丹参转录因子基因SmMYCamiRNA表达载体的构建及其对丹参的转化

丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）为我国传统中药,其活性成分的药理作用广泛,尤其在防治心血管病药物中具有重要作用。丹参水溶性酚酸类物质合成途径由苯丙烷代谢和酪氨酸代谢共同参与而成。转录因子对植物次生代谢起着十分重要的调节作用。我们前期测序结果显示,SmMyc是一个丹参bHLH类转录因子,可能参与丹参酚酸类化合物生物合成的调控。本研究利用拟南芥miRNA319前体为模板骨架,通过over-lappingPCR技术构建旨在能对SmMYC进行特异性沉默的at-tificalmiRNA（amiRNA）植物表达载体,命名为pCambial302-amiR-SmMYC,并通过农杆菌介导的遗传转化方法将其导入丹参。Real．timePCR结果显示,所得转化阳性株系SmMYC的mRNA水平均呈现不同程度的下降,同时酚酸类代谢途径中相关酶基因的表达也表现为相应程度的下调;福林酚法检测结果显示,转化株系中总酚酸含量均低于同期的野生型丹参。以上实验结果初步显示丹参SmMYC可能作为一个重要的转录因子参与酚酸类活性物质的代谢调控,同时为进一步研究SmMYC4丹参酚酸类化合物生物合成中的调控功能奠定了基础。     

秦巴山区竹子上的瘿螨三新种记述(蜱螨亚纲,瘿螨总科,瘿螨科)

记述了采自陕西秦巴山区竹子上的瘿螨科3新种:纹股新波羽瘿螨Neocymoptus ornapodus sp.nov.,寄主慈竹Neosinocalamus affinis (Rendle) Keng;刚竹背槽瘿螨Aculochetus phyllostacher sp.nov.,寄主刚竹属Phyllostachys sp.;尖嘴四瘿螨Tetra spicrostrae sp.nov.,寄主刚竹属Phyllostachys sp..     

高羊茅FaChit1基因cDNA克隆及诱导表达

应用简并RT-PCR及RACE技术,从高羊茅中克隆了1个Ⅰ类几丁质酶基因cDNA全长序列,命名为FaChit1.结果表明,该cDNA具有1个951 bp的完整编码框,编码316个氨基酸,其编码产物和其它植物的Ⅰ类几丁质酶在氨基酸序列上具有较高的同源性,包含典型的几丁质结合区、催化区以及脯氨酸、半胱氨酸富集的铰链区,但缺少定位到植物液泡所必须的C末端延伸区靶向信号.Northern杂交显示,FaChit1对真菌激发子有较强的响应,乙烯和干旱胁迫均能有效诱导FaChit1基因的表达,而对机械损伤处理的反应比较微弱,只在叶片中积累少量的mRNA.     

中国蜡梅上的瘿螨二新种(蜱螨亚纲,瘿螨总科)

记述寄生在蜡梅Chimonanthus praecox(Linn.)Link.(蜡梅科Calycanthaceae)叶子上的瘿螨2新种:蜡梅离子瘿螨Leipothrix chimonae sp.nov.和蜡梅双羽爪瘿螨Diptacus praecoxsp.nov.。模式标本保存在河北大学博物馆。蜡梅离子瘿螨,新种Leipothrix chimonae sp.nov.(图1～5)正模♀,副模:25♀♀,2♂♂,2009-06-01,陕西省岚皋县蜡烛村,海拔600m,谢满超采。寄主为蜡梅Chimonanthuspraecox(Linn.)Link.(蜡梅科Calycanthaceae)。新种与悬钩子离子瘿螨Leipothrix yipingae Shi,2000相似,但新种背盾板具背中线,雌生殖盖片基部具纵线,端部饰有斜线,羽状爪3支,而悬钩子离子瘿螨L.yipingae背盾板上无背中线,雌生殖盖片饰有短线和粒点,羽状爪4支。蜡梅双羽爪瘿螨,新种Diptacus praecox sp.nov.(图6～12)正模♀,副模:8♀♀,7♂♂,2009-06-01,陕西省岚皋县蜡烛村,海拔600m,谢满超采。寄主为蜡梅Chimonanthuspraecox(Linn.)Link.(蜡梅科Calycanthaceae)。新种与臭樱双羽爪瘿螨Diptacus maddenis Song,Xue etHong,2007相似,但新种足Ⅰ基节间具胸线,基节饰有线条和粒点,雌生殖器盖片上饰有1排纵肋,而臭樱双羽爪瘿螨D.maddenis足Ⅰ基节间无胸线,基节饰有粒点,雌生殖器盖片基部饰有粒点。     

