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肿瘤抑素抗肿瘤相关肽的克隆及生物活性 总被引:4,自引:0,他引:4
为得到肿瘤抑素中具有直接抗肿瘤活性肽并检测其生物学活性,人工合成肿瘤抑素中185~2 0 3位氨基酸(19肽)所对应的核苷酸序列,将其连接到融合蛋白表达载体pTYB2中,酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL 2 1(DE3)中诱导表达.表达的融合蛋白经几丁质亲和层析、二硫苏糖醇(DTT)的柱内还原,直接获得可溶性19肽.利用MTT法,细胞生长曲线,小鼠H2 2腹水型转移型肝癌实体瘤模型抑瘤实验并结合组织病理学切片,研究19肽的生物学活性.获得的19肽对B16小鼠黑色素瘤细胞、人SMMC 772 1肝癌细胞、人脐静脉内皮细胞的生长均具有抑制作用.小鼠H2 2腹水型肝癌抑瘤率达4 8 4 6 % .病理学切片显示,19肽可促使小鼠肿瘤组织坏死,血管数量减少.19肽具有较强的直接抗肿瘤活性,有可能成为肿瘤治疗的一种新的有前景的药物. 相似文献
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目的:构建酵母双杂交系统“诱饵”质粒载体pGBKT7-TACE,并检测其是否具有自身激活及毒性作用。方法:从小鼠肝组织提取总RNA,用RT-PCR的方法获得TACE,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-TACE在MATH-MAKER GAL4 Two-Hybrid System 3中的自激活和毒性作用。结果:本实验成功构建了“诱饵”质粒载体pGBKT7-TACE,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用。结论:构建的诱饵质粒pGBKT7-TACE可应用在酵母双杂交系统中,为筛选小鼠cDNA文库中与TACE相互作用的蛋白奠定实验基础。 相似文献
3.
成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR)基因编辑系统,因其设计简单操作方便和无种属限制,已成为一种广泛应用的基因组定点编辑工具,在复杂的基因组编辑,例如基因的人源化改造以及条件等位基因的构建中有所应用。在自然界中,CRISPR系统拥有多种类别。其中,CRISPR/Cas9系统是研究最深入、应用最成熟的一种。本文针对CRISPR/Cas9系统,分别从基因敲入/敲除片段的大小、同源臂长短、构型即递送方式等技术环节进行综述,阐述不同设计及操作条件下由CRISPR/Cas9系统介导的基因敲入/敲除的效率差异。 相似文献
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免疫检查点程序性细胞死亡蛋白配体-1(programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1)是一种主要表达于肿瘤细胞表面的免疫抑制性分子,其可与T淋巴细胞表面的程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death protein 1,PD-1)结合,抑制T淋巴细胞的激活,发挥免疫抑制性功能。基于这一原理所开发的PD-1/PD-L1免疫阻断疗法,已在临床广泛应用于多种实体瘤的治疗,使诸多病人受益。与此同时,随着对PD-L1调控机制研究的深入,PD-L1的多种翻译后修饰形式陆续得到了鉴定,包括糖基化、磷酸化、泛素化和棕榈酰化等。研究表明,这些翻译后修饰过程可影响PD-L1的蛋白质稳定性与生理功能。因此,翻译后修饰成了PD-L1研究新的切入点。目前,PD-L1翻译后修饰靶向药物已在免疫治疗中展现出良好的应用前景。通过靶向PD-L1翻译后修饰过程,进而调控由PD-L1介导的肿瘤免疫逃逸,成了提高免疫治疗应答率的新思路和新策略。本文将对PD-L1翻译后修饰的研究进行系统总结,并陈述其在免疫治疗领域中的应用前景,希望为未来针对PD-L1翻译后修饰的研究提供理论支持。 相似文献
5.
