仿刺参多糖抗肿瘤及对荷瘤小鼠免疫调节作用

目的 观察仿刺参多糖(AJPS)抗肿瘤及免疫调节作用.方法 采用MTT法检测AJPS对人肝癌HepG-2细胞抑制率;以Hca-F肝癌小鼠为模型,采用MTT法、放免法测定荷瘤小鼠细胞免疫指标.结果 AJPS抑制HepG-2细胞生长,抑制小鼠移植瘤生长;增强脾淋巴细胞和巨噬细胞活性,促进TNF-α和IL-2的产生.结论 AJPS具有对HepG-2细胞的直接杀伤作用;AJPS对荷瘤小鼠有免疫调节活性,在肿瘤的免疫治疗中发挥作用.     

海参i型溶菌酶基因及其编码产物的结构特点

通过RT-PCR 和 RACE PCR技术,从海参(Stichopus japonicus)体壁中克隆得到一种溶菌酶基因(GenBank：EF036468).生物信息软件分析表明,其中全长cDNA为 713 bp,5′非编码区（UTR）246 bp,3′UTR 29 bp,开放阅读框438 bp,编码145个氨基酸,包括溶菌酶成熟肽124个氨基酸和信号肽21个氨基酸.对海参溶菌酶与多种无脊椎动物的c、g和i型溶菌酶进行分析比较,发现它与i型溶菌酶有较高的同源性,并具有i型溶菌酶高度保守的2个活性位点,即Glu34和Ser50.活性位点附近具有i型溶菌酶的一段特有的氨基酸保守序列MDVGSLSCG(P/Y)(Y/F)QIK,所以推断克隆的海参溶菌酶为i型.另外,通过搜索蛋白保守结构域数据库,发现海参溶菌酶与医用水蛭失稳酶相似性最高,并且这2个酶的三级结构模型也极其相似.因此推测,海参i型溶菌酶具有双功能特性,既能作用于细菌细胞壁的糖苷键使细胞裂解,又具有失稳酶的一些生化功能,能够水解纤维蛋白,这些特点在海参自溶过程中发挥重要的作用.     

TCA循环中间产物对酿酒酵母胞内代谢关键酶活性的影响

对酿酒酵母在添加苹果酸、柠檬酸和琥珀酸的混合培养基与其在YEPD培养基中胞内丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶的酶活力差异进行了对比分析。结果表明:添加苹果酸使胞内丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶的酶活分别下降34.82%、57.23%、39.15%、12.10%;添加柠檬酸使胞内丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶的酶活分别下降50.17%、42.20%、48.40%;添加琥珀酸使胞内丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶的酶活分别下降34.16%、34.16%、50.87%、50.87%、12.37%。丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶对3种有机酸的耐受性较差,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、乙醇脱氢酶对3种有机酸的耐受具有选择性。     

黄芪原生质体分离技术

以黄芪叶片和愈伤组织为材料,对黄芪原生质体的制备分离技术进行了研究。结果表明:采用黄芪叶片制备原生质体远远优于黄芪愈伤组织,能够获得大量高活力的原生质体;采用2%纤维素酶+0.5%半纤维素酶+0.5%果胶酶的混合酶水解12h就能达到较好的分离效果,获得高质量的黄芪原生质体,然后进行原生质体的培养。     

一种源自人α-2-巨球蛋白的抗菌肽A2M3及其对金黄色葡萄球菌的抑菌机制

【目的】在人的鼻腔中鉴定出一种源自α-2-巨球蛋白的抗菌肽(命名为A2M3),并探究其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌作用和机制。【方法】结合生物信息学技术对人类鼻液的质谱结果进行分析,并筛选潜在抗菌肽;通过微量稀释法和平板涂布法分别分析A2M3对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)和时间杀伤曲线(time-kill curve);采用透射电镜、碘化丙锭(propidium iodide, PI)摄取实验、流式细胞术和核酸蛋白质泄露实验分析A2M3对金黄色葡萄球菌膜完整性、膜通透性的影响;通过凝胶阻滞实验和荧光光谱实验探究A2M3对金黄色葡萄球菌基因组DNA的影响。【结果】利用生物信息学技术筛选出源自α-2-巨球蛋白的潜在抗菌肽A2M3,其对金黄色葡萄球菌的MIC为125.0 μg/mL,且能在3 h内完全杀灭细菌。A2M3通过增加细胞膜的通透性,促使核酸和蛋白质泄漏,继而穿过细胞膜嵌入DNA的碱基对,影响细菌的基因功能,从而导致菌体死亡。【结论】A2M3对金黄色葡萄球菌的抑菌机制涉及多靶点协同作用,能够改变细菌细胞膜的通透性,影响细菌的基因功能。这一发现揭示了从人体体液中筛选和分离抗菌功能肽的潜在应用价值。     

