苦参碱对IL-1β诱导的小鼠体外骨关节炎的作用研究

目的探讨苦参碱对IL-1β诱导小鼠软骨细胞退行性变修复作用。方法提取3～5 dC 57乳鼠软骨细胞,分为空白对照组,骨关节炎(OA)组,骨关节炎加苦参碱(OA+Mat)组,分别处理24 h后,行HE染色,观察各组小鼠的细胞形态及数量,并提取各组小鼠的总RNA,RT-qPCR反应检测炎症及软骨标志基因的表达。结果与OA组相比,OA+Mat组细胞形态与空白对照组一样良好,细胞数量与空白对照组相近,且比OA组多,炎症及软骨标志基因的表达均比OA组高(P0.05)。结论苦参碱能降低白介素1诱导的小鼠体外骨关节炎症标志基因的表达,对小鼠关节炎有治疗作用,且能上调关节炎细胞中软骨标志基因COL2a1的表达。     

十字花科黑腐病菌中甲基趋化受体蛋白的研究

趋化性是有运动能力的细菌对环境中的刺激物产生的趋向或离避行为。在细菌的趋化系统中,能够感应环境中化学物质浓度梯度的化学受体称为趋化受体。十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv. campestris, Xcc)是重要的植物病原菌,也是一种研究微生物与宿主互作机理的重要模式菌,然而关于Xcc中趋化受体的研究还较少。本研究利用生物信息学技术对Xcc8004中的21个甲基受体趋化蛋白(methyl-accepting chemotaxis proteins, MCPs)进行功能域分析并构建了系统进化树。结果表明,Xcc中MCP具有比较高的保守性。利用同源双交换法构建了MCP编码基因的缺失突变体,对这些突变体的生物学功能分析表明:21个MCP编码基因突变后,皆影响Xcc对糖类、氨基酸等趋化物的趋化性;大多数突变不影响细菌的运动性,但XC_2311、XC_2304、XC_1937、XC_2223分别突变后,影响细菌的游动性和泳动性。     

富含RNA酶大鼠腺体组织总RNA提取方法改良

为了改良传统提取富含RNA酶大鼠胰腺和腮腺组织总RNA方法,本研究将组织样本分成对照组,0.5％,1.0％和2.0％β-巯基乙醇处理组,对照组采用Trizol法提取总RNA,β-巯基乙醇处理组分别于Trizol试剂中加入0.5％,1％,2％β-巯基乙醇.测定不同处理组单链核酸含量、完整性,A260/280和A260/230;采用实时荧光定量PCR检测管家基因β-actin,GAPDH,胰腺淀粉酶AMY2和腮腺水通道蛋白AQP-5表达情况,并通过计算扩增效率,验证β-巯基乙醇是否对后续PCR实验有影响.结果表明,不同处理组单链核酸含量、A260/280,A260/230无显著差异,β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于对照组,1.0％,2.0％β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于0.5％β-巯基乙醇组,1.0％β-巯基乙醇组RNA完整性与2.0％β-巯基乙醇组无显著差异;添加1.0％β-巯基乙醇对后续PCR试验无影响.综上所述,在传统Trizol法内添加β-巯基乙醇可显著提高胰腺和腮腺组织总RNA提取质量,其中添加1.0％β-巯基乙醇是最佳提取方案.     

感染摩氏摩根菌穿山甲的收容救护及其致病性分析

目的为分析新收容救护的马来穿山甲持续性死亡及肠出血的病因,以解决临床诊断治疗的疑难问题。方法采用PCR实验技术对病死马来穿山甲的器官组织进行检测。结果不仅在患病马来穿山甲肠道内检测到摩氏摩根菌,且在其体内肺部和脾脏检测到该菌体序列。结论根据对摩氏摩根菌致病力的分析,怀疑患病马来穿山甲的死亡尤其是患肺炎、肺出血的个体可能与摩氏摩根菌感染有关,肠出血的个体可能仍合并其他病原微生物感染。     

SakA对马尔尼菲篮状菌药物应激及致病力的影响

目的探讨SakA对马尔尼菲篮状菌(Talaromyces marneffei,TM)致病力及药物应激的影响。方法构建SakA敲除株(ΔsakA),观察孢子与巨噬细胞共培养;比较野生株及ΔsakA在药物压力下的生长状况;比较野生株和ΔsakA分别感染小鼠的死亡率、菌载量。结果被巨噬细胞吞噬24h后,野生株在胞内可见腊肠样酵母细胞,而ΔsakA以孢子形态存在。ΔsakA共培养裂解物形成的菌落数少于野生株。与野生株比较,ΔsakA对棘白霉素类药物更敏感。ΔsakA感染小鼠死亡率、菌载量较野生株明显降低。结论 SakA与TM酵母相对棘白霉素不敏感相关,在其致病过程中发挥重要作用。     

2011—2015年武鸣县手足口病流行特征分析

目的分析武鸣县2011—2015年手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)流行病学特征,为武鸣县HFMD的预防和控制提供依据。方法收集并整理中国疾病监测信息报告管理系统中武鸣县2011—2015年HFMD病例资料,采用描述流行病学方法,对其流行病学特征进行分析。结果 2011—2015年,武鸣县共报告HFMD病例17 961例,发病率为648.42/10万,呈隔年高发。各月均有HFMD病例报告,报告病例数呈"双高峰"型,分别为4—6月7 308例(占40.69%),9—10月5 043例(占28.08%);报告病例最多的地区为武鸣县城4 266例,占总报告病例数的23.75%,高于其他乡镇;男性多于女性,男女性别比为1.51∶1;以<4岁儿童为主,占86.40%,其中散居儿童11 527例(占64.18%)。结论武鸣县HFMD具有发病率高、流行季节明显,以4岁以下散居儿童为主的流行病学特征;需加强重点地区、重点人群及HFMD病原学的监测。     

