程中 ,Id1由不表达到适度表达 ,而Id2由中等程度表达到高表达。Id3、Id4的表达在扩增前后变化不大。说明Id1和Id2在脐带造血细胞扩增过程中可能参与作用。在 2种肺癌、2种肠癌及一种肝癌、乳腺癌细胞中Id1~Id4的表达呈现一定的规律 ,对于同一类癌细胞株其表达基本相同或相似 ,而不同类癌细胞株其表达则相差较大 ,说明对某一类细胞株 ,Id1~Id4有相对稳定的作用。实验对深入认识Id基因的作用、红白血病发生机理和治疗均有重要意义。 相似文献