Bcl-2家族蛋白质在线粒体途径凋亡的调控机制中起着重要的作用,p53正向细胞凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA)是该家族的一种只含有BH3同源区域的促凋亡蛋白。为得到PUMA的BH3结构域短肽并检测其生物学活性,将人工合成的编码PUMA-BH3肽的DNA片段克隆到质粒pTYB2上,构建出表达PUMA-BH3-内含肽-几丁质结合域融合蛋白的原核表达载体pTYB2-PUMA-BH3,转化大肠杆菌BL-21(DE3)中IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经几丁质亲和层析、二硫苏糖醇(DTT)的柱内还原,直接获得可溶性PUMA-BH3肽。通过研究重组PUMA-BH3肽在体外条件下对线粒体活力、线粒体肿胀度以及细胞色素c释放的影响来鉴定其生物学活性。结果表明,获得的可溶性PUMA-BH3肽能作用于离体线粒体,引起线粒体活力降低,线粒体肿胀并能诱导细胞色素c释放。环孢菌素A对此有一定的抑制作用,提示PUMA-BH3肽对线粒体的上述作用是通过促进通透性转运孔( PTP)开放实现的。经原核表达及纯化,获得了具有促凋亡活性的PUMA-BH3肽,为进一步研制控制凋亡过程的药物奠定了基础。 相似文献
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目的:通过测定人绒毛膜癌细胞JEG-3中SEPSECS、TRNAU1AP两蛋白的半衰期,分析JEG-3细胞内SEPSECS、TRNAU1AP两蛋白表达的稳定性.方法:采用蛋白合成抑制剂放线茵酮作用于人绒毛膜癌细胞JEG-3,用MTT法确定放线茵酮对细胞的最适作用浓度,之后用最适浓度的放线菌酮处理JEG-3,利用Western b1ot检测10个时间点SEPSECS、TRNAU1AP蛋白表达量,确定SEPSECS、TRNAU1AP蛋白半衰期.结果:CHX作用于细胞的最适浓度为0.1μg/mL,与对照组相比,SEPSECS蛋白表达量在4h、8h有显著性差异(P<0.01);而TRNAU1AP蛋白表达量在2h、4h有显著性差异(P<0.01).结论:在JEG-3细胞中SEPSECS蛋白的半衰期可能为4h~8h,而TRNAU1AP蛋白的半衰期可能为2h~4h,前者半衰期明显大于后者,由此,可推测SEPSECS蛋白在JEG3细胞中表达的稳定性要高于TRNAU1AP蛋白,同时也为进一步分析二者在其他肿瘤细胞的表达情况提供依据. 相似文献
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2020年初至今,新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情仍在全球多个国家流行,给全球公共卫生安全造成了严重威胁.中国在应对COVID-19的实践中,最先完成病毒核酸测序并共享序列信息,最早有效控制疫情蔓延、恢复生产,并在病毒作用人体机制研究、疫苗研发、中和性抗体发现等环节均处于世界前沿. 其中,针对病毒核酸的检测工作——试剂盒研发、检测配套设备研制、10合1混检策略及相关政策制订,有效提高了疫情防控效率、保障了百姓健康. 本文就严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测多种方法的原理、优劣势及其配套设备等进行综述. 相似文献
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阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是全世界患病人数最多的神经退行性疾病,从神经病理角度来看它具有以β淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)聚集物为主形成的老年斑和Tau蛋白过度磷酸化形成的神经纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)两大特征。黄酮类化合物是广泛存在于水果、蔬菜中的一类多酚类化合物,主要有六大类。多种黄酮类化合物经研究证实具有减轻Aβ沉积以及抑制Tau蛋白过度磷酸化方面的活性。本综述主要描述了AD的两个主要病理特征和黄酮类化合物对其作用的机制。 相似文献
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目的:心肌上的离子通道蛋白与心肌损伤有很大的关系,本研究通过低硒喂养对C57BL/6小鼠心肌组织损伤的影响及其对钾通道蛋白的改变。方法:将实验小鼠分为4组:对照组,低硒30天组,低硒90天组和低硒180天组。采用低硒饲料(硒含量0.0045μg/g)喂养的方法建立低硒小鼠模型,对照组给予正常饲料(硒含量0.256μg/g),与低硒组同时喂养;硒含量的测定和HE染色方法观察心肌损伤情况,Western Blotting方法检测其钾通道蛋白的表达。结果:低硒饲料喂养小鼠的心脏硒含量与正常饲料喂养的硒含量相比明显降低(P0.01);并出现轻微的心肌损伤,钾通道蛋白的表达量在低硒30天组,低硒90天组和低硒180天组下调(P0.01)。结论:成功建立低硒小鼠模型,低硒能引起小鼠心肌损伤,这种改变可能有心脏的钾通道蛋白的表达水平有关。 相似文献
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目的:肠道内的消化酶在MODS发生发展过程中起着关键的作用,有研究发现非结合型胆红素可以灭活胰蛋白酶和糜蛋白酶.基于非结合型胆红素对消化酶的灭活作用,本研究主要探讨非结合型胆红素含量丰富的天然牛黄对多器宫功能障碍综合症大鼠的保护作用.方法:通过腹腔注射无菌石蜡酵母多糖混悬液的方法制作MODS大鼠模型.观察天然牛黄对MODS大鼠的生理状态,生命体征,血气分析,多指标系列生化检测,二胺氧化酶水平,以及心肺肝肾重要脏器病理组织学检查的变化及影响.结果:天然牛黄治疗纽大鼠生命体征,血气分析结果,生化指标,血清DAO水平与MODS模型纽比较,体温、心率、呼吸检测结果显著降低;pH、PaO2、SO2、AB、BE值升高,PaCO2值降低;LDH、ALT、Cr值减少;DAO水平降低,均有显著差异(P<0.05),且心肺肝肾等组织病理变化也有明显改善.结论:天然牛黄能明显恢复石蜡酵母多糖混悬液造模方法引起的MODS大鼠生理状态,生命体征,能有效改善MODS大鼠脏器功能及病理形态,对MODS大鼠具有脏器保护作用.其机制可能是非结合型胆红素灭活消化酶所致,待进一步研究. 相似文献