伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液稳定性研究

目的评价伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液的稳定性,为该疫苗原液的制备、储存提供有力的数据支持。方法选取3批伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液分别放置于(37±2)℃、(25±2)℃和2~8℃温度下,根据稳定性研究方案定期取样,对其主要评价指标(多糖含量、结合物含量、相对分子质量、鉴别试验)进行检测,评估疫苗原液的稳定性。结果伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液于2~8℃放置22个月,(25±2)℃放置52 w,(37±2)℃放置24 w时,各项主要评价指标均符合其质量标准的要求。结论伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液稳定性良好,在2~8℃可稳定存放22个月。     

用邓小平同志建设有中国特色的社会主义理论武装思想

用邓小平同志建设有中国特色的社会主义理论武装思想党伴（卫生部兰州生物制品研究所，兰州７３００４６）以加快改革开放和现代化建设步伐为主题的党的第十四次全国代表大会鲜明地提出，要用邓小平同志建设有中国特色的社会主义理论武装全党。这是在新的历史时期，党的建...     

人源天然ScFv噬菌体抗体库的构建及鉴定

噬菌体抗体库技术是获得治疗性抗体的一条重要途径。以20份健康人外周血为样本，通过提取淋巴细胞、逆转录－PCR（RT PCR）、抗体可变区基因的扩增、重叠PCR获得单链抗体（ScFv）基因，将ScFv克隆入噬粒载体，通过近300次的电转化获得了库容量为1.3×109的全人源天然ScFv噬菌体抗体库。通过随机挑克隆测序和用5种不同抗原筛选对抗体库进行了初步验证。随机测序表明抗体库具有较好的多样性，用5种不同抗原对其进行筛选，均获得了特异性噬菌体抗体的不同富集，表明成功构建了一个多样性良好的人源天然ScFv噬菌体抗体库。     

间苯二酚显色法测定唾液酸含量的影响因素

目的探讨间苯二酚显色法测定唾液酸含量的影响因素,保证试验结果的一致性和准确性。方法按照《中国药典》2015版(三部)规定的唾液酸含量测定方法,分析单糖和二糖、载体蛋白质、不同溶液及化学试剂对该方法测定结果的影响;比较加热时间、加入有机相后的放置时间对检测结果的影响。结果选用的不同单糖和二糖中,蔗糖对试验的影响最大,低中高浓度时吸光值分别为0.065、0.196、0.420;其次是核糖,3种浓度的吸光值分别为0.037、0.113、0.187;高浓度的半乳糖、葡萄糖和乳糖的吸光值在0.02左右,对试验结果有一定影响,低浓度时对试验的影响可以忽略不计。N-乙酰甘露糖胺在低中高浓度时对结果均无影响。破伤风类毒素、重组绿脓杆菌外毒素A、小牛血清白蛋白、白喉类毒素对检测结果无影响,在500μg/m L质量浓度时吸光值均在0.008以下。选用的不同溶液对试验均无影响。选用的化学试剂中乙醇、低浓度的碳二亚胺以及己二酰肼对试验结果均无干扰,丙酮和脱氧胆酸钠均会对试验造成较大影响。反应液的吸光值随着加热时间的延长而增加,吸光值随着放置时间的延长而降低;第一小时内吸光值下降9%左右。结论在质控过程中,这些外源物质及操作过程对唾液酸含量测定结果有一定影响,应严格按照质量控制标准执行操作。     

牛肾组织及其培养物的不同消化法效果评价

为了比较不同消化液及消化方式对牛肾皮质组织和培养后形成单层细胞的消化分散效果并确定最适消化液和消化方式,分别用0.25%胰蛋白酶和0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA两种消化液,消化牛肾皮质组织及其培养形成的单层牛肾皮质细胞。牛肾皮质组织采用热(37℃)和冷(4℃)两种消化方式;经培养形成单层的牛肾皮质细胞采用室温(25℃)消化。结果显示,用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化液热消化牛肾组织时,分散获得牛肾皮质细胞的活细胞数、存活率、贴壁率均优于其他消化方法,差异显著(P0.05)。培养形成的单层牛肾皮质细胞用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化液的消化速度明显快于用单一0.25%胰蛋白酶消化液的消化速度,统计学分析显示具有显著性差异(P0.01),两种消化液消化所得细胞的存活率及贴壁率前者要更高,差异显著(P0.05)。     

迎接信息革命时代的到来

迎接信息革命时代的到来王秉瑞（卫生部兰州生物制品研究所，兰州７３００４６）（一）信息技术是现代文明的技术基础，是科学研究和技术开发中不可缺少的技术手段，是高技术中的关键技术，它以微电子技术为基础，以计算机和通信技术为主体，并渗透到各种传统技术之中，形...     

