可用于微生物群落分子生态学研究的活性污泥总DNA提取方法研究

活性污泥样品经液氮速冻、沸水浴融化、溶菌酶处理和 SDS裂解后 ,99%以上细胞裂解。所提取的 DNA经琼脂糖凝胶电泳检测和荧光法浓度测定 ,其片断大小在 2 0 kb左右 ,产量可达 1 .75 6± 0 .1 mg/g MLSS。样品 ABS2 6 0 nm/ABS2 80 nm的比值为 1 .96± 0 .2。以提取的总 DNA为模板 ,进行细菌核糖体小亚基 1 6Sr DNA基因 V3区和多组分苯酚羟化酶大亚基基因 (Lm PHs)的 PCR扩增 ,均获得成功 ,为活性污泥中微生物群落的分子生态学研究提供了一种简便、可靠的 DNA提取方法。     

细菌Ⅲ型分泌系统

1 .细菌分泌机制概述致病细菌和宿主细胞相互作用的特点是将致病因子定位到细菌表面或分泌到胞外。虽然其分泌的细菌蛋白质数量和种类都很多且具有范围很广的作用 (包括蛋白质水解、溶血、细胞毒性、蛋白质的磷酸化和去磷酸化 ) ,但是只存在几种途径把这些蛋白质从细菌的细胞质运输到胞外。在革兰氏阴性细菌中已发现四种蛋白质分泌途径 ,称为Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ型分泌机制。另外 ,第五种大分子分泌途径和质粒的接合转移有关。根癌农杆菌Ｔ ＤＮＡ的转移 ,百日咳杆菌毒素的分泌 ,称之为Ｖ型分泌 ,这方面的研究很少[1] 。ＩＩ型和ＩＶ型是…     

大肠杆菌MG1655菌株ERIC-PCR图谱主带序列组成分析*

ERIC PCR已经在细菌分类、鉴定及混合菌群分析中得到广泛应用 ,但对其产物形成规律的认识仍存在分歧。以大肠杆菌MG1 655为对象 ,对其ERIC PCR指纹图谱中 1 1kb主带中的DNA片段进行了克隆、测序、基因组定位以及引物匹配分析。结果表明 ,这条1 1kb主带由分布在基因组中不同位置的 3种序列不同的片段组成 ,各片段的丰度差异较大 ,最高为 97 89% ;3种片段中的 2种所在的基因组区域仅一端含有ERIC序列。推测对含有ERIC序列的基因组DNA进行扩增时 ,ERIC PCR是一种非随     

第一类肽链释放因子研究进展

第一类释放因子是新生肽链释放所必需的因子,它能正确地识别终止信号,水解肽酰-tRNA酯键,释放出新合成的多肽链.它的高级结构与tRNA结构相似,从而解释了它们功能上的相似性,其氨基酸序列的高度保守区GGQ motif和三肽反密码子区在新生肽链的释放中分别执行重要的功能.     

细胞凋亡过程中的蛋白水解酶

细胞凋亡过程中的蛋白水解酶李卓玉袁静明（山西大学生物工程实验室,太原０３０００６）关键词细胞凋亡蛋白水解酶细胞凋亡是一种主动清除无用或有害细胞的细胞消亡过程,有一些蛋白水解酶参与其事,下面予以简介：１．ＩＣＥＩＣＥ即白介素－１β－转换酶（ｉｎｔｅｒｌ...     

TGGE分析焦化废水处理系统活性污泥细菌种群动态变化及多样性

应用TGGE指纹图谱技术对两个曝气池细菌种群的动态变化及多样性进行了研究。每3d进行1次,共8个监测时期中同一曝气池活性污泥的16SrDNAV3-PCRTGGE指纹图谱基本一致,图谱间的相似性系数(Cs)为100％。同一曝气池不同位点活性污泥的TGGE指纹图谱也完全一致。功能不同曝气池活性污泥TGGE指纹图谱存在差异,Cs为83．3％。对TJ1活性污泥TGGE图谱中9条主要条带回收、扩增、克隆建库,每个条带选4个转化子进行序列分析,结果显示TGGE条带是由序列不同的片段组成。32个序列在97％的相似性下分成16个分类操作单元(OTU),14个OTU与GenBank中已登录的细菌种群的同源性≥97％,2个OTU的同源性为95％和94％。与10个OTU同源性较高的细菌类群是在活性污泥或污染环境分离或发现的,与8个OTU相似的细菌类群目前尚无法分离培养。     

