鱼源无乳链球菌的血清型及分子分型研究

为了解不同鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)分子分型特征, 分析菌株之间的相关性和同源性, 研究在采用S. agalactiae特异性cfb基因对分离菌株鉴定的基础上, 对26株不同鱼源S. agalactiae进行了荚膜多糖血清型(CPS)多重PCR鉴定, 同时采用多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子特征比较与同源性分析。结果显示, 26株菌CPS型存在Ia (n=22)和III型(n=4)两种类型, 其中黄河裸裂尻鱼源和罗非鱼源菌株均为Ia血清型, 齐口裂腹鱼源菌株存在Ia (n=2)和III (n=4)型两种CPS型; 多位点序列分型共得到3种STs序列型(ST-891、ST-103、ST-19), 其中黄河裸裂尻鱼源和罗非鱼源菌株均为新的序列型ST-891, 齐口裂腹鱼源菌株存在ST-103和ST-19两种STs型; PFGE聚类分析可分为16个PFGE谱型(A-P), 其中优势带型为P型(n=9)。相同荚膜多糖血清型—MLST分型菌株在PFGE带型中呈现高度聚集。CPS分型与MLST分型、PFGE分型有很好的相关性, 而CPS型、STs序列型、PFGE带型与宿主的来源没有明显的相关性。不同鱼源S. agalactiae分子特征的相似性, 提示其存在交叉感染的可能性, 而齐口裂腹鱼源S. agalactiae分子特征的多样性, 提示其存在遗传变异的情况。     

香菇多糖对幼建鲤免疫指标的影响

在基础饲料中添加0 g/kg、0.8 g/kg、1.2 g/kg、1.6 g/kg、2.0 g/kg、2.4 g/kg饲料的香菇多糖,连续饲喂幼建鲤Cyprinus carpio var.Jian 49 d后,检测香菇多糖对幼建鲤红细胞、白细胞数量及白细胞杀菌指数、血清溶菌酶活性、血清SOD活性及IgM含量的影响。结果表明,试验第49 d时,不同添加剂量的香菇多糖对各组实验鱼白细胞、红细胞数量影响不大,与对照组无显著差异(P>0.05)。在饲料中添加不同剂量香菇多糖后对幼建鲤白细胞杀菌指数、血清溶菌酶活性、血清SOD活性及IgM含量有不同程度影响。试验期间,0.8 g/kg、1.2 g/kg、1.6 g/kg、2.0 g/kg和2.4 g/kg组试验幼建鲤白细胞杀菌活性比对照组明显增强,差异极显著(P<0.01);血清溶菌酶活性逐渐升高,1.6 g/kg、2.0 g/kg和2.4 g/kg组极显著高于对照组和0.8 g/kg组(P<0.01),当香菇多糖添加量增加到1.6 g/kg时,对血清溶菌酶活力增加不显著(P>0.05)。在饲料中添加不同剂量香菇多糖后对幼建鲤血清SOD活性有不同程度影响。2.0 g/kg添加组对SOD增加明显,与对照组、0.8 g/kg、1.2 g/kg组差异极显著(P<0.01),与2.4 g/kg组差异显著(P<0.05)。试验期间,0.8 g/kg、1.2 g/kg、1.6 g/kg、2.0 g/kg和2.4 g/kg组试验幼建鲤血清IgM含量变化与对照组相比变化不明显,各组间差异不显著(P>0.05)。     

鮰爱德华氏菌外膜微孔蛋白N基因PCR快速检测方法的建立

根据Gen Bank中鮰爱德华氏菌Edwardsiella ictaluri外膜微孔蛋白N(porin N)基因序列(Gen Bank No:NC_012779.2)设计了1对引物,预计目的片段大小为381 bp。通过对反应体系和条件的优化,并进行特异性试验、敏感性试验及人工感染组织样品检测,建立了一种快速检测鮰爱德华氏菌的PCR方法。结果表明,在所检测的鮰爱德华氏菌、迟缓爱德华氏菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、杀鲑气单胞菌、豚鼠气单胞菌、嗜麦芽寡养单胞菌、鲁氏耶尔森氏菌、海豚链球菌、不动杆菌、产气肠杆菌、大肠杆菌、拟态弧菌、荧光假单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌15种细菌中仅鮰爱德华氏菌扩增出特异性条带;敏感性试验结果显示,该方法最小核酸检出量为9.35×10-3ng·μL-1;同时对人工感染的病料肝脏、细菌基因组DNA、细菌菌液及菌落进行扩增,结果显示4种材料均能检测出大小为381 bp的基因片段。本研究所建立的方法特异强、灵敏度高,适用于鮰爱德华氏菌感染病例的高效、快速检测。     