硫酸-咔唑微孔板法检测肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量

目的利用微孔板检测肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量,并对该方法进行验证及初步应用。方法以微孔板为反应容器,对常规硫酸-咔唑法的咔唑质量浓度和加热时间进行优化;并对建立的方法进行线性范围、精密度以及准确度的验证及初步应用。结果最佳的咔唑质量浓度为0.10 mg/m L,加热时间为20 min。标准品D-葡萄糖醛酸在4~40μg/m L范围内,其质量浓度与校正后吸光值呈良好的线性关系,r2>0.99;批内及批间CV值分别为1.54%~3.02%及4.53%~7.75%;加入5μg/m L、10μg/m L、20μg/m LD-葡萄糖醛酸的8-160502、9V-160102、22F-160103荚膜多糖,D-葡萄糖醛酸的回收率为92.21%~110.47%。微孔板法校正前与常规方法在测定肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量时差异无统计学意义(P>0.05),与校正后结果差异有统计学意义(P<0.05)。微孔板法测定分子质量分布与常规方法有较好的一致性。结论硫酸-咔唑微孔板法可有效检测肺炎球菌荚膜多糖中糖醛酸含量,操作简便快捷,精密度和准确度良好,可用于肺炎链球菌荚膜多糖疫苗的质量控制。     

细菌多糖中氧乙酰基特性的研究进展

许多细菌多糖中都存在氧乙酰基,氧乙酰化修饰发生在多糖合成后,对细菌功能和免疫原性都有重要的意义。就细菌多糖合成机制及氧乙酰化修饰多糖机理,氧乙酰基对细菌荚膜多糖免疫原性的影响,细菌性疫苗中氧乙酰基质控,脑膜炎球菌荚膜多糖氧乙酰基漂移等研究进展进行综述。     

布氏菌104M变异株毒力及保护力研究

目的研究皮上划痕人用布氏菌活疫苗104M变异株的残余毒力及保护力。方法对布氏菌104M变异株进行菌种检定。通过测定布氏菌104M变异株与未变异株的半数致死量(50%lethal dose,LD50),比较两者的残余毒力;用布氏菌104M变异株与未变异株分别免疫小鼠,4周后用羊型弱毒或强毒布氏菌皮下攻击,4周后测定脾脏细菌数,比较布氏菌104M变异株与未变异株的保护效果。结果菌种检定结果显示,布氏菌104M变异株与未变异株分别符合变异及未变异布氏菌株特征。104M未变异株LD50为1.1×109,变异株LD50为2.2×1010。用羊型弱毒及强毒布氏菌攻击后,布氏菌104M变异株与未变异株均具有较好的保护效果,但104M变异株保护力低于未变异株,差异具有统计学意义(P0.05)。结论布氏菌104M变异株残余毒力比未变异株明显降低,保护力略低于未变异株。     

人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的构建及验证

目的利用人源抗狂犬病病毒ScFv噬菌体抗体库,构建单克隆抗体(单抗)轻、重链质粒,瞬时表达,纯化后验证具有高中和活性的单抗。方法以从ScFv噬菌体抗体库中筛选获得特异性抗体为模板,PCR扩增抗体轻、重链可变区序列,构建人源全分子抗体瞬时转染质粒;轻、重链质粒混合后转染HEK293 EBNA1细胞,瞬时表达全分子抗体。采用Mabselect SuRe介质手动亲和纯化抗体,Nano Vue超微量分光光度计测定蛋白质的质量浓度,快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test, RFFIT)进行体外中和效价验证。结果成功构建22个轻链质粒,15个重链质粒。通过真核细胞瞬时表达后,经手动亲和纯化后,获得22株单抗。除1株抗体外,其余21株抗体的蛋白质量浓度均>300μg/mL;部分抗体纯度均在90%以上。中和活性结果显示,5株在1 500~1 800 IU/mg之间;8株在800~1 500 IU/mg之间;7株在500~800 IU/mg之间;其余2株在500 IU/mg以下。结论成功构建并验证获得20株中和活性>500 IU/mg的人源抗狂犬病病毒单抗,为单抗混合制剂的研究奠定了基础。