不同固定液对体外细胞系荧光蛋白淬灭及对胞内蛋白荧光染色的影响

目的:比较不同细胞固定液对荧光蛋白淬灭情况以及核内、胞浆蛋白免疫荧光染色的影响。方法:分别对融合了RFP和GFP基因的鼻咽癌HK1细胞采用95%乙醇、75%乙醇、甲醇、丙酮:甲醇=1:1、5%冰乙酸、Carnoy固定液进行固定,然后采用免疫荧光法对细胞进行免疫染色。结果:六种固定液均能使荧光蛋白猝灭。免疫荧光染色方面,对于核蛋白染色,75%乙醇、95%乙醇、丙酮:甲醇=1:1、Carnoy固定液固定后核区获得明显的荧光染色,而采用甲醇、5%冰乙酸固定后荧光染色不明显。对于胞质蛋白染色,按荧光染色的清晰程度分为固定于Carnoy固定液丙酮:甲醇=1:1甲醇5%冰乙酸75%乙醇95%乙醇,前四者固定可见分布于胞质,75%乙醇或95%乙醇固定的目标蛋白定位不清。结论:六种不同的固定液在有效失活荧光蛋白的情况下对核蛋白及胞浆蛋白抗原性的影响略有不同,可根据研究目的蛋白表达的部位及特点来选用合适的固定液。     

人类免疫缺陷病毒解剖学病毒储存库与检测方法的研究进展

由于人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)储存库的存在,获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)患者即便接受高效抗反转录病毒治疗也无法完全清除体内的潜伏病毒。本文就HIV在人体内可能存在的解剖学储存库、病毒储存库及检测方法进行综述,以增进参与AIDS防治的工作人员对HIV储存库在人体内研究进展的了解。     

广西人类免疫缺陷病毒感染者/艾滋病患者合并马尔尼菲篮状菌感染的特征及Mp1p抗原快速筛检的研究

为调查广西人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者/艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)患者合并马尔尼菲篮状菌(Talaromyces marneffei,TM)感染的特征并评价TM Mp1p(一种甘露糖蛋白)抗原试剂盒(酶联免疫吸附试验)的临床检测效果,本研究收集广西壮族自治区柳州市人民医院2018年8月-2019年6月确诊的200例HIV感染者/AIDS患者的信息并采集其血浆和咽拭子,获得血浆样本118份、咽拭子样本111份,用TM抗原试剂盒检测,并与病原学培养结果进行比较。结果显示,200例HIV感染者/AIDS患者中TM总体感染率为10%,且CD4^＋T细胞计数越低者TM感染率越高, CD4^＋T细胞≤50/μL时TM感染率高达29%。差异性分析显示,与HIV-1感染者相比,20例HIV-1合并TM感染者的CD4^＋T细胞、淋巴细胞、血红蛋白、白蛋白、血小板水平下降,差异有统计学意义(P<0.001),门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、AST/丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和D-二聚体升高,差异有统计学意义(P<0.05)。以病原学培养结果为金标准,TM抗原试剂盒检测118份血浆样本的灵敏度为80%(95% CI：51.1～94.7),特异度为97.1%(95% CI：91.1～99.2),检测111例咽拭子样本的灵敏度为41.7% (95% CI：16.5～71.4),特异度为100%(95% CI：0.95～1)。结果表明,TM抗原试剂盒检测血浆样本的灵敏度良好,特异度高,适合临床TM感染的筛检。因此,对CD4^＋T细胞计数低的HIV感染者/AIDS患者应及早进行Mp1p抗原快速筛检,做到早发现、早治疗,从而降低TM感染的发病率和死亡率。     

富含RNA酶大鼠腺体组织总RNA提取方法改良

为了改良传统提取富含RNA酶大鼠胰腺和腮腺组织总RNA方法,本研究将组织样本分成对照组,0.5％,1.0％和2.0％β-巯基乙醇处理组,对照组采用Trizol法提取总RNA,β-巯基乙醇处理组分别于Trizol试剂中加入0.5％,1％,2％β-巯基乙醇.测定不同处理组单链核酸含量、完整性,A260/280和A260/230;采用实时荧光定量PCR检测管家基因β-actin,GAPDH,胰腺淀粉酶AMY2和腮腺水通道蛋白AQP-5表达情况,并通过计算扩增效率,验证β-巯基乙醇是否对后续PCR实验有影响.结果表明,不同处理组单链核酸含量、A260/280,A260/230无显著差异,β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于对照组,1.0％,2.0％β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于0.5％β-巯基乙醇组,1.0％β-巯基乙醇组RNA完整性与2.0％β-巯基乙醇组无显著差异;添加1.0％β-巯基乙醇对后续PCR试验无影响.综上所述,在传统Trizol法内添加β-巯基乙醇可显著提高胰腺和腮腺组织总RNA提取质量,其中添加1.0％β-巯基乙醇是最佳提取方案.