细胞视黄酸结合蛋白与肿瘤相关研究

细胞视黄酸结合蛋白(CRABP)在细胞质介导视黄酸与细胞核上视黄酸核受体之间互相作用,同时促进视黄酸代谢酶类的活性,增强视黄酸的转化速率。在脊椎动物细胞中,CRABP包含两种高度同源蛋白质:CRABP1和CRABP2。CRABP属于低分子量的蛋白质,种属间高度保守。现有研究表明在许多肿瘤中存在CRABP基因异常甲基化,基因表达水平较正常组织有差别;CRABP基因异常甲基化与部分肿瘤患者低生存率存在相关性,CRABP基因可以成为常见的肿瘤诊断以及判断预后的分子靶标。     

高羊茅FaChit1基因启动子的功能分析

用含有不同长度FaChitl基因启动子区域与GUS基因融合构建植物表达载体pFaChitlP—I、pFaChitlP-Ⅱ以及pFaChitlP-Ⅲ并分别对烟草进行转化,经真菌激发子、干旱、机械损伤以及乙烯等多种胁迫处理后测定GUS活性。启动子缺失分析实验结果显示,真菌激发子对FaChitl基因启动子所介导的GUS诱导表达效果最强,而机械损伤只能微弱地诱导GL靥基因表达;FaChitl基因启动子-651bp以内的序列均能介导GUS基因的诱导表达,同时-935bp与-233bp之间的区域是该启动子响应真菌激发子、乙烯以及机械损伤胁迫所必需的。表明FaChitl启动子是一个多胁迫诱导型启动子。     

高羊茅FaChit1基因组DNA的克隆及其拷贝数的验定

以获得的高羊茅FaChit1基因cDNA设计引物扩增其基因组DNA,序列比对发现该基因内不存在内含子.进一步采用染色体步移方法分离FaChit1基因上游的一段935 bp启动子序列以及下游的一段470 bp 3′非翻译区序列发现,在该启动子区域内不仅含有保守的TATA盒和CAAT盒,而且包含多个潜在的与胁迫应答有关的顺式调控元件,表明该启动子可能是1个多胁迫诱导型启动子.此外,在FaChit1 3′非翻译区含有真核生物基因中高度保守的特征序列.Southern杂交结果表明,FaChit1在高羊茅基因组中有2个拷贝.     

26年长期施肥对土壤微生物量碳、氮及土壤呼吸的影响

研究长期小麦连作施肥条件下土壤微生物量碳、氮,土壤呼吸的变化及其与土壤养分的相关性。以陕西长武长期定位试验为平台,应用氯仿熏蒸-K2SO4提取法、碱液吸收法和化学分析法分析了长达26a不同施肥处理农田土壤微生物量碳、微生物量氮和土壤呼吸之间的差异及其调控土壤肥力的作用。长期施肥及种植作物,均能提高土壤微生物量碳、氮含量,尤其是施用有机肥,土壤微生物量碳、氮含量高于单施无机肥的处理,土壤呼吸量也提高15.91%—75.73%,而施用无机肥对于土壤呼吸无促进作用。土壤微生物生物量碳氮、土壤呼吸与土壤有机质、全氮呈极显著相关。长期有机无机肥配施可以提高土壤微生物量碳氮、土壤呼吸,氮磷肥与厩肥配施对提高土壤肥力效果最好。微生物量碳氮及土壤呼吸可以反映土壤质量的变化,作为评价土壤肥力的生物学指标。     

荩草上的瘿螨2新种记述（瘿螨总科，瘿螨科，叶刺瘿螨亚科）

记述在草Arthraxon hispidus （Thunb.） Makino（禾本科Poaceae）上发现的营自由生活的2种新瘿螨：草畸瘿螨Abacarus arthraxis sp. nov.和草花刺瘿螨Anthocoptes hispidus sp. nov.,二者均采自陕西秦岭山中。模式标本保存在安康学院农学与生命科学学院植物保护实验室。     

基于烟草瞬时表达体系对amiRNA沉默效果快速有效的预验证

amiRNA(artificial microRNA)作为一种诱导基因发生特异性沉默的技术已在多种植物中应用,但设计出的不同amiRNAs在所转化株系中的沉默效率难以预测,因此对amiRNA载体的沉默效率进行预验证是非常必要的。本实验以丹参(Salvia miltiorrhiza)的1个MYB类转录因子基因SmPAP1的mRNA序列为amiRNA作用对象,并挑选2个经在线软件WMD3(Web MicroRNA Designer)设计的amiRNAs,分别命名为amiRNA1-SmPAP1和amiRNA2-SmPAP1,然后通过农杆菌介导将构建的2个amiRNA载体和SmPAP1过表达植物载体在烟草叶片细胞中进行瞬时共表达。结果显示,amiRNA2的表达丰度约是amiRNA1的2倍;amiRNA2对靶标SmPAP1的沉默效率约是amiRNA1的2.5倍;SmPAP1在mRNA和蛋白水平上均与相应amiRNA的表达水平呈显著负相关。因此,amiRNA在烟草细胞中的瞬时表达可快速、有效地对不同amiRNA沉默效果进行预验证,从而为后续的植物遗传转化研究提供重要参考。