高等植物纤维素合酶超家族

从1996年第一个植物纤维素合酶基因的鉴定,人们对植物体内纤维素合成的研究已经走过了10年的历程。10多年中,人们取得了很大的成果,也有很多问题有待解决。该文主要介绍拟南芥和毛果杨基因组中的纤维素合酶超家族。     

特异的中草药配糖体苷酶微生物及其发酵与酶学特性

配糖体是中草药主要有效成分之一。但是中草药成分并不是活性最佳结构,中草药口服后其成分在消化系统酶和微生物的作用下,转化为另一种结构吸收、起药效;但是体内的这种转化甚微,往往受到人的个体条件的影响。如果这种体内的转化反应在体外实现,中草药成分酶转化为高活性成分,将对创新药、中医药、公众营养食品和保健食品、功能化妆品等意义很大。为此,以下主要介绍本实验室研究过的中草药配糖体苷酶新微生物筛选、分类鉴定,特异的中草药配糖体苷酶的发酵产酶和其酶学特性。     

低温植酸酶菌株Y1的发酵条件研究

目的:提高低温植酸酶产量.方法:通过单因素和正交实验研究温度、pH、发酵时间、接种量、装液量对菌株Y1的发酵影响.结果:最适发酵条件为温度15℃,pH 5.0,发酵时间24h,接种量10%,装液量200ml/500ml.其最终酶活力达到了162.39U/mL.结论:经单因素和正交实验研究后其低温植酸酶酶活力比优化前提高了29.43%.     

海刺参i型溶菌酶基因的重组表达及抑菌谱分析

将本实验室已分离到的海刺参 (Stichopus japonicus) i型溶菌酶的基因(GenBank Accession No. EF036468)亚克隆进原核表达载体pET32a(+)中, 构建重组质粒pET32a(+)-SjLys, 转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS。阳性克隆子经诱导表达、亲和纯化和透析复性, 得到了酶活力为19.2 U/mg的重组SjLys (rSjLys), 并对rSjLys进行了抑菌谱测定。结果表明, rSjLys对革兰氏阳性菌和阴性菌均有抑制作用, 尤其对常见的海洋致病菌副溶血弧菌和铜绿假单胞菌具有很强的抑菌活性。更为显著的结果是, rSjLys经100oC、40 min加热处理后, 失活的rSjLys对革兰氏阳性菌和阴性菌的抑菌能力高于rSjLys的9%~25%。上述结果表明, 海刺参溶菌酶是一种具有糖苷酶活性和非酶抑菌活性的特殊的i型溶菌酶, 且具有很广的抑菌活性, 在海刺参机体先天免疫系统中是一个重要的效应分子。     

添加黄芩对灵芝发酵液中酪氨酸酶抑制剂活性的影响

本文以酪氨酸酶抑制率为指标,对添加黄芩的灵芝液体发酵培养基进行优化并考察其发酵过程.结合正交实验和响应面分析,优化的培养基组成为(g/L):黄芩 6.3,麸皮12.0,蛋白胨6.0,玉米粉 15.6,葡萄糖 6.86,豆饼粉11.3.在此条件下,发酵产物的酪氨酸酶抑制率理论最大值为52.87%.磷酸二氢钾的最适添加浓度为1.5 g/L,而硫酸镁添加后,酪氨酸酶抑制率持续降低,呈现出负效应.添加黄芩的灵芝发酵过程中pH变化较未添加黄芩时缓和;灵芝发酵液的酪氨酸酶抑制活性显著提高,酪氨酸酶抑制剂的产生与细胞的生长呈现部分偶联型.