一种筛选拟南芥突变体的有效方法

经甲基磺酸乙酯（EMS）诱变处理的拟南芥种子,接种于MS培养基上,垂直放置培养4天后,将幼苗转移至胁迫培养基中,以倒置幼苗180°所形成的弯曲生长根作为指标筛选拟南芥耐营养胁迫突变体。利用这种方法,成功地筛选到一个耐低钾的隐性单基因拟南芥突变体。本方法同样适用于其他类型突变体的筛选。 Abstract：his paper introduces a root-bending assay for isol ation of Arabidopsis mutants tolerant to nutrition stress. Seeds of wild-ty pe Arabidopsis thaliana (ecotype Landersberg erecta) were mutagenized wi th ethyl methyl sulfide (EMS),and M2 populations were screened for mutants. Fo ur-day-old seedlings with 1-to 1.5-cm-long roots were transferred from the vertical agar plates onto to a second agar medium that was supplemented with det erminate stress. The seedlings were arranged in rows, and the plates were orient ed vertically with the roots pointing upward. After another 4 days, the root be nding seedlings were selected for putative mutants and transferred to soil to gr ow to maturity.Seeds from the putative mutants were screened again to determine the true mutants.By using this root-bending assay we have isolated a low-K+-tolerant (lkt1) mutant which is caused by single recessive nuclear mutation. F or lkt1 mutant screening,K+concentration of the medium was 100μmol/L because root growth of wild type seedlings was completely inhibited at or below this con centration.This root-bending assay is also applicable to other type of Arabid opsis mutant isolation.     

大肠杆菌MG1655菌株ERIC-PCR图谱主带序列组成分析

ERIC-PCR已经在细菌分类,鉴定及混合菌群分析中得到广泛应用,但对其产物形成规律的认识仍存在分歧,以大肠杆菌MG1655为对象,对其ERIC-PCR指纹图谱中1.1kb主带中的DNA片段进行了克隆,测序,基因组定位以及引物匹配分析。结果表明,这条1.1kb主带由分布在基因组中不同位置的3种序列不同的片段组成,各片段的丰度差异较大,最高为97.89%;3种片段中的2种所在的基因组区域仅一端含有ERIC序列,推测对含有ERIC序列的基因组DNA进行扩增时,ERIC-PCR是一种非随机扩增。     

软腐欧氏杆菌的Ⅲ型分泌系统对harpin蛋白的识别与分泌

本文研究软腐欧氏杆菌分泌致病蛋白的Ⅲ型分泌系统的组分是否能识别梨火疫欧氏杆菌存在于mRNA上的分泌识别信号。用PCR的方法,将带有上游75bp可以在其mRNA的5′端形成一个典型的作为Ⅲ型分泌识别信号的茎环结构的梨火疫欧氏杆菌的诱导植物过敏反应的harpin的基因hrpN,从带有hrp基因簇的质粒pCPP430上克隆到pGEM\|T载体上,获得重组质粒pWGF1,经化学法转化到hrpN基因的转座突变体DH5α(pCPP430hrpN-)中,同时将pWGF1电击转化到胡萝卜软腐欧氏杆菌Se9R中,转化子的无细胞抽提物(CFEP)经Western\|blot检测到harpin蛋白已被表达;带有双重质粒的DH5α(pCPP430hrpN-/pWGF1)在番茄植物上可以引起过敏反应,Se9R(pWGF1)在大白菜上的致病力明显低于Se9R,初步表明一种植物病菌的harpin蛋白可被另外一种病菌的Ⅲ型分泌系统所识别、分泌并保持生物活性。     

生物产氢研究与进展

就生物产氢的发展、现状及存在的问题、产氢机制等作了较为详细的综述 ,对其发展趋势和应用前景也进行了评述。