大口黑鲈外周血细胞显微结构、细胞化学特征及吞噬作用的研究

通过对大口黑鲈外周血细胞的显微结构及细胞化学染色特征和吞噬作用的研究,为大口黑鲈免疫学研究积累资料。Wright's染色表明:大口黑鲈外周血细胞分为红细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血栓细胞,其中粒细胞又分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。外周血中成熟红细胞最多,占血细胞总数的98.12%,其次为淋巴细胞和血栓细胞,占白细胞中的比例分别为60.92%和22.99%;单核细胞最大,大小为(9.89±0.70)μm×(8.72±0.68)μm;小淋巴细胞最小,大小为(3.88±0.46)μm×(3.48±0.40)μm。大口黑鲈外周血细胞的免疫相关酶ACP、AKP、PO、POX及细胞成分PAS反应、SBB染色的结果表明,所有红细胞的细胞化学染色均呈阴性,不同白细胞的细胞化学染色特征存在差异。其中所有白细胞的AKP、POX染色均呈阴性,PAS反应均呈阳性,除Ⅱ型粒细胞外所有白细胞的PO、ACP染色均呈阳性,除单核细胞外所有白细胞的SBB染色均呈阳性。大口黑鲈外周血细胞吞噬酵母菌的实验表明,红细胞能够吞噬酵母菌,其吞噬率为(15.70±1.07)%,也观察到部分白细胞吞噬酵母的现象。PO和ACP及脂类和糖类可能是大口黑鲈外周血细胞吞噬作用的重要酶类和能量来源。     

西伯利亚鲟幼鱼骨骼系统解剖研究

为了解西伯利亚鲟(Acipenser baeri)骨骼系统的形态特征, 采用传统的解剖法和透明骨法对西伯利亚鲟幼鱼进行解剖观察, 为西伯利亚鲟在形态学和分类学的研究提供基础资料。结果表明: 西伯利亚鲟幼鱼骨骼系统由主轴骨骼和附肢骨骼两部分构成, 主轴骨骼包括头骨、脊柱和肋骨, 附肢骨骼由鳍条、支鳍骨骼和带骨构成。对比分析发现, 西伯利亚鲟和施氏鲟骨骼系统的组成与构造较为相似, 其原因可能是其对高纬度低水温环境长期适应的结果。     

水生动物进口风险评估综述

随着全球水产养殖业的发展,水产动物活体或水产品贸易日益频繁,不可避免地给进口国带来病原风险,造成疾病引入和传播,甚至生物入侵,严重危害水产养殖业的发展。水生动物进口风险评估(IRA),是指从别国或地区进口水生动物活体包括其受精卵、稚鱼、幼鱼、苗种、成体以及商品等的风险分析。风险分析是指对风险事件进行科学、透明、系统分析的一个过程,它由危害识别、风险评估、风险交流和风险管理4个部分构成。目前,常用的风险评估方法有定性风险评估、半定量风险评估和定量风险评估3种。定性风险评估具有灵活性强、适用范围广、易掌握的特点,能够综合各种资料、数据和信息,尤其适合初次风险评估,但容易受评估人员主观因素的影响。定量风险评估可避免主观因素的影响,评估结果准确、可靠,但需要收集大量数据,工作量巨大,评估成本也很高。通常,定性评估结果若能够提供很好的防范措施,则不必进行定量评估。将外来水生病原阻止在引进之初远比引入后根除更加容易。因此,开展水生动物进口风险评估对于阻止水生动物疾病传播和水生态环境破坏具有重要意义,同时也可为各国进行水产贸易提供参考。     

杂交鲇恶臭假单胞菌的分离鉴定及其病理损伤研究

为确定一起杂交鲇皮肤溃疡症的病原，实验从病鱼体内分离到几株优势菌（DYJ140914-DYJ140917），根据4株分离菌的形态、生理生化特性，结合16S rRNA和gyrB基因序列测定（GenBank登录号分别为KP693689和KP693690）与系统发育分析，将其鉴定为恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）。在此基础上以腹腔注射的方式进行人工感染试验，证实其为杂交鲇溃疡症的病原菌。病鱼组织器官具有典型的病理变化，其主要靶器官为肝脏、皮肤肌肉以及肾间质，分别引起多灶性坏死性肝炎、坏死性肌炎及坏死性间质性肾炎。此外，还可引起心外膜、心内膜炎及坏死性脾炎。药敏结果显示该菌对强力霉素、诺氟沙星和左氧氟沙星等药物敏感；对青霉素、氟苯尼考、磺胺甲基异恶唑、头孢西丁、阿奇霉素等药物耐药。     

Nesfatin-1调节脂肪代谢的研究进展

Nesfatin-1是一种新型饱腹因子,其前体蛋白NUCB2被激素原转化酶裂解为nesfatin-1、nesfatin-2和nesfatin-3等3个片段。Nesfatin-1广泛地分布在中枢神经系统和外周组织中,尤其是在下丘脑、垂体、肝和脂肪组织中大量表达。Nesfatin-1具有调节脂肪代谢、摄食、睡眠、生殖、胃功能、心血管和血糖等多种生物学功能。该文综述了nesfatin-1的发现、结构、组织分布和调节脂肪代谢的机制,以期为肥胖和脂肪肝的防控提供理论依据。     

用PCR-DGGE对岩原鲤×锦鲤杂交F1代进行分子鉴定

运用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术,选用核基因光间受体视黄类物质结合蛋白(IRBP)作为分子标记,成功鉴定了岩原鲤Procypris rabaudi×锦鲤Cyprinus carpio的杂交F1代.DGGE胶图显示,杂交个体IRBP基因的等位基因条带分别与岩原鲤和锦鲤的IRBP基因条带相对应.对各条带切胶回收后的测序表明,岩原鲤等位基因的相似性为99.8％,锦鲤等位基因的相似性为98.8％,而杂交个体等位基因的相似性为95.8％ ～96.7％,与岩原鲤和锦鲤间基因的相似性(95.5％～96.9％)接近.这一方法将有助于鱼类的杂种鉴定和种质研究.     

鲤维生素E缺乏的病理学研究

本试验分别以0、25、50、100mg/kg饲料的维生素E水平进行了鲤维生素E缺乏的病理学和血液学研究。经20周的饲喂试验,各试验组的发病率和死亡率与日粮中维生素E水平呈负相关,其发病率分别为47.5%、22.50%、10.0%和0%,死亡率分别为22.5%、12.5%、5.0%和0%。病鱼出现特征性的背部两侧肌肉萎缩变薄,呈刀刃状的“瘦背病”、脊柱前凸及以突眼、竖鳞和腹水、体侧红肌纤维退色变白为特征的渗出性素质样病变。组织学上最突出的变化表现为营养性肌病、骨骼肌纤维变性、坏死,残存的肌纤维萎缩变细;心肌纤维变性、坏死;肝脏发生营养性肝病,肝细胞变性、坏死,甚至溶解消失,形成溶解灶。在肝细胞内可见大量黄色或棕黄色、圆形或椭圆形的蜡样质沉着。性腺发育障碍,精巢内精原细胞、精母细胞和精子细胞数量显著减少;卵巢发育迟缓,卵母细胞数量减少。胰腺变性、坏死。肾小球肿大,细胞增生,肾小管上皮细胞变性。超微结构上,骨骼肌横纹模糊不清或消失,肌浆凝固,核膜间隙增宽,核固缩;骨骼肌纤维、心肌纤维、肝细胞和肾小管上皮细胞线粒体肿胀,嵴断裂、溶解、有的呈囊泡化,内质网扩张,脱核糖体颗粒。